皖南地区眼镜蛇毒活性组分外用镇痛的效应及机制研究

目的: 探讨皖南地区眼镜蛇毒活性组分（cobra venom analgesic factor, CVAF）外用镇痛的效应及其可能的作用机制。方法: 雄性SD大鼠分为生理盐水对照组(NS组)、完全弗氏佐剂炎痛组（CFA组）、双氯芬酸钠镇痛阳性对照组（CFA+SL组）、氟比洛芬镇痛阳性对照组（CFA+FB组）、CVAF镇痛实验组（CFA+CVAF组）,比较观察CVAF凝胶局部外用的镇痛效果。分别采用热刺痛仪及机械压痛仪测定各组大鼠痛阈,ELISA法检测各组大鼠脊髓匀浆中IL-1、TNF-α的含量,HE染色法观察大鼠足趾组织病理变化。结果: 与CFA组比较,CVAF镇痛组大鼠在给药后的第7日和第14日的体质量差异具有统计学意义(P<0.05、P<0.01),CVAF组大鼠的机械压痛阈和热痛阈都有所提高（P<0.01）,脊髓匀浆中IL-1、TNF-α的浓度相对减少,差异有统计学意义（P<0.01）,在HE染色中,CVAF组大鼠足趾组织水肿明显减轻,炎性浸润相对不显著。结论: 皖南地区CVAF凝胶局部外用可提高炎痛大鼠热痛阈和机械压痛阈,其机制可能与减少炎症介质释放,抑制炎症反应有关。     

皖南蝮蛇毒抑瘤组分I对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠体内抑制作用的研究

目的:研究皖南蝮蛇毒抑瘤组分I(Agkistrodon halys venom antitumor component I,AHVAC-I)对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠的体内抑制作用及瘤细胞增殖活性变化,并初步探讨其作用机制。方法: 取生长状态良好的浓度为1×10⁷个/mL的SGC-7901人胃癌细胞悬液 0.1 mL 接种于裸小鼠右侧腋窝皮下,待其成瘤后随机分为模型组、紫杉醇阳性对照组、AHVAC-I高、中、低剂量组,隔日连续给药5次,定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,HE染色观察瘤体形态学变化,免疫组化SP法检测Ki-67增殖指数,原位末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果: AHVAC-I在 1.0 mg/kg 剂量时对SGC-7901细胞有抑制作用,抑瘤率达 42.2%;在 3.0 mg/kg 剂量时有显著抑制作用,抑瘤率达 78.5%。实验组肿瘤内Ki-67阳性细胞数量下降,凋亡细胞明显增多。结论:AHVAC-I能明显抑制裸鼠体内SGC-7901人胃癌细胞的生长,其作用机制可能与诱导胃癌细胞发生凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。     

蝮蛇毒血小板抑制因子对动脉血栓形成的影响及机制研究

目的: 探讨皖南蝮蛇毒血小板抑制因子(AHV-PI) 对家兔动脉血栓形成的影响及可能机制。方法: 新西兰家兔24只,随机分成假手术组、动脉血栓模型组、阳性对照组(奥扎格雷钠,5 mg/kg),AHV-PI(0.1 mg/kg)实验组共4组,每组6只。应用70% FeCl₃溶液化学损伤的方法来制备家兔颈动脉血栓模型,采用血栓弹力仪(TEG)描计血栓弹力图,比浊法测定家兔血小板聚集率,ELISA测定各组血浆中α颗粒膜蛋白(GMP-140)和血栓素B₂(TXB₂)水平,光镜和透射电镜分别观察动脉血栓形成和血小板形态的改变。结果: AHV-PI实验组与模型组相比,血栓弹力图凝血时间(R)值和血凝块形成时间(K)值延长(P<0.01 和P<0.05),Alpha角度、最大幅度(MA)和凝血指数(CI)减小(P<0.05 和P<0.01);血小板聚集率的各项指标均明显降低(P<0.05);血浆中GMP-140和TXB₂含量降低(P<0.01)。AHV-PI实验组光镜下动脉内未见血栓形成,血小板电镜显示血小板形态基本规则,与模型组相比伪足较少,α-颗粒和致密颗粒无明显减少,胞浆空泡化现象减轻。结论: AHV-PI可以通过抑制血小板聚集,防止动脉血栓的形成,其机制可能与之保护血小板超微结构,减少血小板脂质代谢和颗粒内容物的释放有关。     

芒果苷对糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的: 探讨芒果苷对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠心肌的保护作用。方法: 将SD大鼠随机分为5组,即正常对照组、糖尿病模型组、芒果苷低、中、高剂量组,链脲佐菌素法腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,检测各组血糖、血及心肌组织丙二醛（malondialchehyche,MDA）的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、心肌羟脯氨酸含量,Western blot方法检测心肌β-catenin蛋白表达;HE染色光镜观察心肌组织形态改变。结果: 与糖尿病模型组相比较,芒果苷治疗组大鼠空腹血糖水平明显降低,血清及心肌组织SOD活性升高、MDA含量显著降低,且心肌羟脯氨酸含量有所下降;治疗组大鼠心肌β-catenin蛋白表达较糖尿病模型组明显下降。结论:芒果苷能够减轻链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠血清及心肌氧化应激反应,降低心肌β-catenin蛋白表达水平,对糖尿病心肌具有一定的保护作用。     

皖南地区眼镜蛇毒镇痛组分对大鼠炎性痛作用机制探讨

目的:探讨皖南地区眼镜蛇毒镇痛组分(CVAF)对大鼠炎性痛作用效应及其可能机制。方法:40只雄性SD大鼠在测定基础痛阈后随机分为4组(n=10):正常对照组(NC 组)、炎性痛模型组(CFA 组)、炎性痛模型+CVAF组(CFA+CVAF 组)和炎性痛模型+吗啡组(CFA +Morphine 组)。随后将36只SD雄性大鼠随机分成6组(n=6):正常对照组(NC 组)、炎性痛模型组(CFA 组)、炎性痛模型+CVAF组(CFA+CVAF 组)、炎性痛模型+阿托品＋CVAF组(CFA+Atr＋CVAF)、炎性痛模型+纳洛酮＋CVAF组(CFA+Nal＋CVAF)和炎性痛模型+L-NAME＋CVAF组(CFA+L-NAME＋CVAF)。测定各组大鼠的热痛阈潜伏期(TWL)和机械痛阈值(MWT),制备脊髓匀浆,用于检测其中IL-1和TNF-α的表达。结果:与NC组相比,CFA组大鼠第1天开始TWL和MWT明显降低,出现热痛觉过敏和机械痛觉过敏,持续 14 d 仍存在;CFA组大鼠脊髓匀浆IL-1和TNF-α表达均明显增高(P<0.01)。与CFA组相比,CFA组大鼠腹腔注射CVAF后其TWL和MWT均升高,表明炎性痛大鼠热痛觉过敏和机械痛觉过敏得到改善;脊髓匀浆中IL-1、TNF-α表达显著减少(P<0.01),显示CVAF通过抑制炎性因子的产生而发挥镇痛作用。与CFA+CVAF组大鼠相比,L-NAME+CVAF组大鼠明显增强了CVAF对炎性痛大鼠的镇痛作用,表现为TWL和MWT的明显升高(P<0.01);而CFA+Atr＋CVAF组和CFA+Nal＋CVAF组大鼠TWL和MWT均有不同程度的降低(P<0.01)。结论:初步阐明CVAF通过减少炎性因子的释放对炎性痛大鼠具有镇痛效应。阿片肽受体系统和胆碱能受体系统均部分参与了其对炎性痛大鼠的镇痛作用。     

TKTL1在星形胶质细胞瘤中的表达及其意义

目的: 探讨转酮醇酶样基因1(Transketolase-like gene1, TKTL1)在胶质瘤中的表达及意义。方法: 收集54例手术切除的胶质瘤标本,6例正常脑组织,通过Realtime-PCR、Western blot及免疫组化方法,从mRNA和蛋白水平检测TKTL1在54例胶质瘤、6例正常垂体组织的表达。结果: Realtime-PCR、Western blot及免疫组化发现TKTL1在胶质瘤组织其表达显著高于正常脑组织(P<0.01),在高级别胶质瘤中和低级别胶质瘤中的蛋白及mRNA表达量两者之间差异具有统计学意义 (P<0.01)。结论: TKTL1的表达与肿瘤恶性程度密切相关,表明TKTL1的表达与肿瘤的发生、发展密切相关,提示TKTL1有可能是预测胶质瘤预后的重要指标。     

心肌缺血再灌注损伤大鼠血浆蛋白C活性变化及机制研究

目的: 探讨大鼠心肌缺血再灌注损伤时血浆蛋白C(PC)活性变化及其可能机制。方法: SD雄性大鼠50只随机分成对照组(C)和缺血再灌组(IR),IR组按照缺血和再灌的时间分为缺血 30 min(I₃₀)、再灌 30 min(R₃₀)、 60 min(R₆₀)和 120 min(R₁₂₀)组,每组10只。通过结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支 30 min 后再灌注的方法制备在体IR模型,采用生物信号采集处理系统连续监测心电图变化。从颈总动脉取血,检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、血浆凝血酶时间(TT);以发色底物法检测血浆PC活性;比浊法测定血小板聚集率;酶联免疫吸附法检测血浆游离蛋白S(FPS)的含量;光镜观察心肌组织学改变。结果: IR组大鼠心电图明显改变且病理观察显示心肌细胞排列紊乱、细胞核固缩、间质水肿;与C组比较,血浆PC活性I₃₀组明显下降(P<0.01),再灌注初期回升,而R₁₂₀再次下降(P<0.01);血浆FPS含量再灌注初期升高(P<0.05),R₁₂₀下降(P<0.05);血小板聚集率I₃₀组和再灌注初期(R₃₀ 、R₆₀)升高(P<0.01);APTT再灌 60 min后明显缩短(P<0.01),PT R₁₂₀组缩短(P<0.01),TT无明显改变。结论: 血浆PC活性在心肌缺血再灌注期间发生显著变化,其机制可能与血小板的活化及血浆FPS含量改变有关。     

蝮蛇毒血小板抑制因子对急性心肌梗死大鼠血液流变影响及机制的研究

目的: 探讨皖南蝮蛇毒血小板抑制因子（AHV-PI）对急性心肌梗死大鼠血液流变性变化的影响及其可能作用机制。方法: SD大鼠30只,随机分为假手术组、急性心肌梗死模型组和AHV-PI实验组。实验采用左心室注射月桂酸钠方法制备大鼠急性心机梗死(AMI)模型,AHV-PI实验组在造模前经舌下静脉注射 AHV-PI (0.1 mg/kg)预处理,RM6240生物信号采集处理系统监测心电变化。造模后3 h颈总动脉取血样,用锥板式血流变分析仪测定全血和血浆黏度,血栓弹力仪（TEG5000）描记凝血时间（R）、血凝块形成时间（K）、Alpha角度（A）、凝血最大幅度（MA）和凝血指数(CI),比浊法检测血小板聚集率。取血浆以酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆vWF、P 选择素的含量。结果: 与急性心肌梗死模型组比较,AHV-PI实验组全血和血浆黏度明显降低（P＜0.05）,R值和K值明显延长（P＜0.05）,A、MA和CI减小（P＜0.05）;血小板聚集时间、聚集幅度和聚集率均明显降低（P＜0.05）。vWF、P选择素的表达水平亦明显降低（P＜0.05）。 结论: 蛇毒AHV-PI 可明显抑制心肌梗死大鼠血液高凝状态,改善血液流变学特性,减轻损伤过程。     

蝮蛇毒蛋白C激活物改善急性心肌梗死大鼠心功能的机制研究

目的: 探讨皖南产蝮蛇毒(AHV)蛋白C激活物(protein C activator,PCA)改善急性心肌梗死大鼠心功能作用与机制。方法: Sprague-Dawly大鼠60只,随机分为假手术(SH)组、心肌梗死模型(MI)组、PCA低、中、高剂量组(0.5、2、8 mg/kg)、阳性对照组(阿司匹林 5 mg/kg),每组10只。通过结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死(AMI)模型,采用Medlab生物信号处理系统监测大鼠心脏血流动力学变化。Western blot检测心肌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达;光镜观察心肌组织学改变。结果: 与心肌梗死组比较,PCA高、中剂量大鼠左室内压最低值(LVDP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室压力最大上升速率(+dp/dt_max) 、左心室压力最大下降速率(-dp/dt_max)明显升高(P＜0.05),MMP-9的蛋白表达下降(P＜0.05)。病理观察显示PCA干预组较梗死模型组炎症细胞浸润显著减轻,梗死面积缩小。结论: 蝮蛇毒PCA组分可以限制急性心肌梗死早期心肌梗死扩大,有效改善心脏血液动力学,抑制MMP-9表达,对急性心肌梗死后心室重构有一定的干预作用。     

蛇毒有效成分的药理研究进展及其临床应用

蛇毒是一种天然药用资源,含有多种活性成分,大多数为蛋白酶以及多肽。随着蛋白质组学、毒理学、药理学以及分子生化等学科的发展,人们对其的研究也逐渐深入。蛇毒中的许多生物蛋白活性成分也逐渐地被分离纯化出来,并将其有效成分应用到临床疾病的防治和诊断。本文通过结合国内外对蛇毒结构、功能以及临床治疗等方面的研究展开综述,为进一步全面认识蛇毒及开展研究应用提供一些资料。