卡波济肉瘤相关疱疹病毒编码IL-6基因的分离克隆及在NIH3T3细胞中的表达研究

目的:分离克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码IL-6基因(vIL-6),并导入NIH3T3细胞中进行真核表达。方法:根据KSHV编码IL-6基因核苷酸序列设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增vIL-6基因,PCR产物经双酶切克隆进真核载体pcDNA3.1( )。进一步在原有的下游引物5′端加上一段flag序列,以经过序列测定正确的重组质粒为模板,PCR扩增vIL-6-flag融合基因,构建含vIL-6-flag的重组质粒。将该质粒转染NIH3T3细胞,经G418筛选获细胞抗性克隆。最后用抗flagM2单克隆抗体进行Westernblot检测vIL-6在NIH3T3细胞中的表达。结果:获得vIL-6-flag融合基因,全长671bp,其中vIL-6基因核苷酸序列与GenBank中所登记的KSHVvIL-6基因呈现100%同源性。Westernblot结果显示,在约25ku位置有目的条带,与预期的重组vIL-6-flag融合蛋白大小一致。结论:KSHVvIL-6编码基因在NIH3T3细胞中初步获得表达。     

HIV-1感染相关细胞因子激活BC-3细胞中潜伏感染的人类疱疹病毒8型的复制研究

目的:研究证实HIV-1感染相关细胞因子能够诱导原发性渗出性淋巴瘤(PEL)的另一细胞系BC-3中潜伏的人类疱疹病毒8型(HHV-8)发生可溶性周期复制。方法:将TNF-α和HIV-1感染CD4~+ T淋巴细胞常释放的细胞因子IFN-γ、HGF/SF、OSM,连续加入到BC-3细胞中作持续刺激,分别于刺激后的第3天和第7天收集BC-3细胞。采用免疫组化染色法(IHC)检测HHV-8免疫原性蛋白ORF59表达;电子显微镜观察病毒的形成;Northernblot和 定量PCR检查次要衣壳蛋白ORF26 mRNA转录。结果:IFN-γ、HGF/SF、OSM和TNF-α均能不同程度上调ORF26 mRNA表达。其中,IFN-γ刺激BC-3细胞第7天,HHV-8 ORF26 mRNA表达上升了6.1倍;ORF59蛋白表达上升到20％,与此同时,BC-3细胞中可观察到成熟的病毒粒子。另外,TNF-α刺激BC-3细胞第7天,HHV-8 ORF26 mRNA表达也上升了2.5。结论:TNF-α和HIV-1感染释放细胞因子能够诱导PEL另一细胞系BC-3中潜伏的HHV-8发生可溶性周期复制。     

间充质干细胞治疗持续性非卧床腹膜透析患者二例

我们用间充质干细胞( MSC)治疗持续性非卧床腹膜透析(CAPD)患者两例.两例患者原发病均为慢性肾小球肾炎,使用美国Baxter乳酸盐透析液,双联系统管路.MSC(细胞数＞5×107)由江苏省干细胞中心(北科生物公司)提供.脐带组织和脐带血取自当地医院已签知情同意书的顺产健康产妇.本研究经医院伦理委员会审查批准.患者均签署知情同意书.每个月使用干细胞1次,共3次.     

亚临床甲状腺功能减退与2型糖尿病慢性并发症的关系

目的探讨亚临床甲状腺功能减退(SCH)与T2DM慢性并发症的关系。方法将1294例T2DM患者分为SCH组和甲状腺功能正常组,比较两组间慢性并发症患病率及患者的甲状腺功能,采用Logistic多元回归分析SCH与T2DM慢性并发症的关系。结果 18.8%的T2DM患者合并SCH。SCH组糖尿病慢性肾脏疾病(CKD)、DR、糖尿病周围神经病变(DPN)和糖尿病足(DF)患病率均高于甲状腺功能正常组(P0.05)。CKD、DR和DPN患者FT3下降,促甲状腺激素(TSH)升高(P0.05)。Logistic多元回归分析显示,SCH为CKD的独立危险因素(OR=3.39,P=0.012)。结论 T2DM合并SCH患者CKD、DR、DPN和DF患病率升高。SCH是CKD的独立危险因素。     

胃泌素/胆囊收缩素受体环对胃癌细胞增殖迁移的影响

目的探索胃泌素/胆囊收缩素受体环对胃癌细胞增殖迁移的影响。方法用免疫细胞化学方法检测人胃癌细胞SGC-7901、AGS和胃黏膜上皮细胞GES-1细胞中胆囊收缩素-B(CCKB)受体的表达。分别培养这3种细胞,用不同终浓度胃泌素(10、100 nmol/L)处理细胞,以未加胃泌素的细胞为对照,用细胞划痕实验和四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞的增殖迁移能力。结果胃癌细胞SGC-7901、AGS中CCKB受体表达强阳性,而GES-1细胞中CCKB受体表达弱阳性;不同浓度胃泌素处理细胞后,SGC-7901、AGS细胞的增殖迁移能力明显增强,而GES-1细胞无明显改变;对照组、10 nmol/L胃泌素处理组及100 nmol/L胃泌素处理组中SGC-7901细胞的相对增殖率分别为100%、191.13%、212.65%,AGS细胞的相对增殖率分别为100%、189.27%、209.19%,各组间差异均有统计学意义(P均<0.01);而GES-1细胞的相对增殖率分别为100%、113.01%、116.12%,各组间差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 CCKB受体表达水平的高低对胃泌素/CCKB受体环促进胃癌细胞的增殖和迁移起重要作用。     

除湿止痒软膏抗炎及止痒作用研究

目的 探讨除湿止痒软膏的抗炎及止痒作用。 方法 用2,4-二硝基氟苯（DNFB）腹部致敏和背部反复激发建立BALB/c小鼠特应性皮炎模型。实验动物分为正常对照组（未致敏也未治疗）、模型对照组（致敏但未治疗）、氢化可的松乳膏组（致敏 + 氢化可的松）、除湿止痒软膏组（致敏 + 除湿止痒软膏）。连续用药14 d,末次给药12 h后取背部皮肤,测定皮肤厚度及质量,进行HE染色和甲苯胺蓝染色,ELISA法检测皮损组织中干扰素（IFN）γ、肿瘤坏死因子（TNF）α、白细胞介素（IL）-4、IL-5含量。利用磷酸组胺诱发Hartley豚鼠局部皮肤瘙痒模型,观察除湿止痒软膏对豚鼠致痒阈的影响。 结果 用药后第15天,与模型对照组相比,氢化可的松乳膏和除湿止痒软膏均可明显减少小鼠的背部皮肤厚度和质量（P < 0.01）,减少淋巴细胞和肥大细胞浸润（P < 0.01）以及降低皮损组织中IFN-γ、TNF-α、IL-4及IL-5水平（P < 0.05或P < 0.01）。与正常对照组相比,氢化可的松乳膏组小鼠背部皮肤厚度和质量减小（P < 0.01）,除湿止痒软膏组无明显变化。此外,除湿止痒软膏也可显著提高豚鼠耐受磷酸组胺的致痒阈（P < 0.01）。 结论 除湿止痒软膏可明显抑制DNFB引起的小鼠特应性皮炎,其抗炎机制可能与恢复体内Th1/Th2型细胞因子平衡有关。除湿止痒软膏可明显减轻磷酸组胺所致豚鼠皮肤瘙痒反应。     

利凡诺急性及亚慢性毒性实验研究

用国产利凡诺参照有关标准方法进行小鼠急性、亚急性、蓄积性毒性实验,豚鼠致敏实验及犬亚慢性毒性实验,结果表明:急性毒性实验的LD_(50)(i.v)为(18.94±2.90)mg/kg,属中等毒性物质。动物静脉连续给药(1mg/kg)2～3个月,小鼠亚急性或犬亚慢性毒性实验,均未见任何毒性作用。剂量增至9mg/kg,亦未见犬有毒性表现,仅小鼠肝组织出现轻度变性、细胞局灶性坏死、炎症细胞浸润、枯夫氏细胞增生,其余脏器未见异常。蓄积性实验结果LD_(50)为19.3mg/kg,大于LD_(50),说明利凡诺在小鼠体内无明显蓄积作用。豚鼠腹腔给药无致敏反应。     

5-FC/CD∷UPRT联合基因对大鼠脑胶质瘤的治疗作用

目的探讨5-氟胞嘧啶(5-FC)/CD∷UPRT联合基因系统对大鼠脑胶质瘤的治疗作用。方法以逆转录病毒介导构建C6-CD∷UPRT细胞系,应用立体定向技术移植C6-CD∷UPRT细胞至SD大鼠尾状核,设立C6-pLXSN和C6细胞为对照组,建立脑胶质瘤荷瘤鼠模型,应用5-FC腹腔注射治疗,观察肿瘤大小、大鼠存活期、电镜观察细胞形态和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡指标的变化。结果5-FC/CD∷UPRT治疗组(A组)与各对照组相比,A组肿瘤直径平均为(4.2±0.7)mm,远小于对照组的(8.3±1.3)mm,(P<0.01);对照组平均存活期(32±3)d,A组为(85±2)d(P<0.01);A组电镜显示核染色质分裂明显,并见典型的凋亡小体;A组肿瘤细胞中凋亡细胞所占百分率为19.36%。结论5-FC/CD∷UPRT联合基因对大鼠脑胶质瘤有显著的治疗效果。     

医学微生物学各论教学构建PBL案例教学法的探讨

医学微生物学教学存在课时少、各论内容繁杂且知识点琐碎、逻辑性较差等特点,虽不难理解,但易混难记,采用传统教学模式往往不能达到较好的教学效果。针对医学微生物学各论与临床医学的紧密联系性,为了实现基础知识和临床实践的衔接,提高医学微生物学各论的教学质量,提高学生综合素质,探讨医学微生物学各论教学中构建PBL案例教学法的必要性、实施步骤、优点、存在的问题以及解决的对策。     

HIV-1感染相关细胞因子IFN-γ通过Rta基因启动子激活人类疱疹病毒8型

目的　研究HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ对人类疱疹病毒 8型 (HHV 8)Rta基因启动子活性影响 ;评价Rta基因启动子在多种细胞中的启动活性。方法　将已构建的HHV 8Rta启动子 虫荧光素酶报告基因重组质粒和含HIV 1Tat基因重组表达质粒转染多种细胞 ,转染后 2 4h加入IFN γ和 或重组HIV 1gp12 0刺激 ,刺激后 2 4h收集细胞 ,进行虫荧光素酶活性检测。试验同时以佛波酯类化合物TPA刺激为阳性对照 ,进行最佳刺激时间点的选择和不同转染方法转染效率的比较。结果　①HHV 8Rta启动子启动活性在TPA刺激后的 2 4h达到最高峰 ;②HHV 8Rta启动子启动活性的发挥不依赖于HHV 8和 或EBV基因组的存在 ,且在血管内皮细胞 (HUVECs)中启动活性最佳 ;③IFN γ可以诱导Rta启动子活性 ;但HIV 1Tat和gp12 0蛋白与IFN γ协同上调Rta启动子活性的能力较弱。结论　HIV 1感染中相关细胞因子IFN γ至少部分通过Rta基因启动子激活HHV 8的复制