从GenBank获取基因序列及PCR引物设计的方法

去年9月,我参加中组部、团中央组织的“博士服务团”来到青海医学院工作,适逢格日力教授从美国回到青海组建高原医学研究中心,我发挥自己所长协助格教授筹建该中心所属的基因工程与分子生物学实验室。在青海半年多的工作实践中,我发现青海地区在医学科研方面与内地存在很大差距:缺乏进行深入研究必需的基本设备,人才严重缺乏,现有人员缺乏一些重要的基础知识,不能利用网络获     

耐热可溶性戊型肝炎病毒基因工程抗原的表达

目的 利用硫氧还蛋白融合表达系统表达戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus,HEV)结构基因片段，获得耐热，可溶、具有生物活性的HEV基因工程抗原。方法 将HEVORF26964-7126nt基因片段插入硫氧还蛋白融合表达载体pThioHisA，转化大肠埃希菌BL21，经IPTG诱导，表达融合蛋白。裂解细菌后，离心，取上清置于80℃处理10min，再次离心，取上清用ELISA方法测定表达产物的生物活性。结果 SDS-PAGE分析表明，HEV结构基因获得高效表达，相对分子质量约为20000，耐热，水溶性好，ELISA证实具有HEV特异抗原性。结论 应用硫氧还蛋白融合表达系统成功表达了耐热，可溶，具有生物活性的HEV基因工程抗原。     

丁型肝炎病毒抗原的原核表达及抗原性分析

目的 利用含T7启动子和His纯化标签pRSET B质粒构建丁型肝炎病毒抗原（HDAg）重组表达质粒（pRSETB-HDAg）,转化宿主菌,表达并纯化,获得生物活性高抗原性强的基因工程重组抗原.方法 将中国河南株HDAg基因片段插入pRSET B表达质粒,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导表达.表达产物经Chelating亲和层析纯化后,采用EIA方法分析HDAg的抗原性.结果 重组HDAg稀释1000倍（10 ng/ml）仍与抗体有较强的反应.经与美国HDAg和华美公司生产的HDV诊断试剂同时检测26份HDV阳性参比血清,三者结果比较,除美国抗原漏检1份,检出率为96.15%（25/26份）外,病毒CDC和华美试剂均无漏检,检出率为100%,三者检测结果具有很高的符合率.结论 成功构建了丁型肝炎病毒抗原重组表达质粒（pRSETB-HDAg）,在原核细胞获得稳定高效表达,EIA 检测证明HDAg抗原性好,可用于组装HDV诊断试剂,用于临床丁型肝炎患者的诊断和我国丁型肝炎病毒感染流行病学的调查.     

戊型肝炎病毒结构区基因在大肠杆菌中的表达

目的获得可用于研制戊型肝炎疫苗的基因工程抗原。方法用非融合蛋白表达载体ｐＥＴ１１ａ,表达戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）第二读码框区（ＯＲＦ２）２２４６６０ａａ段蛋白。结果得到分子量为５００００的表达产物,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实,表达产物具有ＨＥＶ特异抗原性。结论该基因工程抗原可能具有制备戊型肝炎疫苗的前景。     

二氢叶酸还原酶基因缺陷细胞株在HBsAg表达中的应用

目的 利用二氢叶酸还原酶缺陷的中国仓鼠卵巢细胞（CHO－dhfr^-）和携带二氢叶酸还原酶基因的质粒载体,建立高效表达乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的细胞系,以提高HBsAg在哺乳动物细胞中的表达产量。方法 将HBsAg基因插入pCI质粒,以脂质体方法转染CHO－dhfr^-细胞,在氨甲喋呤选择压力下,筛选HBsAg表达阳性细胞克隆。结果 所获28株单克隆化细胞系,18株表达HBsAg,产量高者为4株。结论 通过HBsAg的高效表达证明,二氢叶酸还原酶缺陷细胞株和相应载体是哺乳类上源基因的有效体系之一。     

信息整合对改善乙型病毒性肝炎监测作用的评价

目的评价信息整合对改善乙型病毒性肝炎监测的作用,提出改善监测建议。方法选择按现住址为章丘市的45例乙肝报告病例作为调查对象,通过调查报告医院、病人随访和采血检测3个来源的信息,按照统一病例定义,依次整合信息,对报告病例感染状态进行重新判定,评价信息整合对改善乙肝监测的作用。结果通过对医疗机构和病例随访信息的整合,判定报告病例中乙肝携带者31%,急性乙肝9%,慢性乙肝7%,重报病例4%,非急性乙肝40%(仅基于病史),不能明确病例9%;再整合采血检测信息,判定乙肝携带者33%,慢性乙肝20%,急性乙肝13%,非病毒性肝炎2%,非急性乙肝20%,不能明确病例7%。结论乙肝报告病例是多种感染状态的混合体,其中急性乙肝仅占13%。通过整合不同渠道信息,可将报告病例中的多种感染状态进行分类,从而准确掌握我国乙肝实际发病水平。     

乙型肝炎病毒基因分型及其应用的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)基因分型作为HBV感染的分子流行病学调查，鉴定传染源，确定传播关系及发病机制和临床流行病学研究的一种有力工具，日益受到广泛重视。随着HBV基因分型方法的日趋完善及新基因型的发现，人们对HBV基因型有了进一步认识。本文就HBV基因型的分型和地理分布，HBV基因型与血清亚型的关系，HBV基因型和变异的关系及与临床治疗和转归的关系等相关研究进展作一综述。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的表达及其意义

目的 为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型的基因工程疫苗提供早期实验研究资料。方法 采取PCR和蛋白质原核细胞表达方法。结果 自我国病毒储备株中成功地克隆出了单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段特异基因，并获得高效表达。采用该抗原包被，自生殖系统感染者恢复期血清中均能查到针对该重组抗原的IgG抗体。结论 单纯疱疹病毒Ⅱ型小片段型特异基因的成功表达，为我国单纯疱疹病毒Ⅱ型感染者的特异性诊断和单纯疱疹病毒Ⅱ型疫苗的研究打下了基础。     

戊型肝炎病毒结构区基因ORF2在Pichia pastoris中的分泌表达

戊型肝炎是近年来被发现的一种较为严重的新型肝炎 ,经消化道传播 ,世界各地均有流行 ,戊型肝炎疫苗是预防和控制其流行的有效手段之一 ,而基因工程抗原作为候选疫苗有很好的应用前景。已被证实 ,戊型肝炎病毒 (ＨＥＶ)结构区基因ＯＲＦ2编码蛋白具有较强的免疫学活性。ＨＥＶ基因工程抗原的研制主要集中于ＯＲＦ2上。目前 ,ＯＲＦ2基因已成功在原核细胞、昆虫细胞中得到表达 ,表达产物均有一定免疫原性〔1〕。酵母表达系统以其表达产物类似于天然蛋白、能保持很好的生物学活性、表达条件易于控制、易于工业化生产等优势作为疫苗研制的载体…     

原核表达戊型肝炎病毒基因重组结构蛋白免疫保护恒河猴的初步实验研究

目的 观察基因重组戊型肝炎病毒（HEV）结构蛋白对恒河猴戊型肝炎野病毒攻击的保护作用。方法 用HEV重组结构蛋白免疫恒河猴，猴血清中抗-HEV升高后，与空白对照组一同用HEV野病毒攻击，采血观察野病毒攻击前后ALT和HEV抗体等的动态变化。结果 野病毒攻击后第3周，空白对照组5只猴ALT均出现明显异常，而免疫接种组5只猴ALT均正常，未观察到明显的肝脏炎症表现，结论 HEV重组结构蛋白免疫恒河猴之后，可以有效地保护HEV野病毒的攻击，该HEV重组结构蛋白可作为戊型肝炎基因工程疫苗的候选蛋白。