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目的 建立乙型肝炎病毒(HBV)复制状态模型。方法 体外连接HBV DNA获得6.4 kb的双拷贝DNA片段,然后将其插入pcDNA3载体的Eco RV位点,通过聚合酶链反应(PCR)和酶切筛选获得头尾串联双拷贝HBV全基因重组真核表达质粒,再通过脂质体介导法转染肝癌细胞。结果 通过G418筛选,对阳性克隆细胞进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western免疫印迹分析,证明已将HBV全基因重组真核表达质粒转染至肝癌细胞并获得稳定表达。结论 通过脂质体介导法将HBV全基因转染至肝癌细胞,成功建立了HBV复制状态的细胞模型。 相似文献
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噬菌体随机肽库筛选抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶单抗2A5的识别表位 总被引:1,自引:1,他引:0
目的利用噬菌体随机肽库技术筛选恶性疟原虫乳酸脱氢酶(pfLOH)抗体2A5的识别表位。方法以抗pfLDH的单抗2A5筛选噬菌体随机12肽库,挑取阳性克隆测定DNA序列,推导其氨基酸序列并进行同源性分析。通过ELISA、竞争抑制试验鉴定获得的噬菌体短肽与单抗2A5之间的结合特性。结果从噬菌体随机12肽库中筛选出21株可与2A5单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列SQK(R)L,该序列与pfLDH的一级序列具有一定同源性。竞争抑制实验显示,带有核心序列的噬菌体克隆可与pfLDH竞争结合单抗2A5。结论 SQK(R)L是pfLDH单抗2A5特异识别的表位。 相似文献
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目的在大肠杆菌中表达一种新近发现的抗凋亡蛋白Fortilin。方法用RT-PCR方法,从肺腺癌细胞中扩增出编码Fortilin蛋白的基因(GenBank中编码该蛋白的基因名为TPT1),克隆入pGEX-4T-1表达载体;重组质粒转入E.coliBL21(DE3),诱导表达Fortilin蛋白,并对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果经双酶切及核酸序列分析鉴定,重组质粒pGEX-4T-1/TPT1成功构建,诱导后能高效表达可溶性Fortilin融合蛋白,SDS-PAGE及Western-blot验证该蛋白,表达的融合蛋白分子量为45000,与预期理论值相符。结论Fortilin蛋白在大肠杆菌中以融合蛋白形式进行表达,可提高其在宿主细胞中的稳定性和可溶性,且在大肠杆菌中获得高效表达,获得了充足的活性蛋白,这为进一步了解该蛋白的生物学功能,研究其抗凋亡机制奠定了基础。 相似文献
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目的 对广州市达瑞生物技术股份有限公司的促黄体生成素定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)进行临床应用研究及临床性能评价. 方法 采用平行、盲法、对照试验设计,用达瑞生物公司试剂盒检测335例样本,以雅培公司的促黄体生成素测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)作为对照试剂盒,罗氏公司的促黄体生成素检测试剂盒(电化学发光法)作为复核试剂盒.操作按各试剂盒说明书进行,对达瑞生物公司试剂盒的符合率和相关性进行计算分析. 结果 同雅培公司试剂盒比较,达瑞生物公司试剂盒检测血清样品异常符合率为95.8%,正常符合率为95.2%,总符合率为95.4%,Kappa值为0.898 (P<0.01).线性回归方程为Y=0.358+0.961X,两者测定值接近,相关系数为0.988(P<0.01),相关性良好.同血清检测结果相比,血浆检测结果Kappa值为1.000(P<0.01),线性回归方程为Y=0.120+0.966X,相关系数r值为0.999 (P<0.01),相关性良好.特异性样本检测结果均为正常. 结论 本试剂盒检测性能可以满足临床应用的需要. 相似文献
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免疫层析试验与镜检法、聚合酶链反应诊断疟疾的比较 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 评价免疫层析试验 (ICT)诊断疟疾的临床应用价值。方法 以镜检法和聚合酶链反应 (PCR)为对照 ,同时用ICT检测 89份门诊可疑疟疾感染患者的血标本。结果 ICT与镜检法和PCR比较 ,阳性检出符合率分别为 93 .4 %和 86.4 % ;敏感性分别为 90 .16%和 83 .3 3 % ;特异性分别为92 .86%和 91.3 0 %。当虫体密度 >10 0个 / μl时 ,ICT的敏感性为 10 0 % ,虫体密度 <10 0个 / μl时 ,敏感性为 72 .73 % ,虫体密度 <5 0个 / μl时 ,敏感性降低到 66.67%。 结论 ICT适用于疟疾检测的初筛 ,但尚不能完全替代镜检法 相似文献
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目的构建人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10荧光蛋白真核表达载体,并转染肝癌细胞,筛选建立稳定转染细胞株。方法从构建好的pMD19-T/UbcH10载体中PCR扩增UbcH10基因,PCR产物双酶切后克隆入pEGIZP—N1真核表达载体中,构建真核表达载体pEGFP—N1/UbcH10,进行双酶切和测序鉴定。将构建好的真核表达载体pEGFP—N1/UbcH10和空载体pEGFP—N1利用脂质体Lip2000^TM分别转染进入肝癌细胞SMMC7721中,建立肝癌细胞SMMC7721的G418细胞死亡曲线,选择G418的筛选浓度,经G418结合荧光显微镜观察筛选稳定转染细胞。将筛选获得的肝癌细胞进行有限稀释法单克隆化,收集单个细胞克隆扩大培养备用。结果经双酶切和测序鉴定,带有荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP—N1/UbcH10构建成功,经脂质体介导真核表达载体pEGFP—N1/UbcH10和空载体pEGFP-N1成功转入肝癌细胞SMMC7721中,经800μg/mL G418筛选并进行单克隆化获得稳定转染的细胞株SMMC7721-pEGFP—N1和SMMC7721-pEGFP-N1/UbcH10,阳性转化率达到94%以上。结论人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10稳定高表达肝癌细胞株的建立,为该蛋白在肝癌发生发展过程中的具体作用机制的研究奠定了基础。 相似文献
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目的建立游离雌三醇(uE3)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0.14nmol/L,线性范围为0.14—120nmol/L,回收率为97.7%。分析内和分析间变异系数分别为1.6%-4.1%和4.4%-8.8%。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0.24%、0.36%和0.40%。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0.925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。 相似文献
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目的对自制时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂盒进行临床应用研究,为该试剂盒临床应用及临床疗效评价提供科学依据。方法收集血清标本326份,用自制试剂盒按试剂盒操作说明书对血样进行测定,并以化学发光法(R oche)为对照方法,W ALLAC公司的CEA时间分辨免疫测定药盒(A u toDELF IATMhCEA)作为复核试验,获取相关目标实验数据,并计算得“真实性”和“可靠性”等统计学数据。结果以化学发光法为对照试验,其阳性符合率为95.83%,阴性符合率为98.73%,检验无显著性差异;自制试剂盒的定量测定值与化学发光法的测定值较为一致,相关系数达0.93,相关性好。结论试剂盒检测性能与现在临床广泛应用的方法相仿,能满足临床应用的需要。 相似文献