中国汉族人群系统性红斑狼疮患者信号传导和转录激活子4基因多态性研究

目的 探讨信号传导和转录激活子4(STAT4)基因多态性与中国汉族人群系统性红斑狼疮(SLE)的相关性.方法 运用焦磷酸测序的方法对SLE患者与健康对照组DNA中存在的3个单核苷酸多态性位点进行分型,并作统计学分析.结果 STAT4基因的3个单核苷酸多态性(SNP)及其构成的单倍型在患者与健康对照组间差异均有统计学意义[rs11889341:P=012 02,0R(95%CI)=1.22(1.044～1.424);m7574865:P=0.003 454,OR(95%CI)=1.25(1.076～1.451);rs8179673:P=0.004 275,OR(95%CI)=1.274(1.079～1.505)].结论 STAT4基因上ra11889341、rs7574865和rs8179673与中国汉族人群SLE的发病有关联,且STAT4是-个多种族均存在的SLE相关基因.     

PBX1基因对系统性红斑狼疮易感基因IFI16表达的影响

探讨PBX1基因转染人单核细胞系THP1后,对IFI16基因表达的影响。以携带人PBX1基因表达序列的复制缺陷型5型腺病毒载体(pDC315-PBX1-EGFP)转染THP1细胞后,采用实时定量PCR(RT-PCR)和Western blot技术分别在mRNA水平和蛋白水平检测PBX1和IFI16表达的变化。结果,pDC315-PBX1-EGFP转染THP1细胞后,PBX1基因的表达水平都增高,同时发现IFI16基因的表达水平降低。PBX1作为一种转录因子,能调节干扰素诱导蛋白IFI16的表达。     

DNA甲基化转移酶在MRL/lpr狼疮鼠CD4+T淋巴细胞中的表达水平研究及功能分析

目的 研究DNA甲基化转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B在发病MRL/lor狼疮鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的表达情况,并对其与免疫相关的甲基化敏感基因ITGAL、CD70的表达水平进行相关性分析.方法 CD4单抗标记的免疫磁珠分选小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)测定DNMTI、DNMT3A、DNMT3B和免疫相关的甲基化敏感基因ITGAL、CD70的相对表达量.结果 ①DNA甲基化转移酶DNMTI、DNMT3A、DNMT3B在发病MRL/lpr狼疮鼠CD4+T淋巴细胞中与健康对照BALB/c小鼠相比,表达水平均有降低趋势,其中DNMT3B差异有统计学意义(P<0.05);CD70在发病MRL/lpr狼疮鼠表达水平升高(P<0.01),ITGAL表达水平呈升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05).②相关性分析显示:DNMT3B与CD70分子表达水平呈显著负相关(r=-0.769,P<0.01).结论 DNMT3B在发病MRL/lpr狼疮鼠CD4+T淋巴细胞中表达水平降低,可能通过影响免疫相关的甲基化敏感基因CD70的表达,造成CD4+T淋巴细胞功能异常,参与系统性红斑狼疮的发病.     

N-copine基因反义核酸对原代培养的小鼠皮质神经元的影响

目的：通过研究N-copine基因反义核酸(ant isense)对体外培养的小鼠大脑皮质神经元的影响，在细胞学层面上探索N-copine基因的功 能。 方法： 原代培养小鼠大脑皮质神经元，用反义核酸抑制N-copine基 因的表达，分析抑制N-copine基因表达对神经元生长及死亡的影响。 结果：寡核苷酸处理72 h，antisense组神经元轴突长度短了而且胞体变小，而对照组神经元轴 突和胞体都正常生长；antisense组台盼蓝着色细胞明显多于对照组，培养液中LDH活力明显 高于 对照组。 结论： 抑制N-copine基因表达，能影响体外培养的皮质神经元 的生长，并导致神经元严重损伤和死亡。这提示N-copine可能是神经元的一种保护性蛋白， 可能具有防止神经元退变和促进再生的重要作用。     

系统性红斑狼疮患者中miR-146a表达缺陷与I型干扰素通路过度活化相关

Ι型干扰素(IFN)通路过度活化与固有免疫反应异常在系统性红斑狼疮(SLE)发病中起重要作用。miR-146a作为一个负调控因子,在固有免疫应答中发挥重要作用。为探索miR-146a在SLE发病中的作用,通过实时荧光定量聚合酶链反应技术检测18例SLE患者和11例正常对照miR-146a的表达,发现同正常对照组相比,miR-146a表达水平在SLE患者中明显降低,SLE活动组中下降则更加明显;同时检测miR-146a的靶基因IRAK1和TRAF6 mRNA表达,发现在SLE患者中其水平显著高于正常对照组;进一步分析miR-146a与IFN诱导基因表达之间的关系,结果显示两者之间存在负相关,体外实验也证实miR-146a能够负向调节I型干扰素通路。综上所述,我们的研究结果提示miR-146a可能作为一个新的生物标志物,SLE患者中miR-146a表达水平下降,导致I型干扰素通路负调控作用被削弱,从而参与疾病的发生发展。     

DNA甲基化与系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮是一种针对自身抗原产生自身抗体从而形成免疫复合物为特征的慢性炎症性的自身免疫性疾病,能够累及机体的多个脏器(以皮肤、关节、肾脏受累为多见).系统性红斑狼疮的发病机制涉及到环境、遗传、性别多个因素的相互作用,对于哪个因素在其中起着关键性的作用,是如何诱发疾病的发生,以及在发病过程中的具体作用机制到目前来说还没有一个统一认识.目前许多研究表明,DNA的甲基化可以作为环境、性别等因素的共同作用通路在狼疮的发病中起到一定的作用,现就关于DNA的甲基化与系统性红斑狼疮的关系做一综述.     

系统性红斑狼疮候选基因OAZ中单核苷酸多态性的系统筛选及相关分析

目的研究OLFl／EBF相关锌指蛋白基因（OAZ）上的单核苷酸多态性（SNP）与中国人群系统性红斑狼疮（SLE）发病的相关性。方法利用243个中国SLE患者核心家系DNA．依据http：／／www．hapmap．org/数据库中的信息，选取了OAZ基因上的35个SNP位点进行等位基因分型，以Haploview、Genehunter和Fbat生物信息学软件分析其与中国人SLE发病的相关性。结果对等位基因分型结果进行家系传递不平衡检验（TDT），提示rsl420683，rs6500240显示传递不平衡，rsl420683等位基因G优势传递给患者，传递：不传递=86：50，P=0．002；rs6500240等位基因C优势传递给患者，传递：不传递=88：56，P=0．008。结论OAZ基因上的SNP位点rs1420683和rs6500240与SLE发病相关．未发现这两个位点的突变影响转录因子的结合，并且相互之间并没有存在强的连锁关系，可能与邻近的某个影响蛋白结构或表达的功能性SNP存在连锁不平衡，需要进一步研究证实。     

狼疮易感基因PBX1 3''端非翻译区的结构变异及其功能分析

目的对中国人群系统性红斑狼疮（SLE）易感基因前B淋巴细胞白血病转录因子（PBXl）3’端非翻译区的结构变异进行分析及功能研究。方法利用焦磷酸测序技术（Ryrosequencing）对273名正常人，633例狼疮患者标本进行rs3185695基因分型，进行病例对照研究。通过实时定量聚合酶链反应（PCR）、Pyrosequencing以及报告基因活性测定等方法进行等位基因特异性基因表达研究，分析PBXl基因3’端非翻译区的rs3185695对基因表达的影响。结果中国人群中rs3185695次要等位基因A在SLE患者组和正常对照组的频率分别为11．4％和4．2％，差异具有统计学意义（P〈0．01），次要等位基因A与SLE发病相关。rs3185695为A／G杂合子的cDNA样本中PBXl基因的mRNA水平表达量明显低于G／G纯合子，带有A等位基因的转录本水平明显低于G等位基因。rs3185695A等位基因的重组质粒报告基因的活性明显低于G等位基因。结论中国人群中PBXl基因3’端非翻译区的rs3185695A与SLE发病关联，该单核苷酸多态性（SNP）位点G→A的变异能下调PBXl基因的表达，继而调节其调控通路下游基因的转录水平，参与疾病的发生。