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1.
目的:构建肺炎链球菌ciaH和ciaR基因的原核表达系统,探讨ciaH和CiaR封闭后细菌耐药性变化。方法:采用PCR扩增全长ciaH和ciaR基因,以常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS—PAGE及Bio—Rad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rCiaH和rCiaR表达量。制备rCiaH和rCiaR兔抗血清及其IgG。检测IgG胞外或胞内封闭肺炎链球菌菌株CiaH和CiaR后,细菌对青霉素和头孢噻肟耐药性的变化。结果:与报道序列比较,所克隆的ciaH和ciaR基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9%~100%和100%。所构建的工程菌E.coli BL21DE3^pET42A-ciaH和E.coli BL21DE3^pET42a-ciaR能高效表达目的重组蛋白rCiaH和rCiaR,其产量分别高达细菌总蛋白的33%和45%。rCiaH、rCiaR抗血清及其IgG免疫双扩散效价分别为1:4、1:4和1:1、1:1。CiaH—IgG胞外或胞内封闭CiaH、CiaR—IgG胞内封闭CiaR后,青霉素及头孢噻肟敏感菌株可出现对两种抗生素的耐药性,但对耐药菌株耐药性无明显影响。结论:成功地构建了肺炎链球菌ciaH/ciaR基因原核表达系统,为深入研究该TCS与耐药性关系奠定了基础。CiaH和CiaR均与肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟耐药性有关。 相似文献
2.
目的 描述2009-2017年江苏省手足口病(HFMD)病原谱及柯萨奇A16型(CVA16)的流行病学、基因变异及遗传进化特征。方法 对2009-2017年江苏省手足口病发病资料和病原学检测情况进行统计分析,选取120株CVA16病毒分离株进行VP1区全长基因序列测定,并对核苷酸及氨基酸序列进行同源性比较及系统进化分析。结果 2009-2017年江苏省共报告手足口病1 013 771例。其中, 手足口病肠道病毒阳性病例37 389例,主要病原构成为EV71(39.85%)和CVA16(30.13%);重症病例中,以EV71为主要病原,CVA16及其他肠道病毒引起的重症病例较少。CVA16在每年的3~7月和9~11月出现流行高峰,主要感染1~4岁年龄段儿童,男性比例高于女性。江苏省地区流行的CVA16毒株属于B1a亚型和B1b亚型,其中B1b亚型为优势流行基因亚型。120株CVA16病毒分离株VP1区核苷酸及编码氨基酸序列同源性分别为87.5%~100%、97%~100%。结论 2009-2017年,江苏省地区流行的CVA16具有明显的时间、人群分布特征;120株CVA16分离株属于B1a亚型和B1b亚型。CVA16分离株核苷酸序列变异较大,但氨基酸同源性较高,推断存在一定的同义突变。 相似文献
3.
目的 研究抗柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)中和抗体检测用毒株的应用。方法 对CV-A10毒株进行扩增培养,建立3级种子批并进行相关检定。采用3人3次独立测定病毒滴度,对工作种子批进行滴度标定,通过分别与肠道病毒71型(enterovirus A71,EV-A71)、CV-A16、CV-A6免疫血清进行交叉中和反应,评价该毒株的专属性。对CV-A10自然感染人血清和CV-A10小鼠免疫血清样品进行中和抗体效价检测,对其应用进行评价研究。结果 获得一株CV-A10中和抗体检测用毒株,3级种子批的无菌检查、支原体检查等项目均符合中国药典2020年版三部相关要求;经标定,平均病毒滴度为7.903 lg半数细胞培养物感染量(50% cell culture infectious dose,CCID50)/ml(95%置信区间:7.868~7.937 lgCCID50/ml),变异系数为1.10%;与EV-A71、CV-A16、CV-A6免疫血清无交叉反应,专属性良好;检测CV-A10自然感染人血清和CV-A10小鼠免疫血清,中和抗体的最大值与最小值倍数差均小于4,中和抗体检测变异系数分别为6.38%和3.64%。结论 抗CV-A10中和抗体检测用毒株具有较好的专属性可很好的应用于后续抗CV-A10中和抗体的相关检测。 相似文献
4.
目的 研究江苏省2013-2022年分离到的柯萨奇病毒A6型(CV-A6)全基因组序列特征及对全基因组各编码区进行遗传进化分析,以期从分子流行病学特征的角度解释CV-A6取代肠道病毒A71和柯萨奇病毒A16成为江苏省引起手足口病(HFMD)主要病原的原因。方法 选取2013-2022年间江苏省地区流行的35株CV-A6毒株进行全基因组测序,采用DNASTAR、MEGA7.0和Similarity plots3.5.1等软件对获取的全基因组序列进行比对、相似性分析、系统进化分析和基因重组分析,对P1编码区和3D区主要氨基酸变异位点进行分析。结果 35株CV-A6江苏毒株的全基因组核苷酸和氨基酸序列相似性分别为87.5%~99.6%和97.0%~99.8%,与CV-A6原型株Gdula/USA/1949的全基因组核苷酸序列相似性仅为80.3%~81.0%,氨基酸序列相似性为94.7%~95.3%。基于VP1序列的系统进化树结果显示,2013-2022年江苏省有34株CV-A6分离毒株分属于D3a基因亚型,1株分属于D2基因亚型;基于3D区进化树划分不同重组模式,2013-2022年江苏省流... 相似文献
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目的:探讨脑电图对小儿病毒性脑炎早期诊断及预后诊断的临床价值.方法:将脑电图结果与头颅CT结果进行比较,分析不同时期的临床诊治效果.结果:在86例病例中脑电图阳性率87.21%,CT阳性率32.56%,俩组比较差异显著(P<0.01).早期病例56例全部治愈,治愈率100%;中期病例20例,治愈率80%,好转4例;极期4例,好转2例,死亡2例.不同时期病例治愈率存在显著性差异.结论:脑电图对病毒性脑炎检测的阳性率高,而且出现异常改变早,而CT阳性率低,出现改变时间较晚.如果病人能早期诊疗可痊愈,一般不留后遗症.脑电图对小儿病毒性脑炎的早期诊断及预后判断有重要临床价值. 相似文献
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目的 构建肺炎链球菌comD基因敲除突变株,了解comD基因与细菌β-内酰类抗生素耐药性的相关性,探讨氯氰碘柳胺下调comD、comE和comC基因mRNA的作用.方法 构建用于comD基因敲除的自杀质粒pEVP3comD,通过同源重组及插入失活获得肺炎链球菌ATCC6306株comD基因敲除突变株comD-.采用PCR及免疫荧光法对comD-突变株进行鉴定.采用实时荧光定量RT-PCR检测氯氰碘柳胺处理前后comD-突变株及野生株comD、comE和comC基因mRNA水平变化.采用二倍琼脂稀释法测定comD-突变株及野生株对青霉素G和头孢噻肟的敏感性.结果 测序及免疫荧光试验结果证实,所构建的comD-突变株染色体DNA中comD基因被插入失活.50μmol/L或100 μmol/L的氯氰碘柳胺能明显下调comD、comE和comC基因mRNA水平(P<0.05),25μmol/L的氯氰碘柳胺则否.comD-突变株对青霉素及头孢噻肟最低抑菌浓度(MIC)值均为32μg/ml,明显高于野生株的0.06 μg/ml和1 μg/ml.结论 本研究成功地构建了肺炎链球菌comD基因敲除突变株.comD基因与细菌对β-内酰类抗生素耐药性密切相关.氯氰碘柳胺可通过下调comD、comE和comC基因的转录水平,从而对细菌感受态形成产生影响. 相似文献
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目的 分析江苏省3个城市疱疹性咽峡炎(HA)流行病学与病原学特征,为江苏省HA的精准防控提供参考依据。方法 选择无锡市、苏州市和盐城市的3家监测哨点医院,2018年5月至2022年12月定期从医院住院管理系统分年龄段收集HA的就诊和住院病例的相关信息。采用RT-PCR方法进行肠道病毒核酸检测,并对主要流行株的衣壳蛋白VP1编码基因序列进行测序分析、基因亚型的鉴别和系统进化分析。结果 无锡市、苏州市和盐城市的HA就诊病例数为57 709例,是同期报告的手足口病例数的1.76倍(57 709/32 831);HA住院占比为1.35%(781/57 709),住院占比逐年呈上升趋势(χ2=62.79,P<0.001)。HA流行高峰为5-7月。发病年龄主要为12~59月龄组儿童(67.07%,38 708/57 709),以36~59月龄组居多(34.40%,19 852/57 709)。HA阳性率为33.82%(644/1 904);以肠道病毒A组为主(54.04%,348/644);其中柯萨奇病毒(CV)A6占比最高(52.59%,183/348),CVA16和CVA4分别占24.71%(86/348)和15.23%(53/348)。10株CVA4 HA流行株均属于C2基因亚型,6株CVA6 HA流行株均属于D3a基因亚型;并与我国部分地区(福建省、广州市、江西省、云南省、天津市等)毒株的遗传距离和亲缘关系较为接近。结论 HA疾病负担较重,12~59月龄组是HA发病的重点人群,流行高峰为5-7月。HA病原多样化,以肠道病毒A组为主。HA流行株具有较低的型内分化,未发现新的进化分支。建议将HA纳入手足口病监测工作或法定传染病。 相似文献
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目的:探讨脑电图对小儿病毒性脑炎早期诊断及预后评估的临床价值.方法:将脑电图结果与头颅CT结果进行比较,分析不同时期的临床诊治效果.结果:在86例病例中脑电图阳性率87.21%,CT阳性率32.56%,两组比较有显著性差异(P<0.01).早期病例56例全部治愈,治愈率100%;中期病例20例,治愈率80%,好转4例;极期4例,好转2例,死亡2例.不同时期病例治愈率存在显著性差异.结论:脑电图对小儿病毒性脑炎的早期诊断及预后评估有重要临床价值. 相似文献
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目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术抑制肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157∶H7StxⅡ基因表达,并评价其对细菌生长的影响及细胞毒性。方法针对EHEC O157∶H7StxⅡ基因设计引物,构建CRISPR/Cas9表达质粒pdCas9-StxⅡ并转化EHEC O157∶H7感受态细胞,采用RT-PCR及胶体金法检测StxⅡ基因表达情况,绘制菌株生长曲线,将菌株培养上清液接种Vero细胞观察细胞病变情况。结果测序分析显示pdCas9-StxⅡ表达质粒被成功构建;转化EHEC O157∶H7(00G097)感受态细胞后,StxⅡ基因mRNA、蛋白表达均受抑制,EHEC O157∶H7生长曲线未受影响(P值均0.05)。pdCas9-StxⅡ-00G097菌株培养上清液对细胞的毒性效应(CPE为30%)显著低于对照菌株00G097和pdCas9-00G097(CPE均80%)。结论成功构建的pdCas9-StxⅡ表达质粒能特异抑制EHEC O157∶H7StxⅡ基因表达、降低细胞毒性,为进一步研究志贺毒素StxⅡ在EHEC O157∶H7致病机理和基因工程减毒活菌苗奠定了基础。 相似文献