红背叶根对免疫性肝纤维化大鼠血流变及微循环的影响

目的观察红背叶根对免疫性肝纤维化大鼠血流变和微循环变化的影响,从＂络病学说＂探讨其抗肝纤维化的中医病机。方法制备猪血清致大鼠肝纤维化模型,观察红背叶根对该模型动物的全血黏度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、舌下及耳廓的脉络变化的影响。结果红背叶根能显著降低肝纤维化大鼠的全血黏度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、透明质酸酶（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、Ⅳ型胶原（CIV）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）指数,改善纤维化大鼠舌下和耳廓脉络的循环状态。结论红背叶根对免疫性肝纤维化大鼠血流变和微循环变化的改善,提示＂活血通络＂可能是其抗肝纤维的主要病机之一。     

番石榴叶乙醇提取物的化学成分研究

采用多种色谱手段,对番石榴叶95%乙醇提取物的化学成分进行分离和纯化,并根据理化性质和光谱数据进行结构鉴定。从番石榴叶中分离得到18个化合物,分别为（+）-globulol（1）,clovane-2β,9α-diol（2）,2β-acetoxyclovan-9α-ol（3）,（+）-caryolane-1,9β-diol（4）, ent-T-muurolol（5）,clov-2-ene-9α-ol（6）,异植物醇（7）,柽柳黄素（8）,棉花素（9）,槲皮素（10）,山柰酚（11）,guajaverin（12）,avicularin（13）,chrysin 6-C-glucoside（14）,3’-O-methyl-3,4-methylenedioxyellagic acid 4’-O-β-D-glucopyranoside（15）,对羟基苯甲酸（16）,guavinoside A（17）和guavinoside B（18）。化合物 2~9,14~16为首次从该植物中分离得到。体外抗肿瘤活性筛选表明,番石榴叶95%乙醇提取物在60 mg·L^-1下对SW480细胞的抑制率达到61.3%。     

不同干燥方法对甘草醇提物中甘草苷含量的影响

目的 考察不同干燥方法对甘草醇提物中甘草苷含量的影响.方法 采用HPLC法测定常压干燥品,减压干燥品,冷冻干燥品.微波干燥品中甘草苷的含量.结果 各干燥品中甘草苷的含量依次是提取液>冷冻干燥品>微波干燥品>减压干燥品>常压干燥品.结论 在干燥过程中甘草苷的含量均有降低,冷冻干燥损失最小.     

人FAT10蛋白过表达诱导饥饿状态下HEK 293细胞发生凋亡

目的:采用flag标记的人FAT10蛋白研究人FAT10蛋白对HEK293细胞的影响。方法:将FAT10基因片段克隆到载体pcDNA3-flag上,对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,用脂质体转染HEK293细胞,用Western blotting方法检测外源性FAT10正常培养状态和饥饿状态下的HEK293细胞中的表达情况;并用XTT法和DNA ladder法观察正常培养和饥饿状态下HEK293细胞的凋亡情况。结果:重组质粒在HEK293细胞中高效表达,但在正常培养状态下和饥饿状态下表达情况不同。饥饿状态下,过表达FAT10的HEK293细胞存活率显著低于对照细胞,并且出现DNA ladder现象。结论:成功构建了带Flag标签的FAT10真核表达质粒,可在HEK293细胞中高效表达;FAT10过表达促进饥饿状态的HEK293细胞发生凋亡。     

过表达HSP20的慢病毒载体对H2O2诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的构建过表达大鼠热休克蛋白20(HSP20)基因慢病毒载体,探讨其对H2O2诱导的大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠HSP20基因pHIV-HSP20过表达质粒慢病毒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其转染效率;包装慢病毒并转染H9C2心肌细胞;72 h后观察其转染效率,RT-PCR法检测细胞HSP20 mRNA表达,CCK-8、Hochest33258染色法检测H2O2诱导后H9C2心肌细胞凋亡情况。结果成功构建了HSP20慢病毒过表达载体,经293FT细胞包装后,其对H9C2细胞72 h的转染效率为95%;与慢性病毒组比较,H9C2细胞转染72 h后HSP20 mRNA水平显著升高,细胞活力下降,心肌细胞凋亡率明显降低(P均<0.01)。结论过表达HSP20能显著抑制H2O2诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

靶向结直肠癌的小白菊内酯脂质体纳米颗粒诱导程序性坏死并改善T细胞耗竭

目的 研究小白菊内酯(PTL)诱导结直肠癌细胞程序性坏死,并通过调节T细胞耗竭抑制结直肠癌的发展的机制,并通过构建其靶向脂质体改进其临床应用。方法 通过CCK8实验检测不同结直肠肿瘤细胞经PTL处理后的增殖能力。利用ROS与LDH检测分析PTL诱导MC38细胞死亡的方式并进行蛋白免疫印迹分析。将24只小鼠随机分成对照组(等量生理盐水)、低剂量PTL组(5 mg/kg)与高剂量PTL组(15 mg/kg),通过在小鼠腹股沟皮下注射MC38细胞构建皮下瘤模型,给药后检测各组小鼠皮下瘤的重量与CD8⁺T细胞的浸润情况,分析CD8⁺T细胞耗竭表型的变化。构建PTL脂质体并对其进行表征。通过在小鼠回盲部移植肿瘤构建结直肠癌原位移植瘤模型,将32只小鼠随机分成对照组(等量生理盐水)、PTL处理组(100μg/mL)、低剂量靶向脂质体TCP-1-PTL-LNPs组(100μg/mL)和高剂量TCP-1-PTL-LNPs组(200μg/mL),尾静脉注射给药,通过免疫组化分析CD8在肿瘤中的表达情况。结果 多种结直肠癌细胞(SW480、DLD1、HCT116...     

逍遥散调控肝窦内皮窗孔改善大鼠抑郁样行为的机制研究

【目的】探讨逍遥散对大鼠抑郁样行为的作用及其调节机制。【方法】将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组（剂量为19 g·kg－1·d－1）和氟西汀组（剂量为2 mg·kg－1·d－1）。采用慢性不可预测轻度应激（chronic unpredictable mild stress, CUMS）诱导大鼠抑郁样行为,旷场实验观察逍遥散对抑郁样行为的作用, Luminex液相芯片分析系统检测大鼠血清细胞因子,电镜观察大鼠肝窦内皮窗孔数量和大小, Western blot法分别检测肝组织中吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO）和色氨酸2,3-双加氧酶（tryptophan 2,3-dioxygenaes, TDO）表达。【结果】逍遥散可显著增加大鼠糖水消耗、爬格数和直立数,显著降低血清TNF-α、 IL-6水平,增加窗孔数量与大小,改善肝窦内皮血管化倾向,并降低TDO和IDO的表达（均P＜0.05或P＜0.01)。【结论】逍遥散可显著改善大鼠抑郁样行为,可能与其降低炎症因子、抑制IDO通路、改善肝窦内皮功能作用有关。     

不同频率振动应变对成骨细胞增殖及分化能力的影响

目的 观察不同频率振动应变(vibration strain)对体外培养成骨细胞细胞周期、增殖能力及分化的影响,确定最佳振动频率.方法 应用自制复合振动仪,将振动强度0.5g(g为加速度),不同频段3～10、15～30、25～45、50～80和80～100Hz振动应变分别作用于成骨细胞,振动应变加载后分别检测细胞周期、细胞增殖能力(MTT法)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性的变化.结果 15～30和25～45Hz频段诱导成骨细胞周期循环(P<0.01),促进细胞增殖(P<0.01),增强ALP活性(P<0.01);80～100和3～10Hz频段抑制细胞周期循环(P<0.01);80～100Hz频段抑制细胞增殖(P<0.01);50～80和80～100Hz频段抑制ALP活性(P<0.01).结论 不同频率振动应变对成骨细胞周期、增殖能力、ALP活性均有影响,振动应变促进成骨细胞增殖及分化的最佳频率为15～45Hz.     

小檗碱通过ROS及caspase通路对肝癌HepG2细胞凋亡的作用

目的 探究小檗碱(BBR)对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L) BBR对肝癌HepG2细胞的抑制作用;采用Hoechst 33342染色观察处理后HepG2细胞形态学变化;用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率;间接荧光标记法检测BBR对细胞内活性氧簇(ROS)水平的影响;JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位的变化;应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、Cleaved-caspase-3的表达变化.结果 MTT法显示BBR可呈剂量、时间依赖性抑制肝癌HepG2细胞活力(P＜0.05);Hoechst 33342染色发现细胞形态发生明显变化,0μmol/L BBR处理的细胞呈淡蓝色,处理组细胞核固缩,形成凋亡小体,细胞凋亡率与药物浓度呈正相关(P＜0.05).流式细胞术发现BBR能使细胞内ROS升高,线粒体膜电位水平下降.Western blot法显示随着药物浓度升高,Bax、Cleaved-caspase-3、cleaved-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达增强,Bcl-2蛋白表达降低,凋亡相关蛋白caspase-3表达下降.结论 BBR在体外可能通过增加ROS、提高促凋亡蛋白Bax并激活caspase-3表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

川芎水提液化学成分谱HPCE方法学研究

目的:建立川芎水提液所含化学成分谱毛细管电泳分析的方法.方法:采用HPCE/DAD分析技术,缓冲液为含5%乙腈的30 mmol/L硼砂(NaOH调pH 9.60),压力进样:0.5 psi,5 sec;分离电压:25 kV;毛细管温度:20℃.结果:建立了川芎水提液化学成分谱的HPCE分析方法,并鉴定了川芎嗪.结论:川芎水提液HPCE分析方法的建立,为川芎水提液指纹图谱的研究奠定了基础.