一株Ⅲ型WU多瘤病毒的分离培养和全基因组进化分析

目的分离培养WU多瘤病毒(WU polyomavirus, WUPyV)并分析全基因组系统进化、同源性及种群动态特征。方法采用实时荧光定量PCR检测2020—2022年间北京友谊医院呼吸道感染住院患儿鼻咽抽吸物样本, 利用气液两相的原代人呼吸道上皮细胞模型对WUPyV阳性样本进行病毒分离培养, Sanger测序获得全基因组, 结合GenBank数据库中已公布的全基因组信息进行系统发育和进化动力学研究。结果 WUPyV在2020—2022年的检出率为4.7%(31/659), 并成功分离1株Ⅲc型WUPyV临床病毒株BJ0593。WUPyV全基因组及各基因片段同源性较高, VP2基因的平均进化速率约为每年1.256×10-4个氨基酸替换/位点, 种群动态在近十年内趋于平缓。结论本研究首次成功分离Ⅲ型WUPyV临床病毒株, 为WUPyV的分子进化及致病性研究提供基础。     

难治性肺炎支原体肺炎5例

目的 探讨难治性肺炎支原体肺炎的临床特点.方法 2003年12月-2006年1月首都医科大学附属北京友谊医院儿科住院的难治性肺炎支原体肺炎患儿5例.男4例,女1例;年龄6～13岁.对5例患儿的临床表现、实验室检查、胸片检查及治疗进行回顾性分析.结果 肺炎支原体肺炎5例患儿均以发热、咳嗽起病,呈稽留高热,体温40.0～40.7℃,咳嗽剧烈,患侧肺部叩诊浊音,呼吸音减低.5例ESR增快(53～107mm/1h),CRP升高(270～1600mg/L);2例行细胞免疫功能检查CD4 /CD8 降低;胸片示左中下肺野大片状阴影3例,右中下肺野大片状阴影2例,均并胸腔积液.5例均并心电图异常改变,3例表现为T波低平,2例表现为左前分支传导阻滞,心肌酶CK-MB、肌钙蛋白T均正常.5例咽拭子肺炎支原体培养阳性,体外药物敏感性试验证实为耐药菌感染.5例均予大环内酯类药物治疗.其中1例加用甲泼尼龙治疗,热程缩短.随访2～3个月,全部病例肺部炎性反应吸收,1例并胸膜肥厚.结论 耐药肺炎支原体感染诊治困难,对大环内酯类抗生素治疗不敏感不能排除肺炎支原体肺炎,应行病原学检查及耐药基因检测,同时需寻找有效的药物控制耐药菌感染.     

肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药分析

目的了解肺炎支原体对大环内酯类抗生素的耐药现状。 方法2004 01—2005 07于北京友谊医院儿科病房临床确诊为肺炎支原体感染的260例患儿,从其咽部或鼻咽部获取标本,利用肺炎支原体分离培养技术及药物敏感试验,筛选耐药株。 结果260例标本中,分离阳性株13例,耐药株9例,占69.2%(9/13)。 结论肺炎支原体对大环内酯类抗生素有耐药株产生,耐药监测非常必要。     

小鼠肺炎支原体肺炎模型的建立及组织病理学评分方法的应用

目的试图建立一个由肺炎支原体(MP)感染引起的小鼠的急性肺炎的动物模型和对肺炎程度进行量化评价的组织病理学评分方法.方法 BALB/C小鼠按体重随机分8组,每组12只,在0、1、2d滴鼻感染MP菌液,在0、1、2、3、4、6、8、14、21d分批宰杀,并分批设立滴注培养基的对照组,每组4只,以0～26分的组织病理学评分来确定肺部的炎症反应程度,评分包括支气管周围浸润部位的百分比、支气管周围浸润的数量、支气管管腔内的渗出、血管周围的浸润、实质性肺炎五方面,所有实验组动物的病原学诊断均做了肺匀浆MP培养和肺匀浆的MP PCR鉴定.结果经接种菌液于感染后第1天每1例小鼠肺部均出现支气管肺炎的炎症反应,组织病理学评分平均为6.32分,于第3、4天达到最重,为11.60和9.58分,以后逐渐减轻,于第21天炎症基本消失.本实验组中动物的组织病理学评分为0～19分.培养基对照组未出现肺部炎症反应.感染后1、2、3、4d肺组织培养和PCR检测均有MP生长,检出率为100%(12/12).在6、8、14、21d分别有2/12、2/12、0/12、0/12检测出支原体.结论经3d滴鼻感染MP菌液,经组织病理学和肺组织培养和PCR检测证实可使小鼠出现明显的MP肺炎,小鼠急性MP肺炎的模型已经建立,对肺炎组织病理学评分系统可客观的量化的反映肺炎的严重程度.     

急性上呼吸道感染白细胞减少的转归

目的探讨急性上呼吸道感染儿童外周血白细胞减少的发生与转归。方法对发热病程在24 h以内、外周血白细胞总数<5×109 L-1的上呼吸道感染患儿,采用中成药及对症治疗,不用抗生素及抗病毒西药。每隔3 d进行复诊及外周血常规检查,直至发热消退及白细胞总数≥5×109 L-1。结果 72例患儿仅3例发展为支气管炎,其余基本痊愈。所有患儿都未出现继发细菌感染的迹象。全部患儿治疗后体温恢复正常时间为(2.71±0.98)d。末梢血白细胞总数均于2～10 d恢复正常,病程为(4.16±1.80)d。发病起初时,中性粒细胞比率高于淋巴细胞;数天后淋巴细胞比率则明显升高。结论急性上呼吸道感染引起的白细胞减少可于短期内顺利恢复,单纯中药口服治疗即可达到满意效果。     

急性上呼吸道感染白细胞减少的转归

目的探讨急性上呼吸道感染儿童外周血白细胞减少的发生与转归。方法对发热病程在24 h以内、外周血白细胞总数〈5×109 L-1的上呼吸道感染患儿,采用中成药及对症治疗,不用抗生素及抗病毒西药。每隔3 d进行复诊及外周血常规检查,直至发热消退及白细胞总数≥5×109 L-1。结果 72例患儿仅3例发展为支气管炎,其余基本痊愈。所有患儿都未出现继发细菌感染的迹象。全部患儿治疗后体温恢复正常时间为（2.71±0.98）d。末梢血白细胞总数均于2～10 d恢复正常,病程为（4.16±1.80）d。发病起初时,中性粒细胞比率高于淋巴细胞;数天后淋巴细胞比率则明显升高。结论急性上呼吸道感染引起的白细胞减少可于短期内顺利恢复,单纯中药口服治疗即可达到满意效果。     

新生儿败血症时血清心肌酶变化分析

目的 了解新生儿败血症时血清心肌酶的变化。方法 临床诊断败血症患儿42例，测定血清中GOT、LDH、α-HBDH、CPK及CK-MB的活性，并做心电图检查。结果 42例中5项均升高者3例（7．14％），CK-MB升高者7例（16．67％）；临床诊断心肌炎6例（14．29％），心功能不全2例（4．76％），心肌损害3例（7．14％），共计11例（26．19％）。结论 新生儿败血症时，CK-MB作为心肌损害的生化指标特异性较强。     

大鼠全脑脑片培养及缺氧缺糖模型的建立

目的探讨离体条件下建立简单方便的新生大鼠缺氧缺糖模型的方法,为后续的研究奠定基础,从而探索可行的研究脑损伤的方法。方法在静态全脑脑片培养的基础上,采用充氮气法制备缺氧模型,将缺氧缺糖后的脑片进行冰冻切片,HE染色观察缺氧缺糖的效果,探讨该模型是否成功建立。结果全脑脑片组织生长良好;与正常对照组相比,缺氧缺糖组的脑片组织中出现核固缩及碎裂等的情况。结论成功地在离体全脑脑片培养的基础上建立了离体脑组织缺氧缺糖模型。     

肺炎支原体红霉素耐药机制研究

目的了解肺炎支原体(MP)对红霉素耐药情况及耐药机制。方法对60例临床证实为MP感染患儿鼻咽分泌物或咽拭子标本进行分离培养,药物敏感试验筛选耐药株,进行耐药基因检测。结果60例标本中,分离阳性株5例,耐药株4例,占80%。敏感株和标准株的23SrRNA基因序列与基因库的MP基因序列相同,4例耐药株的23SrRNA基因发生点突变,两株突变位点在2063,G替代了A,另两株突变位点在2064,G替代了A。5株分离株erm编码的甲基化酶基因均为阴性。结论MP对红霉素有耐药株产生,4株MP红霉素耐药株的耐药分子基础是23SrRNA基因发生点突变,未发现erm编码的甲基化酶基因。     

小鼠肺炎支原体肺炎模型的建立及干扰素-γ的变化

目的　探索小鼠急性肺炎支原体感染的过程及干扰素 γ的变化规律。方法　BALB/c小鼠按体重随机分组 ,在0、1、2d滴鼻感染肺炎支原体菌液 ,在 0～ 2 1d分批宰杀 ,并分批设立滴注培养基的对照组 ,以 0～ 2 6分的组织病理学评分来确定肺部的炎症反应程度 ,所有实验组动物的病原学诊断均作了肺匀浆支原体培养或 /和肺匀浆的支原体PCR鉴定 ,于感染1、3、4、6、8、14天以ELISA方法检测了血清干扰素 -γ的含量。结果　经接种菌液于感染后第一天每 1例小鼠肺部均出现炎症反应 ,组织病理学评分平均为 6 32分 ,于第 3、4天达到最重 ,为 11 6 0和 9 5 8分 ,以后逐渐减轻 ,于第 2 1天炎症基本消失。本实验组中动物的组织病理学评分为 0～ 19分。培养基对照组未出现肺部炎症反应。感染后 1、2、3、4d肺组织培养和PCR检测均有肺炎支原体生长 ,检出率为 10 0 %。在 6、8、14、2 1d大部分未检测出支原体 ;随着肺炎的出现 ,在病程第 3、4天有γ -干扰素的显著降低 ,于第 6天逐渐恢复接近于对照组水平。结论　经 3天滴鼻感染肺炎支原体菌液 ,经组织病理学和肺组织培养和PCR检测证实可使小鼠出现明显的肺炎 ,并有不同程度的干扰素 -γ的降低。小鼠的mp肺炎的动物模型已经建立 ,组织病理学评分方法可以区分肺炎的严重程度 .