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1.
本实验采用随机引物法标记探针DNA.探针DNA加热变性成单链,以单链DNA为模板,六聚脱氧核苷酸为引物,在DNA多聚酶I大片段的作用下进行放射性标记.标记探针的比放射性达10~8cpm/μg DNA以上.放射性底物的掺入率为60%.用该方法标记的人高度重复顺序探针,可以检出微微克水平的阳性分子.与人HeLa S_3细胞DNA转化的小鼠LTK~+细胞DNA打点杂交呈阳性,与未经转化的小鼠LTK~-细胞DNA杂交为阴性,证明小鼠转化细胞中存在HeLa细胞DNA,DNA转化是成功的. 相似文献
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RP-HPLC测定不同产地青木香和细辛中马兜铃酸A的含量 总被引:14,自引:2,他引:14
目的 :测定不同地区市售青木香、细辛中马兜铃酸A的含量 ,用于指导临床用药和相关研究。方法 :应用高效液相色谱法 ,选用AlltechC18色谱柱 (4.6mm× 250mm ,5 μm) ,甲醇 水 醋酸 (68∶32∶1)为流动相 ,流速为 1.0mL·min-1,柱温为 35℃ ,紫外检测波长为 390nm。结果 :马兜铃酸A在 0.119~ 1.89μg有良好的线性关系 ,平均加样回收率为 101.8% ,RSD为 2.09%。不同产地青木香中马兜铃酸A的含量在 0.916 9~ 1.907 6mg·g-1,其中以河北安国产青木香的含量较高 (1.90 76mg·g-1) ;细辛中马兜铃酸A的含量在 0~ 35 1g·g-1,其中以吉林市售品含量较高。结论 :本方法精密度高 ,重现性好 ,可用来含马兜铃酸类中药材中马兜铃酸A的含量测定 ;含马兜铃酸的中药中以关木通中马兜铃酸A的含量最高 ,青木香中的含量约为关木通中的含量的 1/3,细辛的含量最低。 相似文献
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对单刀根内生真菌Penicillium dangeardii次生代谢产物的化学成分进行了研究,利用凝胶Sephadex LH-20柱色谱、反相硅胶柱色谱、HPLC制备液相等多种色谱方法从菌液中分离得到了5个化合物,运用质谱、核磁等波谱技术鉴定其结构分别为:N-[9-(β-D-核糖)-9H-嘌呤-6]-L-天冬氨酸(1),3-咖啡酰基奎尼酸(2),4-咖啡酰基奎尼酸(3),5-咖啡酰基奎尼酸(4),3-羟基-苯甲酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5). 相似文献
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选用PDB培养基发酵菌株,对内生真菌Penicillium polonicum次生代谢产物进行化学成分研究。结合运用凝胶Sephadex LH-20柱色谱、反相柱色谱和制备HPLC等多种色谱技术的方法从菌液的乙酸乙酯萃取物中分离鉴定了6个化合物,采用波谱学方法鉴定其结构分别为[3,5-二羟基-2-(7-羟基-辛酰)]-苯乙酸乙酯(1),(3,5-二羟基-2-辛酰)-苯乙酸乙酯(2),(5,7-二羟基-9-庚基)-异苯二氢吡喃-3-酮(3),3-(羟甲基)-4-(1E)-1-丙烯-1-基-(1R,2S,5R,6S)-7-氧双环[4.1.0]庚-3-烯-2,5-二醇(4),(E)-2-甲氧基-3-(1-丙烯基)苯酚(5),对羟基苯乙醇(6)。 相似文献
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对传统的Southern杂交法进行了改进:用碱变性和酚抽提法提取重组质粒,省去氯化铯梯度离心;用随机引物合成法代替缺口翻译,直接标记质粒,不进行限制性内切酶消化和琼脂糖电泳分离探针DNA片段;用酒精沉淀法代替柱层析收集标记的放射性探针.用低熔点琼脂糖法提取细胞染色体DNA,经酶切电泳,将凝胶板干燥,进行原位杂交;杂交液采用0.5%脱脂奶粉,以代替Danhardt's溶液和鲑鱼精子DNA.用此法检测了4株急性淋巴细胞白血病细胞株,发现只有1株T细胞未发生免疫球蛋白重链基因重排,其余3株B细胞两条重链均已发生重排.此法简便、灵敏,可用于白血病临床诊断. 相似文献
7.
HPLC测定独一味中木犀草素苷的含量 总被引:1,自引:0,他引:1
独一味Lam iophlom is rotate(Benth·)Kudo为唇形科独一味属Lam iophlom is仅有的一种植物,早在1 000多年前的藏医学名著《四部医典》和《晶珠本草》中已有记载,是藏药中的主要药物,藏医将其用于骨髓炎、关节黄水病、骨折、跌伤、枪伤、筋骨疼痛、跌打瘀痛等[1]。经现代临床医学证明其具有较好的止血、镇痛、活血化瘀、抗菌消炎、抑菌作用和显著提高免疫系统的功能[2]。独一味的有效成分主要包括以木犀草素苷为代表的黄酮苷和 相似文献
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蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛含量测定 总被引:4,自引:1,他引:4
目的:建立蟾皮中蟾蜍噻咛的含量测定方法,比较不同产地及养殖方式对蟾皮中蟾蜍噻咛含量的影响。方法:采用高效液相色谱法测定了不同产地蟾皮中蟾蜍噻咛的含量,色谱柱Lichrosob C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(10∶90),检测波长225 nm,流速1.0 mL.min-1。结果:回归方程为Y=7.489×104+2.791×105X,r=0.999 9,平均回收率为99.2%,蟾皮中蟾蜍噻咛的质量分数在36.4~641.8μg.g-1,华蟾素注射液中的质量分数在22.47~33.16μg.mL-1。结论:蟾皮中蟾蜍噻咛在野生和养殖品种中的差异较大。该方法快速简便,重复性良好,可用于蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛的含量测定。 相似文献
9.
前言提取质粒DNA的方法很多,目前常用的方法有酸酚法、两相法、碱变性法等。但这些方法都不易将质粒DNA中的RNA去除干净,这样不但会影响质粒DNA中的准确定量,酶切DNA片段的分离,而且会影响DNA片段的5′末端以r[~(32)P]-ATP和多核苷酸激酶的标记。氯化铯梯度离心虽然能将质粒DNA中的RNA去除干净,但此法需要贵重的仪器超速离心机和氯化铯。羟基磷灰石柱层析也可去除质粒DNA中的RNA,但在柱层析之前一般是采用溶菌酶和TritonX-100将菌体裂解,然后25000rpm 相似文献
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采用GPY培养基对格木内生真菌烟曲霉Aspergillus fumigatus菌株进行培养发酵,发酵产物经冻融处理后分离得到菌液与菌丝体.菌丝体经乙醇提取后,分别用乙酸乙酯和正丁醇萃取,根据肿瘤细胞毒活性筛选结果,选择菌体的乙酸乙酯萃取物进行化学成分研究.运用硅胶色谱柱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱、反相柱色谱和制备HPLC等多种色谱技术,采用波谱学方法从中分离鉴定了5个二酮哌嗪化合物,其结构分别为cyclo-(R-Pro-R-Phe)(1),cyclo-( trans-4-OH-D-Pro-D-Phe)(2),cyclo-(R-Tyr-S-Ile)(3),cyclo- (R-Phe-S-Ile)(4),cyclo-(R-Val-S-Tyr) (5). 相似文献