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背景与目的:在前期工作中,我们经计算机序列分析发现,在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组增强子Ⅰ上游1047~1059 bp存在P53样应答元件结合序列5′-TGCC(G)TTGCCT-3′,体外实验应用凝胶迁移方法(EMSA和EMSSA)发现这段序列与P53蛋白能够进行特异性结合.本实验拟观察肝癌细胞中P53蛋白与HBV基因组P53样应答元件结合序列之间的关系.方法:报告基因质粒pX-CAT上游为X基因增强子和启动子序列,其中含有P53样应答元件结合序列5′-TGCGTTGCCT-3′.首先用PCR方法将pX-CAT质粒中5′-TGCGTTGCCT-3′进行点突变,成为5′-TGTATTGTAT-3′,以破坏P53样应答元件结合序列.将pX-CAT和变异后的pX-CAT(mpX-CAT)分别单独或与pCMV-p53质粒共转染HepG2细胞,通过检测报告基因CAT的活化情况,观察P53蛋白与这段DNA序列的作用关系.将HBV基因P53样应答元件结合序列反向构建于真核表达质粒pZeoSV2中(αpZeoXP),转染HepG2.2.15细胞并稳定筛选,以封闭HBV基因上P53样结合位点,观察细胞中P53/P21蛋白表达的改变,以及细胞周期、细胞凋亡的变化.结果:HepG2细胞中,报告基因CAT活性在pCMV-p53与pX-CAT共转染组较pX-CAT单独转染组明显升高(1.353 vs 0.738,P<0.05),而mpX-CAT单独转染组CAT活性则明显降低(0.304),即使与pCMV-p53共转染CAT活性也较低(0.402).与对照组相比,稳定转染了αpZeoXP的HepG2.2.15细胞中,P53、P21蛋白表达水平降低;细胞周期检测显示,与对照组相比,处于S期的细胞数增多(16.37%vs 9.48%),而细胞凋亡数减少(0.95%vs7.84%).结论:P53可促进pX-CAT报告基因在细胞内的表达,进一步提示P53与HBV增强子上游5′-TGCC(G)TTGCCT-3′序列存在结合作用,二者作用可能通过导致细胞内P53蛋白半衰期延长,而使细胞中P53及其下游基因P21蛋白表达水平和活性升高. 相似文献
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p14ARF基因通过p53途径对肝癌细胞的生长的影响 总被引:5,自引:2,他引:5
目的 探讨 p14 ARF对含有野生型 p5 3(wtp5 3)的肝癌细胞生长的影响及其作用机制。方法 将含p14 ARF的基因转染到人肝癌细胞HepG2中 ,通过流式细胞仪及生长曲线观察其对HepG2细胞周期及细胞生长的影响。利用Western Blotting方法及 p2 1waf1启动子荧光素酶活性检测p14 ARF对HepG2细胞 p5 3蛋白表达的影响。 结果 转染p14 ARF基因的HepG2细胞的生长速度从第 3天开始较空载体 pcDNA 3组减慢 ,处在G0 G1期细胞数 ( 70 .6 6 % )与空载体组 ( 6 1.5 5 % )相比明显增加 ,转染 pcDNA3p14 ARF( 1.0 92 3± 0 .0 370 ) p2 1waf1启动子荧光素酶活性较空载体组( 0 .76 73± 0 .0 180 )明显升高 ( P <0 .0 5 )。Westernblotting结果表明 ,p5 3表达也明显增加。 结论p14 ARF基因通过上调HepG2细胞的 p5 3表达导致 p2 1waf1的表达升高使细胞阻滞于G0 G1期 ,从而抑制细胞的生长。 相似文献
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肺坏死性结节病样肉芽肿病临床病理分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨肺坏死性结节病样肉芽肿病的临床病理学特征及其鉴别诊断。方法对2例发生在肺内的坏死性结节病样肉芽肿病进行光镜观察、PAS特殊染色和免疫组化标记。结果2例患者均为无明显诱因下胸痛,胸部X线平片及CT显示肺部多个结节状阴影,胸膜增厚。镜检肺组织内形成上皮样肉芽肿,肉芽肿中央有非干酪样凝固性坏死,多核巨细胞、淋巴浆细胞浸润,小血管炎,周围纤维组织增生。抗酸杆菌染色、PAS染色(-),肺肉芽肿区域组织内CD8( ),T淋巴细胞增多。经类固醇药物治疗后2例患者临床症状均好转。结论坏死性结节病样肉芽肿病是一种较少见的多发于肺内的良性肉芽肿性疾病,病理诊断应侧重于与结节病、Wegener肉芽肿以及结核、霉菌感染等引起的肉芽肿性疾病相鉴别。 相似文献
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全英语课程教学,无论是对于教师还是学生,都可使得在教与学的能力和素质养成上得到充分的提升,其中培养学生的自学能力,是完成专业英语教学任务的关键。“自学学问,自治学案,自养养性”是我们在多年双语教学经验上的积累,其效果是既使学生的自主学习意识和自主发展意识能力有了明显提高,也激励了教师在规划学生的双语教学过程中有更高层次的追求。 相似文献
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目的 探讨脊柱BCOR-CNNB3融合阳性肉瘤(BCS)的临床、组织病理学特征。方法 收集海军军医大学附属长征医院病理科2年内组织病理学和分子遗传学确诊的5例BCS的临床、影像学、组织病理学、免疫组化、分子遗传特征及其组织病理学鉴别诊断。结果 5例脊柱BCS患者中男性4例,女性1例,患者年龄10~22岁,患者均因下肢疼痛就诊,MRI显示5例均于腰骶椎椎旁见软组织肿块,边界清楚,组织病理学形态谱广泛,显示肿瘤细胞呈短梭形、小圆细胞、纤细波纹状或黏液样脂肪肉瘤样等多种形态。免疫组化5例肿瘤细胞均弥漫表达BCOR、CD99、TLE-1、CyclinD1,4例弥漫表达SATB2,Ki-67增殖指数高,不表达NKX2.2、EMA、PAX-8、WT1、STAT6等,5例FISH检测到BCOR-CNNB3融合基因改变。结论 脊柱BCS主要发生于腰骶椎,组织病理学形态谱广泛,但有独特的免疫组化表型和BCOR-CNNB3融合基因改变。 相似文献
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裸鼠脑内接种U-251MG细胞建立脑胶质瘤的模型 总被引:6,自引:2,他引:6
目的:建立裸鼠脑内人胶质瘤模型.方法:应用自制的脑内注射细胞装置,将人的U-251MG细胞接种于9只裸鼠脑中.分别于接种后10,20,30,40和77 d处死动物并行病理解剖、GFAP免疫组化及电镜检查.结果:我们建立的模型,肿瘤在脑内生长稳定,其特性同于人脑胶质瘤.结论:接种后20 d左右是利用该模型进行实验的最佳时机. 相似文献
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病理学实习能够充分体现理论联系实际的教学原则,是病理学教学的重要内容.为充分发挥病理学实习的作用,提高病理学实习教学效果,本课题在第二军医大学八年制临床医学专业病理学实习中引入了以问题为基础学习( problem-based learning,PBL)教学方法.以第二军医大学2007级八年制临床医学专业30名学生为研究对象,随机选择其中15名学生为实验组,15名学生为对照组.实验组实习采用PBL教学方法,对照组实习采用常规教学方法,两组实习同步进行,课后统一考核,并就有关PBL教学进行问卷调查.结果显示:实验组学生实习平均成绩92.8分、期末总平均成绩85.7分,对照组学生实习平均成绩87.2分、期末总平均成绩79.4分,实验组学生成绩明显高于对照组,组间比较其差异具有统计学意义(P<0.05).病理学实习结合具体教学特点灵活应用PBL教学方法,有利于激发学生的学习兴趣和克服实习的固有弊端,取得良好的教学效果. 相似文献
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p33ING1b真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用 总被引:3,自引:0,他引:3
目的构建pCDNA3/p33ING1b真核表达质粒并探讨其对肝癌细胞SMMU7721生长的抑制作用.方法将p33ING1b cDNA正反义亚克隆至pCDNA3真核表达载体上,并经磷酸钙共沉淀法分别转染至SMMU7721细胞中.转染后48h,用0.8g/LG418筛选出阳性克隆,检测转染后细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率的变化及应用流式细胞仪分析细胞凋亡率的改变.结果重组pCDNA3/p33ING1b正反义表达质粒构建成功.经正义p33ING1b质粒转染的SMMU7721细胞生长速度减慢,快速增长期比对照组推迟2d,软琼脂克隆形成率为(69.0±12.0)‰,较转染空载体(90.0±10.5)‰及反义表达质粒(149.0±15.0)‰的SMMU7721细胞减少,细胞凋亡率(22.53%)亦比空载体组(8.95%)及反义组(7.75%)上升.结论重组pCDNA3/p33ING1b质粒能在SMMU7721细胞内表达,且能抑制SMMU7721细胞的生长并促进其凋亡. 相似文献
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研究表明,胰腺癌和人体其他部位的恶性肿瘤一样,其发生发展也是多基因异常改变的结果,虽然多数研究显示胰腺癌中抑癌基因p53的突变率较高(50%-80%),但p53蛋白的异常表达率与肿瘤的生物学行为和预后价值之间却未见明显的相关性。随着p53基因家族的两个新成员p73和p63基因(它们分别编码p73蛋白和p63蛋白)被相继发 相似文献