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目的:原核表达GRP78并制备抗GRP78的特异性单克隆抗体(mAb),并初步鉴定相应mAb的特性。方法:从肺癌患者组织中抽提总RNA,RT-PCR获得grp78全长基因,并通过原核重组表达GRP78蛋白;以纯化的GRP78蛋白免疫BALB/c小鼠,成功免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,筛选得到分泌特异性抗GRP78的mAb的杂交瘤细胞株;并通过Western blot及免疫组化初步鉴定其特异性。结果:成功构建重组表达质粒PET-28a-grp78并由大肠杆菌表达获得GRP78蛋白,被该蛋白免疫的BALB/c小鼠与Sp2/0细胞融合、筛选,获得3株稳定分泌抗GRP78抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A1、4B8和4A12。采用其中1株4A12 mAb对3个肺癌患者组织样本进行Western blot检测以及免疫组化分析,结果均显示4A12 mAb能够特异识别肺癌组织表达的GRP78。结论:成功制备了抗GRP78的mAb,并能够特异识别肺癌组织表达的GRP78,为进一步研究GRP78在肿瘤治疗中的作用提供基础。 相似文献
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目的:IGF-1R稳定表达株的建立和抗IGF-1R单克隆抗体(mAb)的制备。方法:从cDNA扩增得到人全长IGF-1R基因,构建成含有E-Tag的质粒。用此质粒建立稳定表达IGF-1R的细胞株,并免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb。结果:成功构建IGF-1R病毒质粒,并筛选得到稳定表达IGF-1R的3T3细胞,该细胞免疫BALB/c小鼠后筛选得到6株稳定分泌抗IGF-1R抗体的杂交瘤细胞株,Western blot结果显示抗体8G3能特异性识别抗原。结论:成功制备了IGF-1R的mAb,为进一步研究IGF-1R在肿瘤治疗中的作用提供了有力的工具。 相似文献
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