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将1株分别来自单纯疱疹病毒McAb(重链)和出血热病毒McAb(轻链)的杂化单链抗体基因序列,在SGI图形工作站上,利用同源蛋白结构预测的方法,建立起了其三维结构模型,以寻找轻、重链空间结构的相互关系,观察抗体的结构及表面静电性和疏水性的变化。结果表明,杂化链抗体的轻、重链位置得当,轻链参与组成了“疏水口袋”的形成,并有约五分之二的“袋口”部分由其围成,Linker链位置贴切,游离于轻、重链之外。轻、重链的3个超变区围绕于疏水口袋附近。这一研究为进一步分析轻、重链在抗体功能中的作用,以及改造抗体并提高抗体活性等方面提供了一种途径。 相似文献
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类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发展机理尚未完全阐明,目前认为与自身免疫密切相关,Ⅱ型胶愿蛋白(type Ⅱ collagen,CⅡ)是最可能的自身抗原(1).国外的研究提示,CⅡ的这种免疫活性主要一现在其250-270片段(hCⅡ250-270)上[1,2].本文用基因工程的方法,选用大肠杆菌(E.coli)偏爱密码子,化学合成优化该片段的基因组成,利用酶切位点将其串联成六聚体,并在E.coli中进行表达,获得大量重组hCⅡ250-270的类似物,为进一步研究该段活性肽的功能提供条件. 相似文献
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作者将从国内有关实验室引进的一株受支原体污染的人红白血病细胞系TF-1,通过清除支原体和有限稀释法进行克隆化,获得一株对人IL-3,IL-5,GM-CSF和EPO均高度敏感的TF-1细胞亚克隆,并建立了稳定而敏感的人IL-3,IL-5,GM-CSF及EPO生物学活性检测方法.本方法的建立不仅可用于研究这四种细胞因子的表达调控和生物工程生产中这些细胞因子活性定量,而且还可用于这些细胞因子与其受体的相互作用以及受体的结构与功能关系的研究。 相似文献
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抗人IL-3McAb杂交瘤细胞系的制备与鉴定黄传书,鞠躬(第四军医大学神经科学研究所神经免疫研究室,西安710032)陈常庆,杨立宏(中国科学院上海生物工程中心,上海200233)1987年荷兰学者Derssers从分裂原刺激人外周血细胞。cDNA文... 相似文献
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本文在利用TF-1细胞检测rhIL-3和rhEPO生物学活性中,对MTT比色法与3H-TdR掺入法的测活结果进行了比较,认为两种方法的测活结果无显著差异(P>0.05),从而为简化这两种细胞因子的测活步骤提供了一定的理论依据。 相似文献
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人肿瘤坏死因子α组合突变体生物学特性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究hTNFα的结构与功能。方法 比较了野生型hTNFα与其单突变体R2K-、N30S-、R32W-和L157F-hTNFα及两种组合突变体R32W-L157F-hTNFα和R2K-N30S-R32W-L157F-hTNFα的细胞毒活性、受体结合能力,以及动物体内毒性。结果 发现两种组合突变体基本保持了与野生型相当的对人肿瘤细胞的细胞毒活性,但对小鼠L929细胞的活性明显下降;两种组合突变体与hTR75的结合能力的下和程度要大于hTR55;小鼠体内毒性测定实验表明,两种组合突变体的毒性显著降低,其中双突变体的LD50为野生型的300倍左右,而四突变体对恒河猴的体内毒性也比野生型hTNFα明显降低。结论 获得具有潜在应用价值的TNF-α四突变体。 相似文献
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乙型肝炎病毒PreS基因的克隆表达及亲和层析纯化 总被引:4,自引:4,他引:4
目的:获取乙型肝炎病毒前S区基因(HBVpreS),序列测定正确后进行融合表达,为今后研究其机制及应用创造条件。方法:利用乙型肝炎病毒基因组为模板体外扩增HBVPreS基因后进行基因克隆,目的基因经测序正确后克隆入融合表达载体pRSET-C中,转化大肠杆菌JM109()DE3)。目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的HBV-PreS蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行纯化。结果:成功地扩增到preS区全长基因,得到融合6个His的HBV-PreS蛋白纯度大于90%,结论:构建了乙型肝炎病毒前S区基因的重组表达载体,获得了稳定表达的工程菌,为以后的深入研究奠定了基础。 相似文献
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重组人胸腺肽α1工程菌的高密度发酵 总被引:3,自引:0,他引:3
为实现重组人胸腺肽α1工程菌E.coli Top10/pThio His-Tα的高密度高表达发酵,首先进行了培养条件的摸索,确定了该工程菌的最佳培养条件、诱导剂IPTG的浓度、诱导起始和结束时间,然后用5L自控发酵罐进行分批补料培养,发酵中采用分阶段限制性流加氮、碳源,保持溶解氧在35%左右,结果经3mmol/LIPTG诱导5h,3批重复发酵,最终菌体密度均达到60A600以上(相当于干菌25.6g/L),保持了并超过了该重组蛋白在试管和摇瓶中的表达量,融合蛋白Thio His-Tα的表达占菌体总蛋白的42.4%左右,含量达到了5.7g/L,相当于胸腺肽α1 2.4g/L,为胸腺肽α1的下游纯化和工业化生产奠定了基础。 相似文献