自身免疫肝病患者抗中性粒细胞胞浆抗体的检测及临床意义

探讨抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplastic antibodies,ANCA)对自身免疫肝病的临床意义。应用间接免疫荧光法和斑点法检测149例自身免疫性肝病患者[自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者57例,原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者42例,不明原因肝损患者50例]的ANCA和抗可提取性核抗原抗体(extract-able nuclear antigen,ENA),进而用ELISA法分析60例ANCA阳性的自身免疫肝病患者的ANCA抗原谱。以200例健康献血员为正常对照。结果ANCA在AIH、PBC、不明原因肝损中的阳性率分别为81%、40%、30%,其中非典型性pANCA的阳性率依次为70%、40%、28%。AIH组与PBC组及AIH组与不明原因肝损组间非典型性pANCA的阳性率有显著性差异(P<0.01),但PBC组与不明原因肝损组间差异不显著(P>0.05)。各疾病组ANCA抗原谱如下:AIH组中,乳铁蛋白3%阳性,MPO 11%阳性,组织蛋白酶G和BPI的阳性率分别为11%、17%;PBC组中,弹性蛋白酶和组织蛋白酶G阳性率均为5%,BPI的阳性率为16%;不明原因肝损组中,BPI阳性率为17%。大多数自身免疫性肝病患者非典型性pANCA为阳性(28%~70%),且伴有特征性自身抗体。注重非典型性pANCA的检测对明确诊断自身免疫肝病及其分类有很大的帮助。     

细胞内细胞因子——自身免疫性疾病的新视野

自身免疫是机体免疫系统对自身抗原发生免疫应答，产生自身抗体和（或）自身致敏淋巴细胞的一种现象，其对一定条件下机体免疫系统的正常自稳性调节具重要意义。当自身免疫异常时，自身抗体和（或）自身反应性淋巴细胞会攻击表达靶抗原的组织或器官，引起自身免疫性疾病（AID）。至今已有30余种疾病被列为AID，但对AID的病因和发病机制尚不清楚，一般认为，主要是各种内外因素打破机体免疫系统的自身耐受，通过自身过度免疫应答引起组织或器官损伤。这些因素可能包括机体内在因素（如遗传背景、自身抗原发生改变等）和外在因素（如发生各种病原微生物感染；超抗原或非特异性T、B细胞多克隆刺激剂作用等）。随着分子生物学和免疫学技术的飞速发展，对AID研究日益深入。特别是近年新技术的应用、新的特异性标志物的发现、发病免疫机理的深入探讨、新的靶分子或位点的寻找都为AID研究带来了新契机，同时也有利于改进和提高AID临床诊断和治疗。对AID的临床特征、实验室诊断技术和诊断指标进展见参考文献，在此仅重点阐述近几年与AID密切相关的细胞内细胞因子（Intracellular cytokine，ICK）的研究。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血IL-8及其受体CXCR1、CXCR2的表达及临床意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血浆白介素-8(IL-8)和外周血单个核细胞(PBMC)中IL-8、白介素-8受体1(CXCR1)、白介素-8受体2(CXCR2)、G蛋白耦联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase 5,GRK5)的表达变化及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测25例PBC患者和25例健康人对照组PBMCs中IL-8、CXCR1、CXCR2、GRK5的mRNA水平,western blot检测CXCR1、CXCR2蛋白表达水平,ELISA法检测血浆IL-8的含量,连续监测法测定血清碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)含量,并对各指标进行相关性分析。结果 PBC组血浆中IL-8浓度[(73.43±13.24)pg/mL]明显高于对照组[(34.76±10.12)pg/mL](P0.01)。PBC组IL-8、CXCR1、CXCR2、GRK5的mRNA相对表达水平[M(P25,P75)]为2.17(0.96,2.84)、1.71(0.97,3.26)、1.64(0.95,2.56)、1.86(1.34,2.30),高于对照组的0.99(0.48,1.35)、0.99(0.39,1.24)、1.06(0.56,1.32)、0.99(0.53,1.28),差异有统计学意义(P均0.05)。western blot结果提示,CXCR1、CXCR2的蛋白质水平也较对照组升高。PBC组血清ALP活性为128.0(99.5,164.5)IU/mL,对照组为51.0(42.3,62.0)IU/mL,P0.01;PBC组GGT活性为85.0(43.5,138.0)IU/mL,对照组为14.0(12.0,16.8)IU/mL,P0.01。PBMC中IL-8 mRNA表达水平与CXCR1存在正相关,相关系数(r)=0.420,P0.05;CXCR1与CXCR2呈正相关(r=0.441,P0.05);CXCR2与GRK5呈正相关(r=0.515,P0.01);血清ALP与GGT呈正相关(r=0.702,P0.01),其他指标之间无相关关系。结论 PBC患者外周血IL-8及其受体水平升高,推测IL-8及其受体信号转导过程可能在PBC的发病过程中起重要作用,为PBC的免疫干预治疗途径提供新的方向,但其与PBC的严重程度并无明显相关关系。     

如何更好地保证自身抗体的临床应用质量

自身抗体对自身免疫病(AIDs)具有重要的临床价值,是临床医生诊治AIDs的重要手段,但自身抗体及其检测技术很多固有的局限性使得自身抗体的质量控制相对比较薄弱。面对临床的迫切需要和自身抗体本身的缺点,检验人员该如何破解矛盾,最大程度地保证自身抗体的临床应用质量?该文围绕这一问题,进行了比较系统、深入的阐述,旨在为从事自身抗体检测的检验人员提供一些借鉴。     

丙泊酚对呼吸机所致肺损伤大鼠的保护作用及机制

目的探索丙泊酚对呼吸机所致肺损伤(VILI)模型大鼠的保护作用,并分析其调控机制。方法利用大潮气量通气建立肺损伤模型,将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和丙泊酚组,每组10只。检测大鼠肺组织湿/干重比(W/D)、大鼠肺组织形态学变化情况、大鼠肺组织中TNF-α和IL-6含量以及JAK、STAT3 mRNA和蛋白水平,并比较3组大鼠肺组织中SOD、MDA的含量。结果与假手术组相比,模型组W/D明显较高,肺组织病理学形态较差,肺组织中TNF-α和IL-6含量明显较高,JAK、STAT3 mRNA水平较高,p-JAK、p-STAT3蛋白水平较高,MDA的含量较高,而SOD的含量较低,以上差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,丙泊酚组W/D明显较低,肺组织形态学得到改善,肺组织中TNF-α和IL-6含量明显较低,JAK、STAT3 mRNA水平较低,p-JAK、p-STAT3蛋白水平较低,MDA的含量较低,SOD的含量较高,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丙泊酚对VILI模型大鼠具有减弱炎症反应的作用,其机制可能与抑制JAK/STAT3信号通路有关。     

RNA干扰SOCS1对线粒体M2蛋白作用树突状细胞功能的影响

目的探讨细胞因子信号转导抑制分子1(SOCS1)干扰后,线粒体M2蛋白对外周血单个核细胞(PB-MC)来源的树突状细胞(DC)功能的影响。方法诱导和培养健康人PBMC来源DC,小干扰RNA(siRNA)抑制SOCS1的表达,用不同浓度的M2蛋白刺激DC,用流式细胞术(FCM)分析DC表型CD83、CD86的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DC培养上清液中白细胞介素10(IL-10)和白细胞介素12(IL-12)的变化。结果DC在M2蛋白浓度为70μg/mL刺激24 h,35μg/mL刺激24、48和72 h时,与对照组比较,CD83和CD86的表达率以及IL-10和IL-12的水平均明显升高(P<0.05)。M2蛋白刺激SOCS1干扰后的DC,在不同刺激浓度和作用时间,CD83和CD86表达率以及IL-12水平与单纯M2蛋白刺激组相比均明显升高(P<0.05),而IL-10水平在两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DC在接受高浓度的M2蛋白刺激后,其成熟度、抗原递呈和Th1的极化能力增强;抑制SOCS1的表达,M2蛋白可进一步促进DC功能的增强,可能导致自身耐受的破坏。     

痰热清注射液联合布地奈德福莫特罗对稳定期COPD患者炎症及免疫功能的影响

目的 探讨痰热清注射液联合布地奈德福莫特罗对稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺功能、动脉血气、炎症及免疫功能的影响。 方法 选取2016年1月-2017年1月温州医科大学附属黄岩医院就诊的稳定期COPD患者156例,将其按随机数字法分为2组,每组78例。对照组给予布地奈德福莫特罗,观察组在对照组基础上加用痰热清注射液。治疗后,比较2组肺功能(FEV₁、FEV₁%、FEV₁/FEVC)及动脉血气(PaO₂、PaCO₂)、炎症因子(TNF-α、IL-8、ICAM-1)及免疫功能(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)的变化。 结果 治疗后,2组FEV₁、FEV₁%、FEV₁/FVC均明显升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组PaO₂均升高(均P<0.05),且观察组明显高于对照组(P<0.05),2组PaCO₂均降低(均P<0.05),且观察组明显低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组TNF-α、IL-8、ICAM-1均明显降低(均P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,2组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均显著升高(均P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05)。 结论 痰热清注射液联合布地奈德福莫特罗能够降低稳定期COPD患者炎症反应,提高患者免疫功能,有效改善患者的肺功能及动脉血气水平。      

海军军医全科医学培训中《实验诊断学》课程的调查与思考

目的 调查分析我校海军军医全科医学培训中《实验诊断学》课程教学的应用和效果。 方法 选择2015年9月参加我校海军军医全科医学任职培训学员37人为调查对象,采用“教学反馈调查问卷”形式对实验诊断学课程的课时安排、教学内容、教学方式等进行调查,共发放问卷37份,收回37份,采用EXCEL表进行统计汇总。 结果 100%（37/37）的学员认为《实验诊断学》课程的开设对于全科医学培训是有必要的。72.9%(27/37)的学员建议该课程设置为3至4学时。91.9%(34/37)的学员选择血、尿、粪常规指标解读,其次是肝肾功指标解读。推荐理论授课、病例讨论和实践操作教学方式的学员比例分别为24.3%(9/37),51.4%(19/37)和48.6%(18/37)。 结论 海军军医全科医学培训中引入《实验诊断学》课程具有积极意义。在今后工作中应根据全科医学任职培训的要求,优化教学内容和学时安排,改进教学方式,更好地提高培训质量。     

B淋巴细胞活化因子特异的单链DNA适体的人工进化

目的: 进化筛选与B淋巴细胞活化因子（B cell activating factor belonging to the TNF family，BAFF）特异结合的单链DNA适体，鉴定其结合力。方法:应用指数方式富集的配体系统进化（systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX）技术，将随机序列寡核