p62~(dok)蛋白氨基酸和cDNA序列测定和分析

目的 :分析p6 2 dok氨基酸和cDNA序列 ,探讨p6 2 dok酪氨酸磷酸化及其与p2 1ras鸟苷三磷酸酶激活蛋白(p2 1rasGAP)的关系。方法 :从过渡表达人类胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞 (CHO/IR细胞 )中提取、纯化p6 2 dok,进行微肽序列分析 ,设计相应引物PCR、克隆cDNA并测序。利用免疫沉淀和蛋白免疫印迹检测p6 2 dok是否存在酪氨酸磷酸化及与p2 1rasGAP的关系。结果 :p6 2 dokcDNA由 186 3bp组成 ,编码 481个氨基酸 ,含 15个酪氨酸残基 ,富PXXP基序 ,并有一个pleckstrin同源区。当p6 2 dok酪氨酸磷酸化后 ,可与p2 1rasGAP相结合。结论 :p6 2 dok可能是一种新的信息分子 ,并通过p2 1rasGAP参与胰岛素信号转导系统中RAS/MAPK径路的调节。     

缺血预处理大鼠心肌MDA含量SOD和CAT酶活性的变化

实验采用雄性ＳＤ大鼠心脏缺血再灌注模,观察缺血预处理心肌组织ＭＤＡ含量、ＳＯＤ和ＣＡＴ酶活性的变经。结果表明：缺血预处理组大心肌ＳＯＤ、ＣＡＴ活性显著上升,ＭＤＡ含量显著减少。以上结果提示：缺血预处理对大鼠心脏的保护作用中能是通过提高ＳＯＤ、ＣＡＴ酶活性,减少脂质过氧化反应而实现的。     

大鼠心脏腺苷预处理—ATP酶活性及梗塞范围变化的图像分析

应用注人腺苷的前质－硫酸腺嘌呤复制的大鼠心肌预处理与经典缺血预自理的对比观察，探讨腺苷预处理效应。方法：实验采用体重为２５０－３００ｇ雄性ＳＤ大鼠４８只，分４组，每组１２只，即正常对照组，缺血再灌组；经典缺血预处理组；硫酸腺嘌呤预处理组。     

缺血预处理抗缺血再灌注心肌间质损伤的实验研究

目的：观察缺血预处理（ＩＰＣ） 对大鼠缺血再灌注心肌间质胶原及心肌功能结构关系的影响,以进一步探讨ＩＰＣ 对心肌的保护作用。方法：实验采用体重（２５０ ±３０）ｇ 雄性ＳＤ 大鼠２４ 只,分３ 组,每组８ 只,即假手术对照（ＳＣ）组;缺血再灌注（Ｉ／Ｒ） 组和缺血预处理（ＩＰＣ） 组。用超微结构立体计量及羟脯氨酸浓度测定观察心肌间质胶原变化,多道记录仪测量心功能指标,透射电镜观察心肌超微结构。结果：Ｉ／Ｒ 时心肌间质胶原浓度显著低于ＳＣ 组（ Ｐ＜ ０－０１） ,心肌超微结构损伤严重,左室功能明显低于ＳＣ 组（ Ｐ＜ ０－０１） 。ＩＰＣ 组心肌超微结构破坏明显低于Ｉ／ Ｒ 组。同时,心肌间质胶原浓度、胶原纤维线密度及左室功能指标明显高于Ｉ／Ｒ 组（ Ｐ＜ ０－０５ ,Ｐ＜ ０－０１） 。结论：ＩＰＣ 的心肌保护作用不仅表现在对心肌细胞上,而且对心肌间质也有重要的保护作用。     

2, 3-丁二酮单肟对冷停搏心脏的保护作用

目的：观察心肌兴奋收缩脱敏剂２,３－丁二酮单肟（ＢＤＭ）对冷停搏心脏的保护作用。方法：本实验采用ＳＤ大鼠４８只,高Ｋ组取心脏用ＳｔＴｈｏｍａｓ液４℃保存：ＢＤＭ组用ＢＤＭ－Ｋ－Ｈ液保存心脏。分别保存８ｈ,１８ｈ,２４ｈ Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流装置,再灌注４０ｍｉｎ。结果：１８ｈ后,高Ｋ＾＋组６０％不复跳,心率和冠脉流量都显著低于ＢＤＭ组,心肌质膜和线粒体Ｎａ－Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性也显著低于     

人α-防御素-1(α-HNP-1)基因乳腺定位表达载体的构建及表达

目的:将人α-防御素-1(α-HNP-1)基因与山羊β-乳球蛋白(Beta-Lac-toglobulin,BLG)基因5’调控区序列融合,构建α-HNP-1基因的乳腺定位表达载体并对其进行检测。方法:用PCR方法获得α-HNP-1基因片断并克隆于pMD18-T载体,经DNA测序证实α-HNP-1基因序列无误后,再将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1-HNP-1重组质粒。用PCR方法扩增出BLG基因5’区调控序列并克隆到pcD-NA3.1-HNP-1中,构建乳腺定位表达载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1,该载体经脂质体包裹后,经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠乳腺中进行表达。结果:经酶切鉴定和DNA测序分析证实重组质粒载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1构建正确,经ELISA检测,大鼠乳汁中有α-HNP-1表达,其48h表达量为27.67ng/ml,72h表达量为49.00ng/ml。结论:成功构建了α-HNP-1基因乳腺定位表达载体并最终在乳腺获得一定量表达,说明乳腺导管注入法是一种较理想的评价乳腺特异表达载体的可行性方法。     

Pervanadate对大鼠类I型糖尿病的影响

钒盐衍生物 (ｐｅｒｖａｎａｄａｔｅ)在离体研究中表现出多种明显的类胰岛素效应 ,包括促脂质生成 ,促蛋白合成和抗脂质分解等 ,但其在体研究的报道并不多见。本研究旨在观察ｐｅｒｖａｎａｄａｔｅ对链脲菌素 (ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ ,ＳＴＺ)所致大鼠类Ｉ型糖尿病的血糖水平的影响 ,并探讨其可能机制 ,以期为糖尿病的研究和治疗提供新的资料。材　料　和　方　法1　动物模型雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,体重 1 4 0 - 1 60ｇ ,ＳＴＺ(Ｓｉｇｍａ)溶于 0 1ｍｏｌ/Ｌ柠檬酸缓冲液 (ｐＨ 4 5)中 ,按 65ｍｇ/ｋｇ体重尾静脉一次注射复制类Ｉ型…     

非创伤缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌的作用

目的:确定非创伤性缺血预处理对大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌损伤是否具有对抗作用,以扩展缺血预处理的实际应用.方法:采用非创伤性下肢缺血预处理及经典缺血预处理的动物模型,比较两种处理方法对I/R心肌损伤的效应.实验动物分4组:正常对照组(NC,n=8),开胸旷置50 min;缺血/再灌注组(I/R,n=12),结扎冠脉30 min,再灌注20、180 min;经典缺血预处理组(C-IPC,n=12),按经典Murry法复制;非创伤性下肢缺血预处理组(N-WIPC,n=12),捆绑双下肢5 min,松开5 min,反复4次后,阻断冠脉30 min,再灌20、180 min.以左室功能,心肌梗塞范围,血清肌酸激酶(CK)及心肌组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性为观察指标.结果:与I/R组相比,N-WIPC组与C-IPC组均显著缩小I/R后的心肌梗塞范围(P＜0.01);明显恢复I/R后的左室功能(P＜0.05,0.01);减轻自由基对心肌的损害:血清CK,心肌MDA含量显著降低(P＜0.01).N-WIPC组还使心肌SOD活性增高(P＜0.05).结论:非创伤性下肢缺血预处理与经典缺血预处理可诱发同等强度的心肌预处理效应.     

AT_2受体cDNA重组质粒转染入培养的大鼠VSMC

目的 :将构建的AT2 RcDNA重组质粒转染到培养的大鼠血管平滑肌细胞 ,为研究AT2 R对血管平滑肌细胞生长的影响提供实验基础。方法 :扩增、纯化重组质粒后 ,用脂质体介导法将重组质粒转染入培养的大鼠血管平滑肌细胞 ,分别用AT2 RmRNA原位杂交、AT2 R抗体免疫组化的方法从RNA和蛋白水平检测转染效果。结果 :原位杂交显示部分细胞浆棕黄色阳性反应 ,显示转染率为 9% ,免疫组化结果显示部分血管平滑肌细胞膜上有AT2 R蛋白存在。结论 :成功将AT2 RcDNA重组质粒转染到培养的大鼠血管平滑肌细胞中。转染后AT2 R能在大鼠主动脉平滑肌细胞表达的现象为进一步研究AT2 R对成年大鼠血管平滑肌细胞生长、凋亡的影响提供了实验基础     

硫酸腺嘌呤预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

观察大鼠心肌缺血预处理及硫酸腺嘌呤预处理心肌细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）的活性变化，并探讨其心肌保护机理，用３，３’－二氨基联苯胺（ＤＡＢ）的Ｓｅｌｉｇｍａｎ法检测ＣＣＯ，依Ｒｉｄｉｔ值行显性检验，实验表明，心肌缺血再灌注组ＣＣＯ损伤性反应明显，经典缺血预处理组，硫酸腺嘌呤预处理组ＣＣＯ损伤性反应较之明显减轻（Ｐ〈０．０５）。结果提示：经典缺血预处理，硫到腺嘌呤预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作