人脐血间充质干细胞移植与神经节苷脂注射治疗脑瘫大鼠的对比研究

目的：建立稳定的人脐血间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）分离培养体系,观察其移植对脑瘫(CP)大鼠功能恢复的影响及细胞的存活、迁移、向神经细胞分化的情况,并与神经节苷脂（GM1）注射对CP鼠神经功能恢复进行对比。方法：采集足月新生儿脐带血100ml,分离出单个核细胞,体外培养并予5 溴脱氧嘧啶尿苷（Brdu）标记72h;受孕17d孕鼠腹腔注射脂多糖（LPS）0.4mg/(kg·d),12h后置于缺氧环境2～2.5h,4h后再次腹腔注射同剂量LPS,孕鼠自体分娩,生后4周,通过行为学评分选择CP模型动物80只,随机分为4组：CP组（CP模型）、假移植组（CP模型+PBS）、MSCs移植组（CP模型+MSCs）、GM1注射组（CP模型+GM1）,每组20只。移植后第1、2、3周应用免疫荧光法观察Brdu标记的MSCs的存活、迁移,移植后第4周,通过行为学评价观察大鼠神经功能恢复情况,应用免疫荧光法检测其胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达情况。结果：MSCs移植比GM1注射使大鼠握持时间更长,足错误次数更少(P<0.05);移植的MSCs可在大鼠脑组织中存活, 并向四周脑组织迁移, (0.45±0.68)个MSCs表达GFAP,(0.15±0.36)个MSCs表达NSE。结论：人脐血MSCs移植比神经节苷脂注射较好的提高CP大鼠神经功能的恢复, 移植细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移,并部分向星形胶质细胞或神经元分化。     

人脐血间充质干细胞移植联合神经节苷脂注射治疗脑性瘫痪

BACKGROUND:In recent years, some studies have demonstrated that ganglioside can promote survival and differentiation of umbilical blood cord mesenchymal stem cells in vitro. OBJECTIVE:To observe the effect of injection of human umbilical blood cord mesenchymal stem cells and ganglioside into rat lateral ventricles on neurological functional recovery from cerebral palsy. METHODS:Totally 60 cerebral palsy neonatal rats were delivered from pregnant rats which were modes were given intraperitoneal injection of lipopolysaccharide for 2 successive days on day 17 of gestation. Then those neonatal rats were randomly divided into five groups, including model group (n=10), sham transplantation group (n=10), stem cell transplantation group (n=18), ganglioside group (n=10) and combination group (n=12). Under stereotaxic instrument, umbilical blood cord mesenchymal stem cells or ganglioside were injected into left lateral ventricles of the rat brain, respectively, and the sham transplantation group was given the same volume of phosphate buffered saline. Two rats from the stem cell transplantation group were put to death for immunofluorescence staining at 7, 14, 21 and 28 days after transplantation, respectively, and two rats in the combination group were killed for immunofluorescence staining at 14 days. Besides, all rats were underwent neurologic evaluation at 28 days after transplantation. RESULTS AND CONCLUSION:The umbilical blood cord mesenchymal stem cells could survive, migrate and differentiate, which mainly distributed in the lateral ventricle, hippocampus and cortex. At 14 days after transplantation, positive expressions of BrdU and glial fibrillary acidic protein in the combination group were significantly higher than those in the stem cell transplantation group (P < 0.05). In addition, compared with the model group, the holding time significantly prolonged and foot error times significantly decreased in the latter three groups (P < 0.05), as well as in the combination group compared with the stem cell transplantation and ganglioside groups (P < 0.05). These results indicate that umbilical blood cord mesenchymal stem cells and ganglioside can both improve neurological function of rats with cerebral palsy. Given that ganglioside can promote survival and differentiation of umbilical blood cord mesenchymal stem cells in vivo, the combined transplantation is preferred.     

人脐血间充质干细胞在脑瘫大鼠脑内定植和存活能力的研究

目的:通过侧脑室注射,观察人脐血间充质干细胞（MRCs）在脑瘫（CP）大鼠脑内的存活、迁移、分化情况。方法:用腹腔注射脂多糖方法制作CP大鼠模型14只,将标记过的MSCs经侧脑室注射到12只CP大鼠脑内,观察在注射1～4周后MSCs在脑内存活、迁移、分化情况;2只不进行注射的CP大鼠作空白对照。结果:腹腔注射脂多糖方法成功制作CP模型;MSCs鉴定成功;MSCs经侧脑室注射能在CP大鼠脑内存活、迁移,并分化成神经细胞,随移植时间推移,有减少趋势（P<0.01）。2只未注射模型大鼠未检测到MSCs阳性细胞。结论:MSCs能在CP大鼠脑内定植,随着时间推移,数量明显减少。     

神经营养因子与神经干细胞移植联合治疗缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的 观察神经营养因子与神经干细胞(NSCs)联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的治疗效果.方法 取新生24 h的Wistar大鼠海马NSCs进行培养、鉴定.选7日龄Wistar大鼠制备HIBD动物模型,7 d后行损伤侧侧脑室移植.将实验大鼠随机分为9组正常组、模型组、磷酸盐缓冲液移植组、NSCs移植组、BDNF组、BDNF NSCs移植组、NT-3组、NT-3 NSCs移植组、BDNF NT-3 NSCs移植组.移植4周后进行功能实验,取脑组织进行免疫组化及免疫荧光检查.结果 从新生大鼠海马可成功培养出NSCs,并表达NSCs的标志物神经巢蛋白(neuroepithelial stem cell protein,Nestin),NSCs可分化为神经元及星形胶质细胞.Y迷宫实验NSCs移植组达到学会的次数(163±11.60)n,正确记忆次数(5.00±1.13)n;BDNF组(150.00±8.94,5.17±1.47)n;BDNF NSCs移植组(111.25±13.56,6.23±1.60)n;NT-3组(153.56±10.35,5.07±1.03)n;NT-3 NSCs移植组(117.27±11.4,6.30±1.1)n;BDNF NT-3 NSCs移植组(110±11.55,6.30±1.1)n.悬吊实验NSC移植组平均(30.10±11.8)s;BDNF组(36.25±10.98)s;BDNF NSCs移植组(43.6±10.56)s;NT-3组(34.95±10.15)s;NT-3 NSCs移植组(40.64±10.6)s;BDNF NT-3 NSCs移植组(42.20±6.25)s.斜坡试验NSCs移植组平均(20.3±8.25)s;BDNF组(14.33±2.88)s;BDNF NSC移植组(11.17±2.48)s;NT-3组(15.26±2.98)s;NT-3 NSC移植组(12.8±3.65)s;BDNF NT-3 NSCs移植组(12.9±5.18)s.说明各联合移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与NSCs移植组比较,明显改善(P＜0.05),而NSCs组大鼠学习记忆能力及神经功能与HIBD组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).各联合移植组损伤侧皮层、海马存活的NSCs数量(BDNF NSC移植组9.31±0.71个,10.10±1.65个;NT-3 NSCs移植组6.18±1.83个,8.18±3.06个;BDNF NT-3 NSCs移植组为9.58±1.61个,11.45±1.36个)与NSCs组(3.33±0.24个,4.22±0.33个)比较明显增多(P＜0.05),且NSCs分化为神经元的比例明显增多,与NSCs移植组比较,有统计学意义(P＜0.05),但双因子联合移植组与其单因子移植组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BDNF、NT-3与NSCs联合移植是治疗HIBD的有效方法.     

脑源性神经营养因子及神经干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)及神经干细胞(NSCs)联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗效果.方法 取新生24 h的Wistar大鼠海马NSCs进行培养、鉴定.选7日龄Wistar大鼠制备HIBD动物模型,模型制备后7 d行损伤侧侧脑室移植.将实验大鼠随机分为6组:正常组、模型组、假移植组、NSCs移植组、BDNF组、BDNF+NSCs移植组(联合移植组).移植后4周进行功能实验,取脑组织进行免疫组化免疫荧光检测.结果 从新生大鼠海马可成功培养出NSCs.Y迷宫实验结果:NSCs移植组达到学会的次数及正确记忆次数(163±11.60,5.00±1.13)n;BDNF组(150.00±8.94,5.17±1.47)n;BDNF+NSCs移植组(111.25±13.56,6.23±1.60)n.悬吊实验结果:NSCs移植组平均(30.10±11.8)s;BDNF组(36.25±10.98)s;BDNF+NSCs移植组(43.6±10.56)s.斜坡试验结果:NSCs移植组(20.3±8.25)s;BDNF组(14.33±2.88)s;BDNF+NSCs移植组(11.17±2.48)s.表明联合移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与NSCs移植组比较明显改善(P＜0.05),而NSCs移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与HIBD组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).联合移植组损伤侧额叶皮层、海马存活的NSCs数量(9.31±0.71个,10.10±1.65个)与NSCs移植组(3.33±0.24个,4.22±0.33个)比较差异具有统计学意义(P＜0.01),且NSCs分化为神经元的比例明显增多,与NSCs移植组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BDNF与NSCs联合移植较单独NSCs移植对HIBD有更好的疗效.     

肠道病毒71型衣壳蛋白VPl研究进展北大核心CSCD

人肠道病毒71型（enterovims 7l,EV71）是婴幼儿手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）的主要致病原之一。临床研究发现,EV71感染可导致多种临床表现,从轻微HFMD到致命性脑干脑炎并发肺水肿甚至死亡,但原因尚不清楚。EV71衣壳蛋白VPl在病毒识别、结合、进入靶细胞及病毒颗粒装配过程中发挥核心作用,VPl变异是EV7l适应性和免疫原性的重要决定因素。现对VPl结构、功能及其相关的抗病毒疫苗和药物的研究进展进行综述,为进一步研发新的更有效的抗病毒疫苗和药物提供理论基础。     

重症手足口病33例

目的 探讨重症手足口病(HFMD)的临床特点、治疗方法及预后.方法 收集33例重症HFMD患儿的临床资料,并对其临床特点、治疗方法和转归等进行分析.结果 33例中男25例,女8例;3岁以下占93.93％.中枢神经系统损害发生在病程第3天(中位数).33例均出现发热、皮疹,26例有易惊、肢体抖动、惊恐样表情,10例出现呕吐,6例出现走路不稳、肢体无力,6例出现抽搐,3例出现嗜睡,3例出现肢体迟缓性瘫痪,2例出现呼吸不规则、抽泣样呼吸,2例出现昏迷,1例出现感染性休克.并病毒性脑炎27例,脑膜炎、脑脊髓炎、脑干脑炎各2例.入院后予甲泼尼龙、丙种球蛋白、降颅压、抗感染等对症治疗.经治疗后死亡1例,死于神经源性肺水肿;3例出院时留有神经系统损伤后遗症;余29例治愈出院.结论 HFMD并中枢神经系统感染主要发生在3岁以下幼儿,早发现、早治疗大多预后较好,并发脑干脑炎、神经源性肺水肿、脑脊髓炎病情重,可导致死亡或留有后遗症.     

有机磷中毒误诊1例

患者，女32岁，孕3产2。此次妊娠7个月时．刷牙偶然发现左上牙龈处有一肿物，约0．6cm×0．5cm×0.2cm大小，柑红色，不痛不痒．质较硬．压之缩小。肿物生长较快．十几天后，已伸向左咽腭弓，约有2.4cm×1．5cm×0．4cm大小，到某医院口腔抖诊治，诊断为牙龈瘤．当即在局麻下作单纯肿瘤切除术，术中出血较多．切除组织送病理检查，     

新生大鼠海马神经干细胞的无血清培养及鉴定

目的探讨新生大鼠海马神经干细胞无血清培养的最佳方法，观察神经干细胞的生长、增殖及分化的特点。方法分离新生24h大鼠的海马组织，分别采用含碱性成纤维生长因子（bFGF）、表皮生长因子（EGF）、及bFGF＋EGF的无血清条件培养基进行悬浮培养，采用神经巢蛋白（nestin）免疫荧光染色方法鉴定神经干细胞，通过胎牛血清诱导分化，鉴定分化细胞，进一步证实神经干细胞。结果bFGF＋EGF能更好的诱导神经干细胞增殖，培养细胞呈nestin抗原阳性，分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特异性抗原。结论bFGF＋EGF的无血清培养基可用于培养大鼠海马神经干细胞。     

脐血间充质干细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从胎儿脐带血中分离出的一种成体干细胞,具有分化为神经细胞的潜能,可用于多种神经系统疾病的治疗。如何有效诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化一直是干细胞领域的研究热点,具有很高的研究价值,该文将对脐血间充质干细胞向神经细胞定向分化的诱导方法作一综述。