小鼠成牙关键调控基因的筛选与功能验证实验研究

  目的  筛选小鼠成牙关键基因,并验证关键基因对羊膜上皮细胞（WISH）成牙诱导分化的能力。  方法  通过免疫组化染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测骨形成蛋白4（BMP4）、成纤维细胞生长因子8（FGF8）、音猬因子（SHH）、淋巴增强因子（LEF1）4种分子蛋白和基因在小鼠早期牙胚发育过程〔小鼠胚胎发育第10.5天(E10.5)、E11.5、E14.5〕中的时空差异化表达,筛选可能的成牙关键基因;非牙源性上皮WISH成骨诱导培养3周,采用茜素红（ALZ）染色与RT-qPCR检测碱性磷酸酶（ALP）观察骨向分化能力;通过胚层重组实验进行组织重组,将BMP4蛋白加入重组组织块,并移植于小鼠肾被膜下,观察验证关键基因的蛋白能否诱导非牙源性上皮成牙分化。  结果  免疫组化染色和RT-qPCR结果证实E10.5胎鼠BMP4蛋白和基因在第一、第二腮弓上皮存在差异性表达,且从E10.5~E14.5其表达与成牙能力从上皮向间充质的转移一致;FGF8蛋白和基因虽在第一、第二腮弓上皮存在差异性表达,但其表达与成牙能力的转移不一致;LEF1、SHH蛋白和基因在第一、二腮弓上皮不存在差异表达,且与成牙能力的转移不一致,因此,筛选出BMP4基因为可能的成牙关键基因。WISH成骨诱导3周,ALZ染色阳性,并形成钙结节,RT-qPCR检测ALP mRNA表达升高;胚层重组实验结果显示,加入外源性的BMP4蛋白可使第二腮弓间充质分别与第二腮弓上皮及WISH均有牙齿样结构形成。  结论  BMP4、FGF8、SHH、LEF1的蛋白和基因在小鼠牙胚早期发育过程中呈时空特异性表达;BMP4的蛋白和基因在第一、二腮弓上皮差异表达,且其蛋白可使与第二腮弓间充质重组的非牙源性上皮获得成牙能力。BMP4为可能的成牙关键基因。     

mir-335-5p在肺癌骨转移中的变化及意义

目的:检测原位癌和肺癌骨转移患者全血中mir-335-5p的表达情况,并探讨其意义.方法:选择健康人血液样本12例、未转移肺癌患者样本15例、肺癌骨转移患者样本15例.从外周血样本中提取miRNA并合成cDNA,使用Q-PCR技术扩增mirna,分析CT值以阐明mir-335-5p表达水平与各组之间的关系.结果:mir...     

“言不尽意”与中医学思想方法

根植于东方传统文化土壤的中医学,在其发生、发展、演化的进程当中,无时无刻不受到中国古代哲学思想的影响与启迪。试从＂言不尽意＂与中医学思想方法的角度,探讨前者对后者的指导作用。考察中医学＂言不尽意＂的特点,不难发现,用语言去描述意象,存在着很大的局限性。因为语言在表达意象的过程中,不能也不可能做到尽善尽美。因而,中医学在语言文字的表述方面经常会借用形象化描述。通过中医临床观察分析,进行系统科学的临床研究和实践,找到最直接体现人体病变意象的临床思维模式,具有非常重要的现实意义。     

基于Kinect的帕金森病步态不对称性识别方法

目的开发一种基于深度图像的非接触式帕金森病步态不对称性识别方法,以辅助医疗诊断和评估,解决穿戴型传感设备费用高、影响正常生活且检查流程复杂的问题。方法 2016年7月至8月,对帕金森病患者8例和健康人10例,采用Kinect V2.0采集行走6 m的运动数据;对左右脚参数滤波处理后分别聚类,使用相似度矩阵算法分别计算健康人和帕金森病患者相似度值;使用隐马尔科夫模型验证该方法的识别效果。结果所有患者左右脚参数聚类序列相似度小于健康人;从患者中提取的14条数据,成功识别12条(85.71%);从健康人中提取的46条数据,成功区别35条(76.09%)。结论基于左右脚位移过程中步态参数聚类结果不对称性的非接触式识别方法,对于帕金森病患者有一定识别效果。     

慢性肾炎的中医临床研究概况（下）

2治法方药2．1辩证论治辨证分型内容包括气血、阴阳的亏损,风、寒、湿、热、毒的入侵,体现出内因与外因相结合,正虚与邪实相兼顾。于德岁等［31］分别对肾阳虚型用真武场合五等散,肾阴虚型用地黄饮子,热毒型用五味消毒饮,表虚不固型用玉屏风散,脾虚气弱型用参等白术散合升陷场,血瘀型用补阳还五汤加味冶疗;同时配合相应西药。112例中,完全缓解25例,基本缓解44例,有效15例,无效28例。潘家菜等［32］将本病分为脾肾阳虚、水湿内停,阴虚火旺、湿热内蕴,复感外邪等3型,分别治以自拟方剂,治疗44例,总有效率100％。姚金玉等［33…     

高龄社区获得性肺炎患者护理探讨

目的 探讨高龄社区获得性肺炎患者护理要点,以提高高龄老年社区获得性肺炎护理水平。方法 对 35 例≥ 80 岁老 年社区获得性肺炎患者的临床资料及护理进行回顾性分析。结果 本组患者住院时间 6～46 d,其中治愈 32 例,死亡 3 例。 结论 高龄老年社区获得性肺炎患者基础病多,临床症状不典型,病情凶险,护理应侧重环境管理、饮食卧位管理、呼吸 道管理、基础护理、心理护理、预防院内交叉感染,同时重视呼吸频率与血压、意识障碍等风险因素的评估,实施科学 个体化整体护理,促进患者康复。     

经方治验四则

经方,素以药味较少、组方严谨、配伍精当、疗效确切而著称。在临床治疗常见病、多发病以及疑难病的过程中,如果使用得当,常能收到一剂知、二剂已的治疗效果。本文特择取笔者临床运用经方的验案4则,     

《全国名医验案类编》学术特色举要

《全国名医验案类编》是清末民初著名医家何廉臣的代表著作。该书为何氏搜集当时全国90位名医的验案300余则分类汇编而成。书中内容以急性外感热病的中医治疗为主,并附以何氏按语进行点评,具有很高的理论研究和临床实践价值。为了更好地学习《全国名医验案类编》,笔者将该书的学术特色归纳为专注外感,资料宏富、格式统一,记录翔实、按语精当,画龙点睛3个方面。     

810nm弱激光对M1型骨髓源性巨噬细胞的作用及其机制

目的 :体外建立M1型骨髓源性巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDM)-弱激光照射模型,探讨弱激光照射对M1型BMDM炎症因子分泌的影响及其可能机制。方法:体外分离BALB/c小鼠BMDM,应用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)条件性培养基培养,流式细胞术检测巨噬细胞标志物F4/80的表达,确定所获得细胞为纯度较高的BMDM。应用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激24h诱导原代BMDM向M1型BMDM方向极化。将细胞随机分为弱激光治疗(low level laser therapy,LLLT)组和对照组,LLLT组采用810nm波长激光照射,光斑面积4.5cm2,照射功率密度2m W/cm2,照射持续440s,最终获得照射能量为4J,对照组置于暗箱,不进行照射。应用CCK8实验测定细胞活性,RT-PCR检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interlukin-1β,IL-1β)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthases,i NOS)的m RNA表达情况,ELISA检测TNF-α及IL-1β蛋白分泌,Western blot测定i NOS和M1型巨噬细胞极化的重要转录因子核因子-κB p65(nuclear factor-kappa B,NF-κB p65)的表达。组间比较采用独立样本t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果:LPS刺激后,使用弱激光照射的M1型BMDM细胞活性显著提高,升高至对照组的2.313±0.630倍(P0.05)。LLLT组IL-1βm RNA表达为0.586±0.145,对照组为1.000±0.022,两组比较有统计学差异(P0.05);LLLT组TNF-α的m RNA表达为0.862±0.152,对照组为1.000±0.082,两组比较无统计学差异(P=0.082);LLLT组i NOS的m RNA表达为0.720±0.039,对照组为1.000±0.024,两组比较有统计学差异(P0.05)。对照组TNF-α为270.478±26.831pg/ml,LLLT组为209.365±5.600pg/ml,两组比较有统计学差异(P0.05);对照组的IL-1β为98.941±12.430pg/ml,LLLT组为77.076±2.023pg/ml,两组比较有统计学差异(P0.05)。对照组的i NOS蛋白表达为1.005±0.075,LLLT组为0.210±0.010,两组比较有统计学差异(P0.05);对照组NF-κB p65蛋白表达为1.006±0.260,LLLT组为0.428±0.169,两组比较有统计学差异(P0.05)。结论:810nm LLLT M1型BMDM可抑制其炎性因子IL-1β及i NOS的m RNA表达,下调炎性因子IL-1β及TNF-α的分泌,降低M1型BMDM表面标志物i NOS的表达,同时显著下调M1型巨噬细胞经典极化转录因子NF-κB p65的表达。810nm LLLT可调控M1型巨噬细胞的极化状态,抑制其炎性因子分泌,该调控作用和其下调M1型巨噬细胞经典极化转录因子NF-κB p65有明显相关性。