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目的:通过指数富集的配基系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment ,SELEX)筛选能与高亲和力(1,3)‐β‐D‐葡聚糖特异性结合的适配子,并用该适配子建立双适配子夹心酶联寡聚核苷酸吸附试验(enzyme‐linked oligonucleotide assay ,ELONA)来对深部真菌感染血浆进行辅助诊断。方法提取白色念珠菌 ATCC10231株细胞壁(1,3)‐β‐D‐葡聚糖,通过 SELEX 筛选获得能与(1,3)‐β‐D‐葡聚糖特异性结合的高亲和力单链 DNA 适配子,并用该适配子建立双适配子夹心ELONA 来检测深部真菌感染血浆中的(1,3)‐β‐D‐葡聚糖。结果从白色念珠菌细胞壁中成功提取了高聚合度(1,3)‐β‐D‐葡聚糖,并通过体外酶解获得可溶性低聚合度(1,3)‐β‐D‐葡聚糖作为筛选靶标。用SELEX 进行12轮筛选后,从初始单链 DNA 文库中获得2个高亲和力适配子 AU1和 AD1,检测发现它们并非结合于(1,3)‐β‐D‐葡聚糖的同一表位。双适配子夹心 ELONA 检测深部真菌感染血浆中(1,3)‐β‐D‐葡聚糖的特异性和敏感度分别为91.94%和92.31%。结论从初始单链 DNA 文库中成功获得可与(1,3)‐β‐D‐葡聚糖特异结合的高亲和力适配子,为深部真菌感染新型诊断试剂的研发奠定了基础。 相似文献
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目的构建人肥大细胞类糜蛋白酶(MC—Chy)分泌型真核表达载体。方法以MC-Chy基因的质粒pDEST17/CMA为模板,通过PCR扩增出融合有免疫球蛋白K链信号肽的人MC—Chy基因,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1,通过PCR、酶切和DNA测序鉴定。结果PCR扩增出免疫球蛋白K链融合人MC-Chy基因,DNA序列测定结果显示目的基因片段正确插入真核表达载体pcDNA3.1。结论成功构建了人MC-Chy分泌型真核表达载体,为下一步重组类糜蛋白酶的制备及其功能的深入研究奠定了基础。 相似文献
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[目的]为了解青海省健康人群流脑抗体水平。[方法]采用间接酶联免疫法原理检测人血清中的A群、C群脑膜炎球菌多糖(IgG)抗体。[结果]A群流脑抗体水平整体要比C群流脑抗体水平高。[结论]了解人群免疫状况,识别高危地区和高危人群,加强预防控制工作。 相似文献
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目的对脑炎、脑膜炎症侯群病原学监测中所获得的病原体进行病原鉴定,了解青海省脑炎、脑膜炎症候群的病原谱构成。方法依据"艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项传染病监测技术平台项目《脑炎脑膜炎症候群监测技术方案》。结果监测病例280份,检测脑脊液275份,有菌生长37份,其中目标菌6株,其它菌31株。检测全血263份,有菌生长3份,未检出目标菌,检出其它菌3株。结论传染病病原监测平台提高了全省传染病监测预警能力;抗生素滥用是影响细菌学检出率的重要原因;用药前采样非常重要,采样及检验过程严格按要求操作是保证检验结果准确性的关键,同时应加强预防院内感染。 相似文献
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目的 验证幽门螺杆菌(H.pylori)能够通过诱导B细胞特异性Moloney小鼠白血病病毒整合位点1 (Bmi-1)高表达促进胃癌细胞的转移。方法 收集82名胃癌患者手术标本,实时定量PCR和免疫组织化学染色检测胃腺癌组织Bmi-1的表达,并回顾性分析Bmi-1表达与胃癌病理特征及预后的相关性;采用pLPCX-Bmi-1质粒转染和H.pylori感染GES-1细胞,在过表达Bmi-1后,TranswellTM实验检测细胞的侵袭能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果 胃癌组织中Bmi-1的mRNA及蛋白表达均高于癌旁组织,且高表达Bmi-1与肿瘤浸润程度、 TNM分期、分化程度、淋巴结转移及H.pylori感染相关;转染及H.pylori感染所致的Bmi-1表达上调后,GES-1细胞具有更高的侵袭能力和较低的凋亡比率。结论 H.pylori感染能上调Bmi-1表达,抑制胃癌细胞的凋亡并促进其侵袭。 相似文献
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目的 探讨星座链球菌感染的临床特点及对常用抗菌药物的耐药情况,为星座链球菌感染的诊断和治疗提供依据与方向。方法 收集2019年3月至2022年2月福建医科大学附属龙岩第一医院收治的60例星座链球菌感染者的临床资料,包括一般资料、临床表现、感染部位、辅助检查、治疗及转归、菌株分布、混合感染及药敏结果,回顾性分析患者的临床特点和分离菌株耐药情况。结果 男性和36~55岁患者是星座链球菌感染的主要群体,冬季发病率低;感染部位多见于腹腔和胸部,最常见受累器官为阑尾,以发热、腹痛、咳嗽咳痰等为主要临床表现。大部分患者的白细胞数(WBC)、中性粒细胞绝对值(NEUT)、C反应蛋白(CRP)及降钙素原(PCT)水平升高,血白蛋白(Alb)降低。16.7%病例合并有其他病原菌感染,与大肠埃希菌的共同感染最为常见。混合感染多见于腹内感染,患者住院时间较长;老年组(≥65岁)住院时间(t=3.418,P=0.001)和联合用药(χ2=3.972,P=0.046)要高于其他组别。星座链球菌对青霉素类、头孢菌素类等多种抗生素高度敏感,但对克林霉素、红霉素和四环素的耐药率较高。结论 星座链... 相似文献
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目的:建立一种自组装核酸适配子探针技术以实现深部真菌感染中外周血(1,3)-β-D-葡聚糖的可视化检测。方法:用碱酶解法提取白念珠菌(1,3)-β-D-葡聚糖并使用葡聚糖酶体外消化处理,获得的水溶性葡聚糖作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从单链DNA文库中筛选能够特异性识别并结合葡聚糖的DNA适配子;对筛选出的适配子进行结构设计,使其能够形成含血晶素(hemin)的G四联体结构,从而具有拟过氧化物酶特性,进一步催化TMB底物显色,肉眼判断颜色变化进行结果判读;对149例临床血清标本分别用建立的方法和G试验检测(1,3)-β-D-葡聚糖,评价检测效能。结果:成功提取白念珠菌(1,3)-β-D-葡聚糖并使用葡聚糖酶消化处理后经SDS-PAGE分离、糖原染色发现,其水溶性的(1,3)-β-D-葡聚糖主要分布在相对分子质量<1700、约4600和10000~15000区域。其中相对分子量小于10000的(1,3)-β-D-葡聚糖比例较高,将其作为适配子筛选靶标。经过8轮正向筛选和4轮负向筛选,将最后一轮ssDNA文库扩增为dsDNA并克隆至pUC19质粒,对单个阳性克隆扩增所得适配子进行相对结合力比较,获得6个结合力较高的适配子(命名为A1—A6)。竞争试验结果表明6个适配子能够识别4个不同位点。将高结合力适配子对不同浓度(1,3)-β-D-葡聚糖进行亲和力检测,肉眼可辨检出限为3.125 pg/mL,线性范围为1.6 pg/mL^400 pg/mL。对149例血清(1,3)-β-D-葡聚糖检测结果显示,适配子自组装显色系统检测性能优于G试验(χ^2=4.373,P=0.0365)。结论:成功自建可视化核酸适配子探针,实现外周血(1,3)-β-D-葡聚糖检测,且有望开发深部真菌床旁检测试剂盒。 相似文献
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一种二氧化氯消毒剂杀菌效果与腐蚀性的检测 总被引:7,自引:3,他引:7
为了解一种二氧化氯消毒剂的杀菌效果与腐蚀性,进行了悬液定量杀菌试验与金属腐蚀试验。结果,以含二氧化氯150 mg/L溶液对悬液中枯草杆菌黑色变种芽胞作用15min,对悬液中大肠杆菌与金黄色葡萄球菌分别以含二氧化氯15 mg/L与20mg/L溶液作用8min,杀灭率均为100%。未加酸活化的该剂于54℃放置14 d,二氧化氯含量下降率为63%。该剂含二氧化氯150 mg/L溶液对铜、铝、碳钢、不锈钢的腐蚀速率分别为0.0227、0.0153、0.0297、0.0123mm/a。该剂为杀菌效果、稳定性较好,对金属有轻度腐蚀作用的消毒剂。 相似文献