表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用

目的构建表达前列腺特异性膜抗原（PSMA）的DNA疫苗，观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用。方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA，将DNA疫苗pCDNA3．1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL／6小鼠体内，分离小鼠脾细胞，检测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）反应。以B16-PSMA细胞攻击免骺小鼠，观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况，评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性，经过免疫后的小鼠成瘤率降低，无瘤生存期延长，肿瘤生长缓慢，肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润，表明产生较强的抗肿瘤反应。结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应，对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用，为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路。     

肝癌抗原的研究

肝癌抗原的研究直接关系到肝癌病因及发病机理的探讨,肝癌的早期特异诊断和导向治疗等方面,已引起各国学者的注意。兹将近年来有关内容综述于下。一、肝癌的肿瘤特异性抗原Baldwin 等于1967年首次在近交系小鼠中用肿瘤移植的方法证明了偶氮染料诱发的肝细胞癌有肿瘤特异性移植抗原(TSTA)存在。同年用间接免疫萤光法也获得了相似的结果。1971年用体外克隆抑制实验证明了细胞免疫和体液免疫都参与抗小鼠肝癌的特异性免疫过程,并且都具有肿瘤个体的特异性。Jean 等发现,用大剂量射线照射过的肝癌细胞免疫动物后获得的致敏淋巴细胞,除对同株肝癌细胞有特异的细胞毒性外,与其他肝癌细     

磷酸镁骨黏合剂生物学固定强度及组织学的实验研究

目的研究磷酸镁骨黏合剂(MPC)植入家兔骨内的生物学固定强度,并作组织学观察。方法①生物力学部分:双侧股骨髁上钻孔后,分别植入MPC和磷酸钙骨水泥(CPC),术后分别饲养1、2、3、4、6和8 周后取出股骨下段作推出试验。②组织学部分:家兔右股骨髁上钻孔后填入MPC,术后分别饲养24 h、1、2周和 1、2、3个月,分批处死后取出标本,作不脱钙病理切片。结果①生物力学部分:在不同时间,MPC组的生物学固定强度均显著大于CPC组(P<0．05)。②组织学部分:2周时MPC开始吸收,2个月时MPC已完全吸收,骨孔愈合良好。结论 MPC的生物学固定强度比CPC大,且MPC可降解,可用于骨折黏合固定。     

声脉冲辐射力成像评价大鼠肝纤维化的实验研究

目的 探讨声脉冲辐射力成像技术无创评价大鼠肝纤维化的价值.方法 应用二甲基亚硝胺对70只Wistar大鼠以50mg/kg的剂量一次性腹膜腔注射,复制大鼠肝纤维化模型作为实验组,10只Wistar大鼠腹膜腔一次性注射同等量生理盐水作为对照组.造模后于第5、7、10、14、21和28 d分别随机从实验组中取9～10只、对照组中取1～2只大鼠进行声脉冲辐射力成像检查,记录反映肝剪切波速度的声触诊组织量化值(shear wave velocity,Vs).随后处死大鼠,取其肝行病理分析.分析声触诊组织量化值与病理之间的关系.结果 58只大鼠造模成功,肝纤维化分级S1、S2、S3和S4者分别有9、13、14和12只,10只大鼠肝严重炎症坏死而无纤维化.声触诊组织量化值随着纤维化程度的增加而增大,各组间差异均具有统计学意义(P＜0.05);Vs与肝纤维化病理分级间具有显著相关性(r =0.947,P=0.000);应用Vs诊断S≥S1、S≥S2、S≥S3和S=S4对应的ROC曲线下面积分别为0.983、0.995、0.999和0.964,对应的Vs临界值分别为1.59 m/s、2.13 m/s、2.33 m/s和2.51 m/s,敏感性分别为95.8％、92.3％、100％和84.6％,特异性分别为100％、100％、96.9％和95.6％.10只无纤维化但有严重炎症坏死的大鼠的Vs明显较无纤维化且无炎症坏死大鼠高(P=0.000).结论 声脉冲辐射力成像技术评价大鼠肝纤维化具有较高的价值,但严重的炎症坏死会影响其准确性.     

大鼠肝纤维化模型中基质金属蛋白酶-2及其抑制物的表达

目的了解基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）及其组织型抑制剂（ＴＩＭＰ－２）在纤维化过程中的变化,分析它们在始动阶段的作用。方法用免疫组化和酶图法,在异种血清诱导的大鼠肝纤维化模型不同阶段,作肝细胞内ＭＭＰ－２、ＴＩＭＰ－２、酶降解底物Ⅳ型胶原（ＣｏｌⅣ）以及结蛋白（Ｄｍ）定位和半定量研究。结果实验鼠于４周末形成细胞间隔,８周末发展为肝纤维化,含细胞－纤维间隔或纤维间隔,１２、１６周仍为纤维间隔。酶图法表明４周末ＭＭＰ－２活性升高２．５倍左右,８周末仍高于对照鼠。免疫组化显示４周末ＭＭＰ－２阳性细胞数最多,连续切片观察ＭＭＰ－２与Ｄｍ阳性细胞（活化的肝星状细胞）几乎重叠。８周末阳性细胞数有所减少,１２周末明显减少。半定量变化趋势与酶图法一致。ＴＩＭＰ－２于８周末表达开始升高,１２周末达最高。２周末ＣｏｌⅣ表达开始上升,４周末达高峰,以后缓慢下降。结论肝纤维化早期ＭＭＰ－２活性增高,继而ＴＩＭＰ－２分泌过多,ＭＭＰ－２活性受抑,ＥＣＭ降解受阻,纤维化进一步发展。     

滑膜肉瘤32例临床病理分析

目的 探讨滑膜肉瘤的形态特点和鉴别诊断。方法 收集原诊断为滑膜肉瘤的病例66例、恶性周围神经鞘膜瘤10例、纤维肉瘤6例、平滑肌肉瘤13例，进行形态学观察，并采用10种抗体做免疫组化染色。结果 66例原诊滑膜肉瘤的病例中，最终确诊为滑膜肉瘤者27例，诊断准确率40．9％。最易误诊为滑膜肉瘤的肿瘤是恶性周围神经鞘膜瘤，占31．8％。5例滑膜肉瘤最初误诊为其他梭形细胞肉瘤。组织学双向分化是其主要特点，分单相纤维型，双相型和低分化型，未见单相上皮型病例。免疫组化瘤细胞表达CK和／或EMA，同时vimentin阳性，S－100和PGP9.5也有一定阳性率。bcl-2蛋白阳性率高，多为弥漫性。其他几种梭形细胞肉瘤不表达CK和EMA，bcl-2蛋白阳性率低或局灶阳性。结论 滑膜肉瘤是一种容易误诊的软组织肉瘤，免疫组化同时表达上皮性和间叶性标记。最易误诊的肿瘤是恶性周围神经鞘膜瘤。bcl-2蛋白检测对滑膜肉瘤鉴别诊断有一定帮助。     

胎儿炎症反应综合征1例报道及文献复习

胎儿炎症反应综合征(fetal inflammatory response syndrome,FIRS)这一概念首先由Gomez和Romero等~([1,2])提出.在临床上,FIRS的诊断依据包括羊水和脐血中的炎症因子(如IL-6、IL-1、TNF-α)的检测~([2,3]),而最终病理学的诊断包括了胎盘绒毛血管炎和/或脐带血管炎~([3-5]).     

Caveolin-1对喉鳞状细胞癌抑制作用的体内外研究

目的探讨caveolin-1对喉鳞状细胞癌（简称鳞癌）细胞生长的影响。方法通过脂质体法转染喉鳞癌细胞株Hep-2细胞，筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆，并用实时定量逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定；用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的体外增殖能力；免疫印迹法检测细胞中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）、磷酸化EGFR、细胞外信号调节激酶1、2（extracellular signal-regulated kinase，Erk1、2）、磷酸化Erk1、2，caveolin-1蛋白的表达；免疫共沉淀法检测caveolin-1和EGFR的结合情况；转染后的细胞接种至裸鼠皮下，观察肿瘤的生长情况，裸鼠移植瘤中caveolin-1、磷酸化EGFR、磷酸化Erk1、2的蛋白表达用免疫组织化学法检测。结果成功筛选到稳定高表达caveolin-1的克隆；与对照组相比，转染后的细胞体外增殖能力明显减弱；细胞接种到裸鼠皮下，未转染组和转染空载组中裸鼠均形成肿瘤（100％，4／4），稳定转染caveolin-1的Hep-2-CAV1-2组中裸鼠未形成实体肿瘤（0％，0／4），Hep-2-CAVl-3组中4只裸鼠中只有3只形成肿瘤（75％，3／4），但肿瘤生长缓慢，最终生成肿瘤的重量与未转染组相比明显减小（t=3．05，P〈0．05）；免疫共沉淀显示caveolin-1与EGFR在Hep-2细胞中是结合的；免疫印迹法和免疫组织化学法发现转染caveolin-1后细胞中EGFR和Erk1、2的磷酸化水平降低。结论caveolin-1能够抑制喉鳞状细胞癌细胞株Hep-2的生长，抑制EGFR-MAPK信号通路可能与其抑癌作用相关。     

金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP—1）的克隆与序列分析

目的：用基因工程技术构建金属蛋白酶组织抑制剂的克隆质粒。方法：从人乳腺癌细胞中分离提取总RNA,经逆转录PCR（RT－PCR）扩增出金属蛋白酶抑制因子1（TIMP－1）的c DNA,插入经NdeI和XhoI双酶切的PET19b载体中,构建了克隆质粒PET19bTIMP－1。结果：对此克隆质粒进行了限制性酶切鉴定和DNA序列分析,结果在扩增出的cDNA中624个碱基中与发表的TIMP－1cDNA序列相比,除361位碱基由A变为G外,其余均完全相同。结论：该突变导致编码的氨基酸由苏氨酸变为丙氨酸,不影响本课题后期用该克隆化基因表达蛋白作为抗原制备单克隆抗体的目的。该DNA全长624bp,编码207个氨基酸。     

端粒酶hTERT mRNA在乳腺癌中的表达及与c-myc相关性分析

目的 探讨人乳腺癌中原癌基因c-myc与hTERT mRNA表达的关系.方法 收集癌旁正常乳腺组织、导管原位癌、浸润性导管癌各12、18和25例,用原位杂交法检测hTERT mRNA表达,并用免疫组织化学法检测乳腺导管癌c-myc表达.结果 ①hTERT mRNA在癌旁正常乳腺组织中未见表达,在导管原位癌、浸润癌中的阳性率分别为83.33%和88.00%,后两组hTERT mRNA表达明显高于正常组;②hTERT mRNA表达与浸润性导管癌肿块大小及淋巴结转移与否无相关性（P＞0.05）;③43例乳腺导管癌中hTERT mRNA与c-myc表达呈正相关（γ=0.388 4,P＜0.05）.结论 端粒酶hTERT的表达可能在乳腺导管癌的组织发生中起关键作用,c-myc的过度表达可能与乳腺导管癌hTERT基因转录激活有关.