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目的获得鼠-人嵌合抗粘蛋白1(mucin1,MUC1)IgG全抗体,降低鼠源抗MUC1单克隆抗体(monoclonalantibody,mAb)的异种免疫原性,并在哺乳动物细胞中表达制备,初步分析其特性。方法 PCR扩增鼠mAb-6E3可变区编码基因,通过特异性限制性酶切位点克隆入含有人源IgG1抗体恒定区的哺乳动物细胞重组表达载体,获得IgG全抗体表达质粒,瞬时转染293T哺乳动物细胞,直接免疫荧光法确定细胞内人源IgG抗体表达,收获转染细胞培养上清,经亲和层析纯化后,经SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot、流式细胞仪检测和表面等离子共振技术等分析所制备IgG抗体分子特点及其与MUC1抗原的结合活性及动力学参数。结果所构建鼠-人嵌合IgG表达质粒能够在哺乳动物细胞中有效表达并分泌到细胞上清,纯化后蛋白质电泳分析与预期IgG抗体分子大小一致,能够与变性或天然状态下的T47D肿瘤细胞表面MUC1特异性结合,经表面等离子共振技术分析表明抗体的亲和力约为KD=2.8×10-7M。结论获得鼠-人嵌合抗MUC1 IgG抗体,具有与MUC1特异性结合的生物学活性。 相似文献
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①目的纯化原核表达的HSV-1包膜糖蛋白G重组蛋白并对其抗原性进行分析。②方法应用亲和层析法纯化重组蛋白,Western印迹和ELISA法检测分析其抗原性。③结果Western-Blot,检测15份HSV-1 IgM阳性血清,其中12份血清可与重组蛋白发生反应;ELISA法检测535份血清,与商品化同类试剂盒相比符合率为89.7%.④结论该重组蛋白检测HSV-1活动性感染有较高的应用价值。 相似文献
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目的探讨颈静脉球体瘤中凋亡相关基因诱捕受体1(decoyreceptor 1,DcR1),诱捕受体2(DcR2),死亡受体4(deathreceptor 4, DR4),死亡受体5(DR5)启动子甲基化状态及其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)检测12例颈静脉球体瘤中四个凋亡相关基因DcR1、DcR2、DR4、DR5启动子甲基化状态。同期收集腮腺良性肿瘤手术切除的正常耳大神经组织作为对照。结果12例颈静脉球体瘤均存在甲基化,DcR1、DcR2、DR4、DR5在颈静脉球体瘤中均存在不同程度的甲基化,甲基化比率为DcR1 36.4%、DcR2 41.7%、DR4 75.0%、DR5 33.3%;正常对照中均无甲基化。且甲基化水平较高(MI>0.50)的患者较甲基化水平低(MI≤0.05)的患者发病年龄早(P=0.0189)。结论DcR1、DcR2、DR4、DR5在颈静脉球体瘤中均存在甲基化,且与肿瘤的发生相关,甲基化水平高提示患者发病早,疾病较为严重。DNA甲基化是可逆转过程,可能成为今后靶向治疗的有效靶点。 相似文献
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内皮素1在肺癌组织和转移淋巴结中的表达及其临床意义 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 检测内皮素 1(ET 1)在肺癌组织及转移淋巴结中的表达 ,探讨内皮素在肺癌生长及转移中的作用。方法 应用SABC免疫组化法检测 80例肺癌组织及相应周围淋巴结中ET 1表达情况。结果 80例肺癌组织标本中 ,鳞癌和腺癌中ET 1表达较高 ,分别为 68.7%和 62 .5 % ,小细胞肺癌中ET 1表达较低 ,为 15 .0 %。在转移淋巴结中ET 1阳性表达率为 5 8.0 %。TNM临床分期 ,ET 1阳性率分别为Ⅰ期 19.0 % ,Ⅱ期 65 .7% ,Ⅲ期 75 .0 %。ET 1阳性表达率在肿瘤直径大于 3cm者与小于 3cm者之间有显著性差异 (P <0 .0 5 )。肺癌组织中ET 1表达阳性者 ,其周围淋巴结转移率 ( 79.1% )明显高于阴性表达者 ( 4 7.8% ) (P <0 .0 5 )。结论 ET 1普遍存在于肺癌组织及淋巴结转移灶中 ,对肺腺癌、鳞癌生长及转移过程起重要作用。 相似文献
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目的:纯化原核表达的HSV-1包膜糖蛋白G重组蛋白并对其抗原性进行分析。方法:应用亲和层析法纯化重组蛋白,Western印迹和ELISA法检测分析其抗原性。结果:Western-Blot检测15份HSV-1 IgM阳性血清,其中12份血清可与重组蛋白发生反应;ELISA法检测535份血清,与商品化同类试剂盒相比符合率为89.7%。结论:该重组蛋白检测HSV-1活动性感染有较高的应用价值。 相似文献
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目的:探讨山东半岛地区散发性乳腺癌中BRCA1基因异常甲基化状态及其与mRNA表达的关系,进而研究其BRCA1基因异常的表观遗传学作用。方法:用甲基化特异性PCR和RT-PCR等方法研究乳腺癌组织、癌旁正常组织及乳腺良性肿瘤中BRCA1基因启动子甲基化状态及其mRNA表达水平。结果:在30例散发性乳腺癌中,BRCA1基因甲基化率为43%,BRCA1 mRNA表达下降率为33%。在13例BRCA1发生甲基化的癌组织标本中,BRCA1 mRNA的表达下降率为55%,而在17例BRCA1未发生甲基化的癌组织中,BRCA1 mRNA的表达下降率为18%。在肿瘤分级中,T3分级病人的肿瘤组织中BRCA1甲基化率(74%)和mRNA表达下降率(54%),均分别高于T1+T2分级病人肿瘤组织的BRCA1甲基化率(26%)和mRNA表达下降率(30%);有淋巴结转移病人的肿瘤组织中,BRCA1甲基化率(61%)和mRNA表达下降率(46%),均分别高于无淋巴结转移的甲基化率(17%)和mRNA表达下降率(16%)。结论:BRCA1基因表观遗传学改变是其mRNA表达下降乃至失活的重要原因,且与散发性乳腺癌的恶性程度及淋巴结转移的发生密切相关。 相似文献
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姚建慧陈庆峰施乐娟陈向平 《中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志》2016,(1):21-22
目的探讨鼓室内注射地塞米松治疗伴有糖尿病、高血压的突发性耳聋(难治性突发性耳聋)患者的疗效。方法观察组35例(35耳),高血压13例,糖尿病15例,7例高血压加糖尿病。鼓室内注射地塞米松溶液5mg,隔日注射一次,共注射5次。对照组71例(71耳),静脉注射地塞米松10mg,连续7天,后减为5mg治疗7天。结果观察组:35例,有效率为77.14%(27/35)。对照组:有效率为80.28%(57/71)。两组比较χ^2=0.14,P〉0.05,差异无统计学意义;观察组耳鸣消失率为78.57%(22/28);对照组耳鸣消失率为71.15%(37/52)。两组比较χ^2=0.52,P〉0.05,差异无统计学意义;两组患者眩晕均全部消失。结论在不能全身使用激素的情况下,采用鼓室内注射的途径可以获得相同的治疗效果,至少是一种备选方案。 相似文献