开放式实验教学在七年制分子生物学实验课中的应用

开放式实验教学是一种新的教学模式，克服了传统实验教学的弊端。通过对七年制学生的分子生物学实验课进行开放式实验教学的尝试，阐述了实行开放式实验教学的形式和内容及其优越性和必要性。     

人TNFα—EGF重组质粒的构建

本实验将编码人ＴＮＦα分子上与其受体相关的部分核苷酸序列缺失，代之以人ＥＧＦ基因ｃＤＮＡ，实现基因重组，转化子经快速细胞破碎法切初筛，经Ｄｏｔ ｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定，从中挑选出２０个人ＴＮＦα－ＥＧＦ阳性重组质粒。为进一步获得重组嵌合人ＴＮＦα－ＥＧＦ分子和ＴＮＦα分子和ＴＮＦα作用机制的深入探讨奠定了初步基础。     

一DXFD52相关人肝细胞cDNA的部分序列分析及其反转录病毒载体的构建

为了寻找和研究新的人类基因ｃＤＮＡ，本实验以Ｔ７ＤＮＡ聚合酶对一ＤＸＦＤ５２相关人肝细胞ｃＤＮＡ（ＤＥ）进行了分段部分测定，并将所测各部分序列分别在ＥＭＢＬ（欧洲分子生物学库）中进行核酸同源性检索，结果在库中没有找到任何具有同源性的人类基因或ＤＮＡ片段。因此，我们初步认为ＤＥ为一新的人类基因ｃＤＮＡ片段。同时为初步探讨ＤＥ的功能，我们还成功地将ＤＥ构建于反转录病毒载体ＰＬＸＳＮ上。     

人可溶性B淋巴细胞刺激因子结合小肽的筛选及其免疫抑制功能分析

目的筛选和鉴定B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制性小肽。方法用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库、人工合成小肽鉴定其免疫抑制功能。结果经过筛选，得到两个阳性噬菌体克隆．人工合成的两个小肽在体外能特异性地抑制BLyS刺激细胞增生的活性。结论获得了两个能够抑制BLyS功能的小肽。     

重组小鼠高迁移率族蛋白B1抗菌活性研究

目的:制备具有功能活性的重组小鼠高迁移率族蛋白B1(recombinant mouse high-mobility group box-1,rmHMGB1)并观察其抗菌活性,为深入研究HMGB1抗菌功能创造条件.方法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,经RT-PCR扩增得到编码小鼠HMGB1的cDNA片段,序列测定正确后,构建于原核表达载体pQE-80L,转化于大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达目的蛋白,再经Ni2 -NTA亲和层析柱纯化后,通过试管稀释法、琼脂扩散法两种抗菌实验观察并比较rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)、绿脓杆菌抗菌活性的差异.结果RT-PCR扩增得到了约648bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码小鼠HMGB1的cDNA序列一致,纯化后的rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为金黄色葡萄球菌＞JM109＞ATCC25922＞DH5α,对绿脓杆菌则无抗菌活性.结论利用大肠杆菌可表达重组小鼠HMGB1,所获得纯化产物对部分细菌确有抗菌活性,此研究为进一步探讨HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础.     

抗人结肠癌单抗MC5的功能性ScFv在大肠杆菌中的可溶性表达

目的：制备抗人结肠癌单抗MC5的具功能活性的可溶性单链可变区片段（ScFv）。方法：从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA，RT-PCR分别扩增抗体质量、轻链可变区基因（VH和VLDNA），经linkerDNA连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1，转化菌经辅助噬菌体M13KO7感染后，获得重组噬菌体。以高表达MC5结合抗原的人结肠癌细胞系SW480对重组噬菌体进行2轮筛选后，经ELISA筛选呈现抗体ScFv片段的噬菌体单克隆。取2个强阳性克隆的噬菌体感染大肠杆菌HB2151，用于表达可溶性ScFv。经点印迹和Western印迹对可溶性ScFv进行鉴定，经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性。结果：所获得的VH、VL和ScFvDNA分别约为340、320和750bp。对重组哓菌体经2轮亲和筛选后，经ELISA从25个克隆中筛检出10个抗原阳性克隆。源于2个强阳性克隆的可溶性ScFv的分子质量为32000u，且浓集于细菌周质腔中，可溶性ScFv具有抗原结合活性，其结合位点与亲本单抗MC5相同。结论：针对MC5的具功能活性的可溶性ScFv的成功制备，为人结肠癌的体外（乃至体内）研究提供了新的靶向载体分子。     

包涵体复性的研究进展

大肠杆菌表达的外源基因产物通常是不可溶的包涵体。包涵体需要经过溶解和复性才能得到有活性的蛋白质。复性是蛋白质从未折叠到折叠形式的过程，受到许多因素的影响，包括变性剂对包涵体的溶解度、变性剂的去除、一些小分子对复性的帮助等等。现就影响蛋白复性的相关因素进行阐述。     

盐酸青藤碱诱导EA.hy926细胞自噬及其在抗炎中的作用

目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞EA.hy926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的EA.hy926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况;荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后EA.hy926细胞酸性小体变化情况。结果经终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理EA.hy926细胞后,与对照组比较,100μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08±0.05)上调(P<0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P<0.05)及EA.hy926细胞中酸性小体减少;盐酸青藤碱可抑制EA.hy926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导EA.hy926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一。     

开展研讨式生物化学论坛,培养医学八年制学生科研思维能力

在医学基础课程学习阶段形成一定的科研思维体系,对医学八年制学生而言至关重要。笔者在医学八年制生物化学教学中,以理论课所教授知识为基础,引导学生提出问题,在老师的指导下开展研讨式论坛,从而培养学生形成自主科研思维体系,为今后全面提高科研创新能力打下坚实基础。