基于适配体的生物膜干涉检测重组人促红细胞生成素α新方法

采用生物膜干涉(BLI)表面敏感光谱技术,建立了一种基于链DNA适配体39 nt的传感分析方法,实现了重组人促红细胞生成素α(EPO-α)的灵敏检测。将生物素化的39 nt固定于链霉亲和素传感芯片上,经2200 r/min高速振荡实现微升体积分析物的快速扩散。对适配体39 nt的取向、在BLI传感芯片上的固定浓度和非特异性吸附等影响因素进行了考察,发现50 nmol/L 3’末端生物素化39 nt具有最佳响应信号;加入Tween 20和牛血清白蛋白(BSA)可有效克服非特异吸附。基于麦胚凝集素构建了夹心法信号放大体系,在Tris-TB生理缓冲溶液中,检测EPO-α的线性范围为10～200 nmol/L,检出限为5 nmol/L。应用于人血浆等复杂基质中的EPO-α检测,回收率为86.7%～104.2%, RSD<11%,结果令人满意。此BLI传感体系为免标记蛋白相互作用和复杂生物样品检测等实际应用提供了有益参考。     

重组人促红细胞生成素-α DNA适配体的活性高级结构特征

针对重组人促红细胞生成素-α(EPO-α)的最短适配体序列In27,使用表面等离子体共振、圆二色光谱及荧光光谱等多种技术,研究和明确了In27的活性与构型间的关系.结果表明,阳离子Na+的存在及其浓度是影响In27产生特异性亲和识别的关键因素;在Na+诱导下In27形成了平行/反平行的混合G四链体(GQ)构型;荧光探针硫磺素T(Th T)能特异性结合该混合构型,EPO-α的加入可与Th T形成竞争,从而便于利用Th T创建活性EPO-α的"光开关"型检测探针.