国家级病毒病预防控制实验室建设中的思考与实践

2002年1月23日，中国疾病预防控制中心（国家CDC）经过近3年的论证正式成立，标志着我国疾病预防控制体系建设进入了新阶段。虽然，随着我国公共卫生事业的发展和人民健康水平的提高，严重危害我国人民身体健康的疾病谱已发生明显变化，非传染性疾病已取代传染病成为严重危害我国人民健康的主要疾病。然而历史的教训告诉我们，在突发公共卫生事件的应急反应中，严重传染病仍处在首当其冲的位置。在传染病的预防控制中，[第一段]     

新型冠状病毒抗体检测结果的标准化和平行比较北大核心CSCD

目的通过世界卫生组织(world health organization,WHO)新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)抗体国际标准品(international standard,IS)(G样本)、抗体参考盘(样本E、F、H、I、J)的应用降低SARS-CoV-2抗体检测结果差异、提高检测结果一致性。方法利用基于SARS-CoV-2活病毒的微量中和试验、假病毒中和试验以及商品化的ELISA试剂盒对WHO的SARS-CoV-2抗体IS和参考盘等共10个样本(A~J)分别进行检测,对检测结果进行分析比较。结果以IS为参考品确定其他样本的相对浓度,降低了检测结果之间的差异。假病毒中和试验、ELISA检测血清抗体参考盘结果与基于SARS-CoV-2 HB02株的中和试验基本一致,个别试剂可检测弱阳性样本。结论SARS-CoV-2抗体IS的使用促进了血清学检测方法的标准化,抗体参考盘适用于基于SARS-CoV-2原型株的所有检测方法,假病毒中和试验、ELISA等在一定程度上可作为活病毒中和试验的替代方法。     

甲型流感病毒核蛋白和基质蛋白2胞外域融合mRNA疫苗在小鼠体内的免疫应答研究

目的:基于脂质多聚复合物(lipopolyplex, LPP)递送平台和保守抗原开发的新型流感病毒mRNA疫苗在小鼠体内的免疫原性评价。方法:将4个拷贝的甲型流感病毒基质蛋白2胞外域(extracellular domain of matrix 2 protein,M2e)与核蛋白(nucleoprotein,NP)编...     

两种商品化新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒的应用性能评价

目的评价两种商品化新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)中和抗体检测EIA试剂盒的应用性能。方法使用两种商品化SARS-CoV-2中和抗体ELISA检测试剂盒(A和B), 以疫苗免疫前血清44例、免疫后1个月血清120例、COVID-19患者愈后6个月的恢复期血清64例作为样本盘, 进行中和抗体检测, 同时通过活病毒微量中和试验(micro-neutralization test, micro-NT)检测上述血清样本的50%中和抗体滴度(50% neutralization titer, NT50)。分析两种商品化试剂盒与活病毒中和试验在定性及定量结果上的一致性。结果定性结果分析发现, 以micro-NT检测结果作为标准, A和B试剂盒的阳性符合率分别为97.40%和100.00%;阴性符合率分别为97.30%和95.95%;约登指数分别为0.95和0.96。定量结果分析发现, 对于疫苗免疫后样本, A、B试剂盒与micro-NT检测结果的相关系数分别为0.24(P<0.05)和0.5...     

六株不同地区分离的H7N9流感病毒假病毒制备与生物学特性研究CSCD

目的 选择不同地区分离的H7N9亚型流感病毒代表株,制备各代表株的假病毒,为H7N9疫苗对不同地区毒株的免疫保护效果评价奠定基础.方法 通过对29株H7N9流感病毒血凝素（Hemagglutinin,HA）的氨基酸序列分析,获得6株不同地区H7N9亚型流感病毒代表株病毒;采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,以HA与神经氨酸酶（Neuraminidase,NA）作为包膜质粒,包装获得6株带有荧光素酶报告基因的假病毒;通过电镜负染、Western blot检测、感染MDCK后的荧光素酶读值和血凝试验等了解6株假病毒的生物学特性,通过血清交叉中和试验了解其在中和抗体检测中的应用情况.结果 筛选获得6株不同地区分离的H7N9流感病毒代表株并制备了相应的假病毒颗粒,电镜下可观察到典型的流感病毒形态,Western blot可检测到HA、NA和P24的表达;滴度测定结果显示6株假病毒对MDCK细胞的感染力为104- 105TCID50/50μl,血凝活性可达64- 512;SH1上海株H7N9 HA疫苗免疫血清针对6株流感假病毒100TCID50剂量的中和效力不同,提示6株假病毒可用于疫苗的交叉免疫效果评价.结论 成功获得6株H7N9不同地区代表株流感假病毒,为疫苗的免疫效果评价奠定了基础.     

中国首例人感染猕猴α疱疹病毒1型病例的确诊

目的:对发生在中国的首例疑似猕猴α疱疹病毒1型感染者进行实验室确诊。方法:采集疑似感染者的脑脊液进行高通量测序,并采集疑似感染者的脑脊液、痘疱液、鼻咽拭子、结痂涂抹、唾液等标本以及密切接触者的痘疱液、口咽拭子、血清等标本后,利用4套实时定量PCR方法检测猕猴α疱疹病毒1型、水痘-带状疱疹病毒、猴痘病毒和正痘病毒。结果:...     

新型冠状病毒灭活疫苗在健康成人中的免疫原性和安全性研究：随机、双盲、安慰剂对照的Ⅰ、Ⅱ期临床试验

为了评估新型冠状病毒灭活疫苗（KCONVAC）在健康成人中的免疫原性和安全性,江苏省疾病预防控制中心在健康受试者中开展了随机双盲对照的Ⅰ和Ⅱ期临床试验。Ⅰ期临床试验共入组60名受试者,按4∶1的比例随机分配在疫苗组（5 μg或10 μg）和安慰剂对照组,均为0~14 d免疫程序。Ⅱ期临床试验为0~14 d和0~28 d...     

首届“不明原因肺炎监测及人冠状病毒检测技术手把手培训班”会议简讯CSCD

2017年7月10日-14日,由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒应急技术中心主办的全国继续教育培训项目一首届“不明原因肺炎监测及人冠状病毒检测技术手把手培训班”于深圳顺利召开。来自我国传染病防控领域、生物医药领域及深圳市第三人民医院等200余名代表出席会议,     

基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法的建立

目的建立一种基于RAA-CRISPR/Cas12a的特异性强、灵敏度高的猴痘病毒核酸检测方法。方法根据已知猴痘病毒基因保守区设计合成重组酶介导等温核酸扩增(recombinase-aided amplification, RAA)引物和成簇规律间隔的短回文重复序列RNA(clustered regularly interspaced short palindromic repeats RNA, CRISPR RNA, crRNA), 利用荧光检测技术筛选特异crRNA, 通过荧光计数读取CRISPR/Cas12a检测结果, 同时对所建立方法的灵敏性和特异性进行评价。结果建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法, 其灵敏度为2.5拷贝/反应, 且与鼠痘病毒、痘苗病毒无交叉反应, 具有高特异性。结论建立了基于RAA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒核酸检测方法, 为高效、快速、特异性检测猴痘病毒感染提供了有力工具。     

一种灭活型样本保存液在新型冠状病毒核酸快速检测中的应用评价

目的评价含表面活性剂Triton X-100及NP40的灭活型样本保存液对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的灭活效果及其对核酸快速检测的影响。 方法通过测定灭活型样本保存液对SARS-CoV-2灭活前后病毒滴度变化,评价保存液的灭活效果;用灭活型样本保存液洗脱含有SARS-CoV-2模拟病毒的咽拭子样本,评价样本保存液对SARS-CoV-2核酸快速检测最低检测限和精密度的影响,并将SARS-CoV-2在灭活型样本保存液中保存不同时间以评价保存液对SARS-CoV-2核酸检测的影响。 结果灭活型样本保存液在5 min内可使SARS-CoV-2滴度至少下降2.76×10⁵倍;灭活型样本保存液对SARS-CoV-2核酸检测的灵敏度无影响,对SARS-CoV-2核酸检测Ct值的CV小于5%;SARS-CoV-2在灭活型样本保存液中于25 ℃或2 ℃~8 ℃条件下可至少稳定保存4 d。 结论含表面活性剂Triton X-100及NP40的灭活型样本保存液可有效灭活SARS-CoV-2病毒,且灭活后病毒核酸检测不受影响,适用于核酸快速检测。