重组细胞中鼠细小病毒检测方法的建立及初步应用

目的建立生物技术产品用重组细胞中鼠细小病毒(Murine minute virus,MMV)污染的检测方法,并进行验证及初步应用。方法以NB324K细胞为指示细胞,建立MMV感染性检测方法,并以不同CCID50的MMV分别感染NB324K细胞,验证方法的灵敏度;通过设计针对编码非结构蛋白1(Non-structural protein 1,NS1)保守序列的引物和探针,建立用于重组细胞中MMV检测的实时荧光定量PCR,并对其线性、特异性、精密性、灵敏度、最低检测限及试验可行性和干扰性进行验证;将NB324K细胞感染试验与荧光定量PCR法相结合,建立NB324K细胞感染-PCR法,并通过对大量样本的检测,分析荧光定量PCR法和NB324K细胞感染-PCR法的可行性。结果 NB324K细胞感染试验的灵敏度为0.2 CCID50;荧光定量PCR检测方法最佳线性范围为1×108～1×104拷贝/μl,R2达0.99以上,特异性良好,与其他种属的细小病毒均无交叉反应,试验内和试验间Ct值的变异系数(CV)均小于5%,试验内病毒定量拷贝数的CV在20%～30%之间,试验间病毒定量拷贝数的CV在20%～50%之间,灵敏度为5×103拷贝/μl,最低感染性病毒颗粒检测限为2 CCID50。该方法能够用于细胞样品中MMV的检测,部分样品基质对病毒的检测具有一定的干扰性。NB324K细胞感染-PCR法的灵敏度为0.02 CCID50,检测时间可缩短为96 h,与荧光定量PCR法分别对47份样品进行检测,结果均为阴性。结论成功建立了MMV荧光定量PCR检测方法和NB324K细胞感染-PCR法,可应用于重组细胞中MMV污染的检测,为进一步提高生产用重组细胞的安全性奠定了基础。     

戊型肝炎病毒ORF2N-端和C-端多肽的抗原性分析

目的分析戊型肝炎病毒(HEV)ORF2N-端和C-端多肽的抗原性。方法以纯化的4型HEVORF2N-端1～124aa多肽pS4-1和4型HEVORF2C-端385～674aa多肽pS4-6分别包被微孔板,采用间接酶联免疫法(EIA)检测感染HEV的猴系列血清中的抗HEVIgG抗体,分析两种多肽的抗原性,并与进口试剂的检测结果进行比较。结果在感染HEV的猴系列血清中,针对HEVORF2N-端抗原的抗体产生时间早,持续时间短,其峰值与转氨酶(ALT)的峰值几乎重叠;针对HEVORF2C-端抗原的抗体在HEV感染早期产生的滴度较低,但逐渐升高,在14周的观察期内,抗体滴度几乎无下降趋势。用两种多肽检测HEVIgG抗体的灵敏度均高于进口试剂。结论两种多肽均具有较好的抗原性,但在HEV感染的不同时期,其反应性不同。     

用于鉴别猴源细胞及其交叉污染短串联重复序列图谱分析方法的建立

目的建立用于鉴别猴源细胞及其交叉污染的短串联重复序列(Short Tandem Repeat,STR)图谱分析方法。方法选择可用于猴源细胞鉴别的10个STR位点,采用PCR-毛细管电泳分析方法分别检测猴源、人源、鼠源细胞及猴源细胞交叉污染模型细胞中的10个STR位点,并验证方法的特异性及稳定性。同时对5家不同受检单位生产用的Vero细胞进行STR图谱分析。结果 STR图谱分析法可为每一个独立的猴源细胞系提供独特的STR图谱,并能有效判断猴源细胞与其他细胞间的交叉污染,且特异性及稳定性较高。采用该方法检测的5株不同受检单位生产用的Vero细胞均未发生污染。结论建立的STR图谱分析方法具有良好的特异性和稳定性,可用于不同猴源细胞系的鉴别和有效判断相关细胞间交叉污染。     

Web报表在硅酸盐配料系统中的应用

主要介绍在硅酸盐配料系统中,利用Visual Studio结合Access数据库、Crystal Reports、ASP.NET、公司内网,开发Web报表的方法与步骤。为避免断网断电等突发事件,简要介绍了如何在Win CC软件上设计独立报表系统的过程。