从患出血性肠炎的大熊猫粪便中分离出两株细菌的外膜蛋白提取与鉴定

大熊猫是世界珍贵的稀有动物.是我国的国宝。近年来成都动物园的熊猫曾连续发生出血性肠炎,并有死亡。为了探索该病的病原,高巽坤等曾从患病熊猫粪便中分离出两株细菌。经形态学、培养特性及生化反应等方面的鉴定,一株属肺炎克雷伯氏菌(苏     

铜绿假单胞菌Quorum-Sensing系统中rhlR基因的克隆表达及其免疫保护性研究

目的研究铜绿假单胞菌rhlR表达产物的分子生物学特性,以及对小鼠的免疫保护作用。方法以铜绿假单胞菌标准株PAO1的基因组DNA为模板,PCR方法扩增rhlR基因。利用pGEX4T-1载体构建rhlR-pGEX4T-1重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用免疫印迹验证。同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率。结果rhlR的全基因序列为726bp,经序列分析和同源性比较,与GenBank中的rhlR基因(登录号:AE004768)完全一致。大肠杆菌BL21(DE3)转化重组质粒rhlR-pGEX4T-1后,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达的融合蛋白质相对分子质量为54×103,其中RhlR蛋白为27×103。体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率与未经免疫的正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的rhlR-pGEX4T-1重组质粒能够在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地表达出具有生物学活性的RhlR蛋白。重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用。     

冰黄肤乐软膏抗皮肤癣菌活性及止痒作用研究

目的：研究冰黄肤乐软膏抗皮肤癣菌活性及止痒作用。方法：使用体外抑菌法及豚鼠止痒模型。结果：冰黄肤乐软膏对皮肤癣菌三个属（毛癣菌属、表皮癣菌属、小孢子菌属）的代表株及临床株均有较强的抑菌和杀菌作用,并且对磷酸组胺豚鼠痒阈值具显著提高作用。结论：冰黄肤乐软膏为一具有较好的抗癣止痒作用的天然药物复方制剂。     

糠秕马拉色菌蛋白酶活性的研究

目的　检测不同来源糠秕马拉色菌菌株的蛋白酶活性并研究蛋白酶活性与其致病性的关系。方法　使用全脂牛奶平板法检测糠秕马拉色菌 3 3株临床分离株和 2 8株正常皮肤分离株蛋白酶活性 ,并选择蛋白酶活性不同的 3株菌以静脉内注射方式感染免疫抑制小鼠进行毒力实验 ,以小鼠死亡率和平均生存时间来评价菌株毒力。结果　糠秕马拉色菌临床分离株蛋白酶活性高于正常皮肤分离株 (t =5 .2 96,P <0 .0 1) ,动物试验表明蛋白酶活性愈高的菌株 ,相应死亡率愈高 ,小鼠平均生存时间愈短 ;蛋白酶活性与菌株致病性呈直接正相关 (r =0 .992 5 ,P <0 .0 1)。结论　糠秕马拉色菌临床分离株蛋白酶活性高于正常皮肤分离株 ,蛋白酶活性高低与菌株的致病性相关     

临床分离产IMP-1型金属酶非发酵菌的耐药机制研究

从临床收集耐亚胺培南的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌共50株,进行头孢他啶和2-巯基乙醇的表型协同试验(CAZ ME),然后进行金属酶IMP-1基因的PCR检测。选取IMP-1阳性株测序,用PCR方法检测有无一类整合子基因(IntI1)。表型的检测发现有28株为协同阳性,其中铜绿假单胞菌27株,鲍曼不动杆菌1株。PCR和测序检测出其中一株铜绿假单胞菌含有IMP-1基因,同时也含有IntI1基因。首次在中国西部地区发现产IMP-1型金属酶、同时也含有一类整合子的铜绿假单胞菌,对于临床上研究细菌的耐药性传播具有重要意义。     

溶原性噬菌体对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响

目的研究铜绿假单胞菌（PA3094）溶原性噬菌体Ppa3094对该菌生物被膜形成的影响。方法采用平板培养法建立PA3094及PA3094-L（带前噬菌体Ppa3094的溶原性菌株）两株菌的体外生物被膜模型;MTT法测定生物被膜形成过程中两株菌的生物被膜活菌量;实时荧光定量PCR测定两株菌在培养不同时间点藻酸盐合成基因MgC、algD的表达量。结果两株菌均在培养5～7d时形成成熟的生物被膜,呈薄膜状。在生物被膜形成过程中,两株菌的生物被膜菌量存在明显差异,在整个生物被膜形成过程中,PA3094生物被膜菌量均比PA3094-L高;PA3094-L在培养第5d时生物被膜菌量达最高,第7d有所下降。随着培养时间的延长,藻酸盐合成基因algD、algC表达量均上调,但PA3094-L表达量均比PA3094低,且algC表达量差异更大。结论铜绿假单胞菌溶原性噬菌体Ppa3094可降低藻酸盐合成基因algD、algC的表达,从而影响生物被膜的形成。     

成都市健康中青年人群外周血淋巴细胞免疫表型正常参考值调查

目的:调查成都地区健康人群中外周血淋巴细胞免疫表型分布,建立该地区淋巴细胞免疫表型正常值参考范围.方法:使用流式细胞术对112例健康人群外周血中各淋巴细胞亚群免疫表型检测并分析结果,运用SPASS17.0进行统计学分析,确定各淋巴细胞亚群正常值参考范围.结果:成都地区30岁～50岁健康人群外周血淋巴细胞亚群正常值参考范围为:CD3+CD19-,33%～86%;CD3+CD4-CD8+,7%～38%;CD3+CD4+CD8-,12%～63%;CD3-CD19+,2%～19%;CD3-CD(16+56)+,6%～43%.结论:建立了成都地区健康中青年人群外周血中各淋巴细胞亚群免疫表型正常值参考范围,为分析和研究机体细胞免疫状态及肿瘤、免疫性疾病的预防提供了参考依据.     

铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株Ⅱ类拓扑异构酶基因突变的研究

用PCR方法，扩增26株临床分离铜绿假单力环丙沙星耐药株、4株环丙沙星敏感菌株和PA01菌株的Ⅱ类拓扑异构酶gyrA、gyrB、parC和parE基因的喹诺酮类药物耐药决定区（QRDR）基因片断；并对铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变与耐药性关系进行研究。结果表明90％以上的铜绿假单胞菌耐药株表现出Ⅱ类拓扑异构酶基因突变（26株中有24株）。突变主要发生在gyrA基因（22株）和parC基因（14株）上，其中gyrA基因的第83位氨基酸密码子表现出高频突变（22株中有21株，ACC→ATC，占90％），parC基因第80位氨基酸密码子也表现出较高的突变率（14株中有12株，TCG→TTG，占60％），4株耐药株的gyrB和3株耐药株的parE基因发生单点突变，2株耐药株Ⅱ类拓扑异构酶基因朱检测到突变。用二倍稀释法，测定部分喹诺酮和β→内酰胺类药物对耐药突变株的体外抗菌活性。表明铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变株对诺氟沙星、左氧氟沙星、哌拉西林、头孢他啶和亚胺培南表现出不同的敏感性。试验所用24株突变株对诺氟沙星呈现100％的耐药；对左氧氟沙星65％的耐药；40％的菌株对哌拉西林表现出耐药；30％的菌株对头孢他啶耐药；75％的菌株对亚胺培南敏感。     

熊胆贝母止咳胶囊的体外抗病毒作用的实验观察

目的:观察熊贝止咳胶囊是否具有体外抗病毒的作用。方法:按常规病毒体外试验,首先将熊贝止咳胶囊粉溶于Hank’s液,以二倍稀释法配制成1∶20~1∶2560浓度,分别加入狗肾传代细胞(MDCK)和Hela细胞培养板中,100μl.孔-1,连续7日于37℃5%CO2孵箱中培养,逐日观察,测其对细胞无毒性作用的最大药物浓度。然后以100 TCID50的流感病毒川属99和柯萨奇病毒(CVB3)分别加入MDCK和Hela细胞培养板中,分别吸附2.0h和1.5h,去病毒液后,于MDCK细胞培养板孔中分别加入熊贝止咳胶囊最大无细胞毒性药物浓度稀释液,并以病毒唑1∶20~1∶20480作平行阳性对照。而在Hela细胞培养板中,分别加入无细胞毒性熊贝止咳胶囊1∶80~1∶640的药液,亦以病毒唑1∶80~1∶640作平行阳性对照。100μl.孔-1,每浓度3孔,并设空白细胞和病毒对照,37℃5%CO2孵箱中培养,逐日观察细胞病变,当病毒对照组细胞出现约有75%以上细胞病变时终止试验,当细胞发生约50%细胞病变以上时,则判受试药物该浓度对该病毒无抑制作用。结果:测得熊贝止咳胶囊对MDCK和Hela细胞的无毒性浓度分别为1∶2560和1∶80;而病毒唑对两株细胞的无毒性浓度均为1∶20。实验显示熊贝止咳胶囊1∶2560~1∶20480的各种浓度对流感病毒川属99无抑制作用;1∶80~1∶640的浓度对CVB3无抑制作用。结论:熊贝止咳胶囊对MDCK和Hela细胞的无毒性浓度以下各浓度,对流感病毒川属99和CVB3在体外无明显的抑制作用。