头颈部肿瘤干细胞分子生物学标志及其筛选

头颈部恶性肿瘤生物学方面特点的研究对于其预防、早期诊断和早期治疗有着重要的理论价值.许多研究表明,包括头颈部肿瘤在内的实体瘤中存在有肿瘤干细胞.肿瘤干细胞概念的提出,揭示了靶向性或选择性杀伤肿瘤干细胞的可能,为肿瘤根治、防止复发和转移提出了新的思路.肿瘤干细胞研究的关键之一是寻找其特异性分子生物学标志.本文重点总结了肿瘤干细胞的生物学性状,已发现的头颈部肿瘤干细胞的特异性分子标志物以及分离与鉴定肿瘤干细胞的技术方法.     

CD44作为筛选下咽癌肿瘤干细胞分子标志物的价值

目的探讨CD44作为筛选下咽癌肿瘤干细胞分子标记物的价值。方法应用流式细胞仪检测下咽癌FADU细胞系中CD44的表达;采用免疫磁珠分选技术（MACS）分选CD44＋细胞,并用流式细胞仪检测其纯度;运用四甲基偶氮唑蓝（MTr）比色法检测CD44＋、CD44-细胞的体外增殖能力,将相同数量级（1×10^6、1×10^5）的CD44＋、CD44-细胞分别注射于雄性非肥胖糖尿病型／重症联合免疫缺陷（non-obese diabetic/severe combined immunodefi ciency, NOD/SCID ）小鼠皮下,观察其体内致瘤能力的差异。结果下咽癌FADU细胞系中CD44＋细胞占（21．1±1．56）％,免疫磁珠分选后的CD44＋细胞纯度达（99．4±0．29）％。体外增殖能力研究显示CD44＋细胞增殖速度明显快于CD44-细胞。NOD／SCID鼠体内致瘤实验结果显示：1×10^5CD44＋细胞致瘤率为12．5％（1／8）,1×10^5CD44-细胞致瘤率为0（0／8）;1×10^6CD44＋细胞致瘤率为100％（8／8）,1×10^6CD44-细胞致瘤率为50％（4／8）;相同数量级的CD44＋与CD44-两组细胞致瘤率差异具有统计学意义（P〈0．05）。此外,CIM4＋细胞组比CD44-细胞组更早成瘤,潜伏期明显缩短。CD44＋细胞组所致肿瘤体积平均为（2017．81±538．50）mm3,而CD44-细胞组所致肿瘤体积平均为（1153．25±503．18）mm3,两组差异具有统计学意义（t=2．67,P〈0．05）。结论下咽癌肿瘤中CD44＋细胞比CD44-细胞具有更强的体外增殖能力和体内致瘤能力,提示肿瘤干细胞可能存在于CD44＋肿瘤细胞内,CD44可作为筛选下咽癌肿瘤干细胞的-个重要分子标记物。     

甲状腺手术中常规解剖喉返神经的临床价值

目的探讨甲状腺手术中常规解剖喉返神经对防止其损伤的临床价值。方法回顾性分析5344例甲状腺手术患者在全身麻醉下行手术治疗的临床资料,术中解剖喉返神经548例(解剖组),未解剖喉返神经4796例(未解剖组);比较两组术中喉返神经损伤的发生率有无差异。结果解剖组喉返神经损伤12例,发生率为2.2%;未解剖组喉返神经损伤512例,发生率为10.7%。两组喉返神经损伤率差异具有统计学意义(P0.01)。结论甲状腺手术中常规解剖喉返神经能有效防止其损伤。     

舌骨移植喉气管成形术联合T管扩张治疗婴幼儿喉气管狭窄

目的 探讨舌骨移植喉气管成形术联合T形硅胶管扩张治疗婴幼儿喉气管狭窄的疗效。方法2012～2017年我科收治喉气管狭窄婴幼儿患者7例,均采用自体舌骨移植喉气管成形术联合“T”形硅胶管扩张进行治疗。结果 术后随访1～5年,6例患儿术后顺利拔除T管,其中1例因T管两端气管内肉芽生长,行二次手术,延期拔管。1例患儿术后移植舌骨坏死,再次出现狭窄。结论 舌骨移植喉气管成形术联合T形硅胶管扩张治疗婴幼儿喉气管狭窄效果肯定。     

防治过敏性鼻炎，你需要知道这些事

<正>过敏性鼻炎是耳鼻喉科常见疾病之一,据不完全统计,全球有5亿人受过敏性鼻炎困扰,其在欧美地区发病率有12%～30%,我国也有高达2.4亿的过敏性鼻炎患者。那么,过敏性鼻炎是怎么回事？我们又该如何防治呢？疾病的发生与环境和食物过敏原有关过敏性鼻炎又叫变应性鼻炎,其发生和家族疾病史、接触过敏原（变应原）都有关系,比如有变态反应疾病家族史的人更容易患病。     

鸡耳蜗EFNA2基因RNAi慢病毒载体的构建及其靶基因离体沉默效率

目的构建鸡耳蜗EFNA2基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,在离体培养原代鸡听神经细胞中鉴定其沉默效率。方法针对鸡EFNA2基因序列设计特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点,构建慢病毒pFU-GW-iRNA载体,将筛选所得有效短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体在293T细胞中包装成病毒颗粒,随后将其感染离体培养原代鸡听神经细胞,最后采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率。结果 PCR克隆鉴定及测序结果显示所构建的shRNA慢病毒载体正确无误,包装病毒后的滴度为2.0×109 TU/ml,分别命名为LV-GFP-EFNA2-shRNA-l、LV-GFP-EFNA2-shRNA-2和LV-GFP-EF-NA2-shRNA-3。ShRNA慢病毒颗粒感染目的细胞后,EFNA2基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了76.11%、61.87%和68.44%。结论本研究成功构建了鸡EFNA2基因的RNAi慢病毒表达载体,并能在离体培养的原代鸡听神经细胞中有效沉默靶基因。     

CD44基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建CD44基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体并在下咽癌FaDu细胞株上鉴定其沉默效率,为研究目的基因沉默后下咽癌肿瘤细胞致瘤性的改变提供稳定可靠的载体。方法针对目的基因CD44mRNA的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计、合成4个CD44基因特异性小分子干扰iRNA（small interference RNA,siRNA）靶点,将其合成短发卡hRNA（short hairpin RNA,shRNA）并退火成双链DNA,与慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获取正确克隆。将筛选出的最有效重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其感染下咽癌FaDu细胞株细胞,采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率。结果对LV-CD44-shRNA载体进行双酶切鉴定,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入序列正确,CD44基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度为8E＋8TU/ml。RNA干扰下咽癌FaDu细胞CD44基因后,CD44 mRNA水平显著下降,干扰效率大于70%。结论成功构建了CD44基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在细胞水平有效沉默靶基因,为CD44基因沉默后下咽癌肿瘤细胞生物学改变的研究打下了较坚实的基础。