细菌质粒DNA的快速提取及检测

介绍一种质粒DNA的快速提取方法,所分离出的DNA纯度较好,全部操作仅在两只Eppendorf管中进行,含质粒DNA的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。整个提取过程在较短时间内完成。该方法简便、快捷、效果好。     

拟无枝菌酸菌M3-1降解丙酯草醚的特性及应用初探

丙酯草醚是我国自主研制的一种新型高效油菜田除草剂。采用现代分子生物技术和微生物学传统方法从长期施用嘧啶水杨酸类除草剂的农田中富集、筛选出以丙酯草醚为唯一碳源生长的高效降解菌株M3-1,并对其最适降解条件及在土壤中的应用进行研究。结果表明:(1)经形态、生理生化和16S rDNA鉴定,M3-1属于拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis sp.)。(2)最适温度为35℃,pH为6.0,接种量为8%,在底物(ZJ0273)浓度为100～400 mg.L.1均具有一定的降解效果,且降解率随底物浓度的增加而降低,浓度高于300 mg.L.1时,对M3-1的降解效果有较强的抑制作用。(3)最适降解条件下,水溶液中培养25 d对浓度为100 mg.L.1丙酯草醚的降解率可达63.3%。(4)M3-1在土壤中对ZJ0273有很好的去除效果,处理25 d,其降解率可达53.7%。     

放射性核素~(60)Co在土壤中吸附和解吸的动力学研究

应用同位素示踪技术,研究了60Co在小粉土、黄红壤、青紫泥和海泥中的吸附和解吸。结果表明,60Co进入淹水土壤之后,迅速地被土壤吸附而达到吸附平衡,不易解吸。吸附率和分配系数大小排列顺序均为:海泥>青紫泥>黄红壤>小粉土;解吸因数的大小排列顺序为:黄红壤>小粉土>青紫泥>海泥6。0Co在土壤中的动态变化可用封闭二分室进行描述,其动态变化规律为,小粉土C1=1 382.6(1-e-3.609 5t),黄红壤C2=1 570.6(1-e-5.510 4t),青紫泥C3=1 594.9(1-e-7.554 1t),海泥C4=1 643.9(1-e-13.092 1t)。     

固定化酶催化高酸废油脂合成生物柴油的研究

探讨了固定化C.antarctica脂肪酶催化高酸废油脂与甲醇合成生物柴油.通过脂肪酶酯交换工艺路线进行催化合成生物柴油的研究,系统研究了甲醇的加入方式、反应体系中的水、游离脂肪酸对反应的影响.结果表明,一次性加入等摩尔当量的甲醇,对脂肪酶的活性具有一定的抑制作用,两次等当量加入甲醇,最终酯化率可达90.6%;当反应体系中的水含量低于0.1%时,水对酶反应速率和甲酯产量影响甚小,而水含量高于0.1%时,酶反应速率和甲酯产率随着水含量的增加而降低;游离脂肪酸对反应的影响较小,固定化c.antarctica脂肪酶的催化稳定性和使用寿命至少达100 d.     

C-端设计定点突变提高Streptomyces Avermitilis壳聚糖酶稳定性及催化活性

为提高阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis) SaCsn46A壳聚糖酶的温度稳定性,利用SWISS-MODEL在线服务器,以链霉菌SirexAA-E壳聚糖酶(PDB登录号：4ily.1A)为模板对SaCsn46A的蛋白结构进行同源模拟,将预测获得的SaCsn46A蛋白结构提交至在线预测软件PoPMuSiC-2.1,寻找对SaCsn46A稳定性有显著影响的氨基酸残基,通过定点突变构建突变体,在大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta中异源表达野生型壳聚糖酶及突变体。经Ni-NTA亲和层析获得电泳纯重组酶蛋白,测定野生型壳聚糖酶及突变体G237A的酶学性质,发现突变体最适温度提高5℃,并且温度稳定性及pH稳定性显著提升。为进一步提高突变体的表达效率,对突变体表达菌株进行诱导条件优化,确定最优条件为IPTG浓度0.7 mmol/L,诱导温度20℃,诱导时间8 h。     

固定酶法催化胆固醇合成胆固醇油酸酯的研究

探讨了固定化Camdoda antarctica脂肪酶催化胆固醇与油酸合成胆固醇油酸酯,通过脂肪酶催化酯化反应的工艺路线进行研究,系统考察了反应溶剂、醇油比、催化剂用量、反应温度等对酯化反应的影响.结果表明,以环己烷为溶剂,30℃,物质的量比(胆固醇:油酸)为1:1,2%(质量分数)脂肪酶,反应时间48 h,反应的最高酯化率可达到88%以上,产品经HPLC和LC-MS分析的纯度可达98%以上,固定化Candida ant-arctica脂肪酶具有较高的催化的催化稳定性,其半衰期至少达100 d.     

固体样品中60Co+95Zr的测量方法研究

采用BH1224型多道能谱仪测量了60Co 95Zr固体样品的能谱图,确定了各自的测量道.并对其测量的重复性、样品量和活度对测量结果的影响等进行了分析,确定了相应的校正曲线.结果显示:①95Zr能谱有3个峰,选取S3峰(540～680能谱道)作为样品活度的测量道较为合适,60Co能谱有2个峰,选取S5峰(1 630～1 900能谱道)作为样品活度的测量道较为合适;②测量时间对测量结果没有影响;③随着样品量的增加,同一活度样品的测量值呈下降趋势,应进行该项目的校正,校正曲线60Co为Y1=1.014 6-0.006 0X1,95Zr为Y2=1.008 6-0.006 0X2(X1、X2为测样的样品量g);④仪器死时间引起的漏计数不容忽视,对测量结果应进行死时间校正,其校正系数95Zr为Y3=100.95-0.029 4X3;60Co为Y5=101.56-0.023 3X5;(X3、X5为测样的计数率cps).     

细菌质粒DNA的快速提取及检测

介绍一种质粒DNA的快速提取方法，所分离出的DNA纯度较好，全部操作仅在两只Eppendorf管中进行，含质粒DNA的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。整个提取过程在较短时间内完成。该方法简便、快捷、效果好。     

定量检测幽门螺杆菌感染的胶乳比浊试剂研究

将重组表达的幽门螺杆菌(Hp)上的尿素酶B(UreB)蛋白与黏附素(HpaA)蛋白通过化学反应,偶联到聚苯乙烯微球上,并置换到保存液中,制备出幽门螺杆菌的抗体检测试剂2(R₂)。结合抗原抗体反应特性及降低血清中非特异性吸附,制备出幽门螺杆菌的抗体检测试剂1(R₁)。R₁与R₂搭配使用构成了定量检测人血清中幽门螺杆菌的抗体检测胶乳试剂盒。可以发现,制备20 mL胶乳R₂,包被幽门螺杆菌UreB蛋白与HpaA蛋白各1.6 mg,同时聚苯乙烯微球粒径为190 nm时,试剂效果最好。该试剂盒通过对1 000例常州本地随机临床样本与室间质评样本进行评测,发现常州本地随机临床样本的阳性率为34.6%,室间质评样本的检测结果与上海临床检验中心公布结果一致,试剂盒性能较好。     

有机溶剂体系固定化脂肪酶催化合成生物柴油

探讨了有机溶剂体系固定化Candida antarctica脂肪酶催化大豆色拉油合成生物柴油的过程。将固定化Candida antarctica脂肪酶置于有机溶剂体系中催化合成生物柴油的效果较好。研究发现,在40℃下反应10 h,固定化Candida antarctica脂肪酶以石油醚作为有机溶剂转化率最高,当总醇油物质的量比为3∶1,固定化酶占5%(相对于油质量),加入5%质量分数的水时固定化酶反应活性最高,酯化率可以达到88.4%。固定化酶重复使用10次仍具有较高活性。