糖尿病肾病肾组织纤维化发病机制的研究进展

肾组织纤维化是糖尿病肾病最终发展为慢性肾功能衰竭的病理特征，其机理涉及多种因素，确切机理尚不明了。本文综述了近年来肾小球硬化、肾小管间质纤维化及信号传导通路在糖尿病肾病肾组织纤维化发病机制方面的研究进展。     

SGK1在糖尿病小鼠肾脏皮质中时间差异性表达及意义

目的：研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（serum and glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1）在糖尿病（DM）小鼠肾脏皮质中时间上差异性表达及意义。方法: 采用链脲佐菌素（STZ）单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型。将2月龄C57BL/6小鼠随机分成10组：第1、2、3、4、6、8、12周糖尿病小鼠组（DM₁、DM₂、DM₃、DM₄、DM₆、DM₈、DM₁₂）和相应的第1、4、8周正常对照组（N₁、N₄、N₈）。分别在DM模型制作成功后第1、2、3、4、6、8、12周末收集小鼠24 h尿量，检测24 h尿蛋白量；观察肾脏病理改变；半定量RT-PCR检测小鼠肾脏皮质SGK1及结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达，Western blotting检测N₄、DM₄、DM₈组皮质SGK1、CTGF蛋白的表达。结果: 随着糖尿病病程的进展，DM组小鼠肾小球体积逐渐增大、系膜区逐渐增宽；DM组小鼠24h尿蛋白从第2周起开始逐渐增多，肾脏皮质SGK1 mRNA表达从第2周开始明显上调，在第４周达到峰值。CTGF随着糖尿病病程的进展表达逐渐递增。结论: SGK1在糖尿病早期肾脏表达峰值的出现及CTGF 持续递增的表达，提示SGK1在糖尿病肾病肾脏纤维化的发生发展过程中起重要作用。     

肺心病患者尿检视黄醇结合蛋白及转铁蛋白的临床意义

采用酶联免疫法检测２４ 例肺心病患者和３０ 例健康中老年人的尿视黄醇结合蛋白 （ＲＢＰ）, 转铁蛋白（ＴＲＦ） 水平。同时测定其血尿素氮（ＢＵＮ）, 肌酐 （Ｃｒ）。结果： 肺心病患者尿ＲＢＰ、ＴＲＦ水平较对照组显著升高 （Ｐ＜ ０．０１）,其中合并心衰患者较无合并心衰者的尿ＲＢＰ、ＴＲＦ水平有显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）。表明患肺心病患者确存在肾功能的损害, 动态观察尿ＲＢＰ、ＴＲＦ水平变化是判断其早期肾功能损害的敏感方法, 能够早期发现肺心病患者的肾功能损害并判断其损害部位及程度     

高糖通过SGK_1通路促进人肾小球系膜细胞合成结缔组织生长因子

目的研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在高糖诱导人肾小球系膜细胞(HMC)产生结缔组织生长因子(CTGF)中的作用,探讨SGK1在糖尿病肾病(DN)肾小球硬化中的作用机制。方法HMC分为低糖组(5·5mmol·L-1D-葡萄糖)、高糖组(25mmol·L-1D-葡萄糖)和甘露醇对照组(19·5mmol·L-1甘露醇和5·5mmol·L-1D-葡萄糖),刺激24、72h后,采用RT-PCR方法和West-ernblot方法检测CTGFmRNA及蛋白的表达;将带有SGK1显性激活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-S422DhSGK1,SD)和带有SGK1显性失活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-K127NhSGK1,KN)分别瞬时转染HMC;同时,设空质粒(PIRES2-EGFP,FP)转染组和未转染组(NT)为对照。分别用低糖(LG,5·5mmol·L-1D-葡萄糖)和高糖(HG,25mmol·L-1D-葡萄糖)刺激24、72h后,采用RT-PCR方法和Western blot方法检测CT-GF的mRNA及蛋白的表达。结果与低糖组和甘露醇组相比较,在高糖刺激下,HMC中CTGF mRNA及蛋白的表达明显上调;低糖环境下,转染SD的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGFmRNA和蛋白的表达明显增加。转染KN的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达差异无显著性;高糖环境下转染SD的HMC与转染KN、转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达明显增加。转染KN的HMC与转染FP、NT组比较,其CTGF mRNA和蛋白的表达明显减少。结论在DN中,高糖能促进HMC的CTGF mRNA及蛋白的表达,并且可以通过SGK1介导的信号通路来诱导人肾小球系膜细胞增加合成CTGF,这种新发现的信号通路,表明SGK1可能通过促进CTGF的合成来参与糖尿病肾病肾小球纤维化的发生。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶在糖尿病肾病小鼠中的表达及意义

目的 探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)在糖尿病肾病(DN)早期病变中的表达及意义。方法 采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠DN模型,设DN组和正常对照组(NG)。在DN模型4周时,检测肾小球细胞外基质(ECM)、肾重指数、24 h尿蛋白量和Ccr;RT-PCR检测DN病变早期肾皮质SGK 1、SGK 2、SGK 3及Ⅰ型胶原α2(Col Ⅰα2)、纤连蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达;Western印迹检测SGK1蛋白的表达。结果 与NG组相比,DN组小鼠肾重／体重、24 h尿蛋白量,ECM相对面积,Ccr均显著增加。肾皮质Col Ⅰ α2、FN、TGF-β1 mRNA表达显著上调,同时SGK1 mRNA、SGK2 mRNA、SGK3 mRNA及SGK1蛋白表达显著上调。而且SGK1、SGK2、SGK3的mRNA表达与Col Ⅰ α2,FN,TGF-βl mRNA表达均有显著正相关关系。结论 SGK在DN肾脏中有较高表达,伴随有ECM积聚,与Col Ⅰα2,FN,TGF-β1 mRNA表达有显著正相关,它可能在DN早期病变中起重要作用。     

SGK1超表达对人足细胞合成纤连蛋白的影响

目的： 研究高糖刺激对人足细胞血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）和纤连蛋白（FN）表达的影响，以及SGK1超表达和灭活条件下FN的合成变化，揭示SGK1介导的信号转导途径在高糖诱导足细胞细胞外基质聚集，引发早期糖尿病肾损害过程中的作用。方法: 高糖刺激人足细胞24 h，Western blotting方法检测SGK1和FN蛋白水平的表达。利用构建好的SGK1激活型质粒（pIRES2-EGFP-SGK1SD）、灭活型质粒（pIRES2-EGFP-SGK1KN）和空载体（pIRES2-EGFP）分别转染人足细胞，免疫荧光方法检测足细胞合成FN的水平。结果: 人足细胞中存在SGK1的表达，高糖刺激SGK1表达上调(50±4 vs 35±3)，与此同时，FN合成亦明显增加(19±4 vs 12±2)。SGK1SD转染的足细胞中FN合成明显增加，相反，SGK1KN转染的足细胞中FN合成明显减少。结论: SGK1参与了高糖诱导的人足细胞FN的合成，可能在糖尿病肾病早期足细胞的受损活化过程中发挥重要作用。     

高糖通过血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1通路促进人近端肾小管上皮细胞合成纤连蛋白

目的 研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在高糖诱导人近端肾小 管上皮细胞(HKC)产生纤连蛋白(FN)中的作用,探讨SGK1在糖尿病肾病(DN)肾小管间质纤 维化中的作用机制。方法 将带有SGK1显性激活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-S422DSGK1 mutant, SD)和带有SGK1显性失活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-K127NSNSGK1 mutant,KN)分别瞬时转染 HKC;同时,设空质粒(pIRES2-EGFP,FP)转染组和未转染组(NT)为对照。分别用正常糖(NG, 5.5 mnlol／L D-葡萄糖)和高糖(HG,25 mmol/L D-葡萄糖)刺激8 h后,采用RT-PCR和Western 印迹来观察SGK1和FN的mRNA及蛋白的表达。结果 正常葡萄糖环境下转染SD和KN后, HKC合成的FN mRNA和蛋白的表达没有显著性改变。高糖环境下,转染SD的HKC与其它组 比较,其SGK1mRNA表达显著性增高(P<0.01),SGK1蛋白过度活化(P<0.01),其FN mRNA和 蛋白的表达显著增加(P<0.01)。转染KN的HKC与其它高糖组HKC比较,其活化的SGK1蛋 白显著减少(P<0.01),其合成FN mRNA和蛋白亦显著减少(P<0.01)。结论 高糖诱导HKC 的FN mRNA和蛋白的表达增加是依赖于SCK1的表达与活化,提示在DN中,高糖能通过SGK1 介导的信号通路来诱导人近端肾小管上皮细胞过度合成FN,促进肾小管间质纤维化。     

高糖对人肾小管上皮细胞和系膜细胞表达血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1的影响

目的研究高糖作用下人近端肾小管上皮细胞(HKC)和系膜细胞(HMC)中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)的表达,并初步探讨SGK1在介导高糖致肾细胞(HKC和HMC)过度合成细胞外基质(ECM)中的作用。方法将HKC和HMC细胞分别分为正常对照组(NG组,5.5mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(HG组,25mmol/LD-葡萄糖)和渗透浓度对照组(MG组,19.5mmol/L甘露醇和5.5mmol/LD-葡萄糖)。SGK1mRNA水平及蛋白水平的检测分别采用RT-PCR方法和Western印迹方法。培养液中纤连蛋白(FN)水平检测采用ELISA方法。结果HKC和HMC中均存在SGK1基因和蛋白的表达。HMC中SGK1的表达明显高于HKC(P<0.01)。高糖刺激8h后,两种细胞SGK1表达均明显升高(P<0.01);同时,甘露醇也上调HKC和HMCSGK1的表达(P<0.01),但其作用明显弱于高糖(P<0.05)。FN在高糖环境下表达上调,且高峰出现时间滞后于SGK1。结论高糖能促进近端肾小管上皮细胞和系膜细胞SGK1的表达,并可能通过SGK1介导的信号转导途径在糖尿病肾病ECM积聚中发挥重要作用。     

Significance and Expression of Serum and Glucocorticoid-inducible Kinase in Kidney of Mice with Diabetic Nephropathy

To investigate the expression and the role of three isoforms of Serum and Glucocorticoidinducible Kinase (SGK) in experimental diabetic nephropathy (DN), 12 male C57BL/6 mice of 8-weeks-old were divided into two groups. Streptozotocin (STZ)-induced diabetic nephropathy and normal controls were analyzed at the end of the 4th week after the induction of diabetes. Renal hemodynamics and histological studies were performed. The expression of SGK1 mRNA, SGK2 mRNA and SGK3 mRNA of kidney cortex were measured by RT-PCR, and the cortical SGK1 protein was detected with Western blotting. Our results showed that the blood glucose, blood HbA1c, 24h urinary protein, creatinine clearance and the renal index were all increased in DN group. More extracellular matrix (ECM) accumulation was observed. The level of cortical SGK1 mRNA and protein were up-regulated in DN group in comparison with control group. SGK2 and SGK3 mRNA were elevated in DN mice. In DN, mRNA level of three SGK isoforms and SGK1 protein were increased significantly. It is concluded that SGKs may contribute to the early renal injury of DN.