植物谷胱甘肽代谢与环境胁迫

谷胱甘肽是植物体内普遍存在的小分子抗氧化物质,它在还原态硫的储存和转运、蛋白质和核酸的合成、酶活性的调节、组织抗氧化特性的维持以及对氧化还原敏感的信号传导的调节中起着重要作用。谷胱甘肽库的大小及其氧化还原状态也与植物对多种生物异源物质及生物与非生物环境胁迫的忍耐密切相关。本文简要综述了近年来人们在植物谷胱甘肽生物合成与代谢、转运、信号传导以及胁迫响应中所取得的研究进展。     

人谷胱甘肽S-转移酶pi(GSTp)中半胱氨酸对其在细胞氧化应激下功能的影响

利用PCR定点突变技术构建人GSTp三种半胱氨酸突变体C~(47/101)、C~(14/47/101)和C~(14/47/101/169)。将CSTp 野生型和突变体表达质粒转染293细胞,以CDNB 为底物测定胞内GST 的转移酶活性,结果显示各类突变体均明显抑制了细胞内源性CST 的催化活性,具有显著的负显性(dominant nega-tive)突变体的功能;将CSTp 野生型和突变体与c-Jun、NF-kB 和p53的报告基因载体共转染,通过萤光素酶活性测定发现突变体C~(14/47/101)和C~(14/47/101/169)能明显激活c-Jun 和p21的转录活性;Western印迹分析显示突变体均能上调细胞内p21蛋白的水平,细胞存活率的测定表明GSTp 突变体能增强293细胞对H_2O_2刺激的敏感性;实验结果表明半胱氨酸残基对于维持GSTp 在对抗细胞氧化应激过程中的保护作用至关重要。     

壳聚糖固定化谷胱甘肽硫转移酶的研究

目的：利用壳聚糖固定日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶,并对固定化酶性质及体外催化活性进行研究。方法：利用大肠杆菌BL21(DE3)表达日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶,并从中粗提谷胱甘肽硫转移酶,将其固定在用戊二醛交联的壳聚糖载体上,对游离酶和固定酶的最适pH、温度,游离酶和固定化酶对底物1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)和谷胱甘肽(GSH)的亲和力,温度的稳定性进行了研究。结果：固定化酶活回收率可达41．6％,最适pH6．5～7．0,最适温度37℃,对底物(CDNB和GSH)的亲和力略有下降,对温度稳定性大大提高。在体外固定化酶有很好的催化解毒作用。     

不同生长阶段长爪沙鼠血清中氧化与抗氧化物质含量变化

目的　探讨不同生长阶段长爪沙鼠血清中氧化与抗氧作用机制。方法　选择 1月龄、3月龄、2 4月龄的长爪沙鼠各 16只 (雌雄各半 ) ,测定长爪沙鼠血清中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GsH -Px)。结果　丙二醛 (MDA)在 3月龄最低 ,谷胱甘肽过氧化物酶 (GsH -Px)在 3月龄最高 ;超氧化物歧化酶 (SOD)随着长爪沙鼠的月龄增长而升高。结论　在长爪沙鼠生长过程中谷胱甘肽过氧化物酶 (GsH -Px)的含量变化与丙二醛 (MDA)含量变化有直接关系 ,而超氧化物歧化酶 (SOD)含量变化与MDA含量变化没有直接关系。     

含谷胱甘肽硫转移酶基因工程菌表达条件研究

将重组谷胱甘肽硫转移酶 (GST)大肠杆菌表达株BL2 1(DE3 )PGEX 作为研究对象 ,进行了生长及表达条件的优化研究 ,分析比较了不同培养条件对菌体生长的影响以及诱导剂的添加量对产物表达量的影响。     

谷氨酰胺对低剂量电离辐射损害的保护作用

观察小剂量电离辐射条件下大鼠补充谷氨酰胺(Gln)对体内谷胱甘肽(GSH)代谢的影响。SD雄性大鼠受照射后经饲料补充2%Gln。照射源为60Co;剂量率6×10-2Gy/h,1h/d,5d/周,累积剂量1.5Gy。与对照组相比,受照射大鼠睾丸重量降低,精子畸变率增高,肝脏GSH含量降低,外周血白细胞计数降低,血清Gln及Glu+Gln含量降低,差异具有显著性,补充Gln则与对照组无明显差异。表明小剂量电离辐射导致大鼠出现可逆性损害,机体的Gln需求有所增加,补充Gln对大鼠的GSH代谢有一定益处。     

甘露醇对小麦细胞IAA氧化酶、过氧化物酶及GST活性的影响

研究了16 g/L甘露醇处理对小麦细胞再分化、细胞IAA氧化酶、IAA过氧化物酶、 谷胱甘肽转移酶和过氧化物酶活性的影响。结果表明,甘露醇处理使小麦细胞再生能力明显降低,引起细胞蛋白质含量、IAA过氧化物酶和GST活性明显降低;但使细胞IAA氧化酶和POD活性明显增高。     

分批培养时pH和温度对重组大肠杆菌生产谷胱甘肽合成酶系的影响

研究了2．5L罐分批培养时pH和温度对重组大肠杆菌生产谷胱甘肽合成酶系的影响,确定了分批培养时生产谷胱甘肽合成酶系的最佳pH和最佳温度。研究结果表明：在发酵液的pH为7．2和温度为37℃时,谷胱甘肽合成酶系产量和细胞干重达到最大,分别为690．6U／L和3．77g／L。采用变温控制对菌体的生长和谷胱甘肽合成酶系的合成并没有明显的优点。     

钩虾胆碱酯酶（ChE）和谷胱甘肽转硫酶（GST）的敏感性和特异性比较研究

研究了有机磷农药甲地基嘧啶流磷,有机氯农药林丹,菊酯类农药氯菊酯,表面活性剂直链苯磺酸钠和重金属Zn对钩虾（Gammarus pulex L.)胆碱酯酶（ChE）和谷胱甘肽转硫酶（GST）活性变化以及毒性影响,结果表明,在暴露24h和48h后,仅有机磷农药甲基嘧硫磷显著抑制胆碱酯的酶的活性,在暴露48h后,有机氯农药林丹和菊酯类农药氯菊酯能显著提高谷胱甘肽转硫酶活性,在暴露24h后,仅梵在导致谷胱甘肽转硫酶明显升高,作为生物标志物,胆碱酯酶比谷胱甘肽转硫酶具有更高的特异性,这两种生物标志物较毒性试验方法具有更高的敏感性。     

硒对NO诱导的内皮细胞内游离钙离子浓度变化的影响

用Fura-2显微荧光测钙技术,研究了用外源性一氧化氮（NO）供体S-亚硝基谷胱甘肽（GSNO）诱导的,人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞胞内游离钙离子浓度（［Ca²⁺］_i ）升高以及硒的抑制效应.结果表明,GSNO作用于ECV-304细胞,短时间内即可导致其胞内游离钙离子浓度升高.胞外液换为无钙液或向胞外液中加入CdCl₂（1 mmol/L）对GSNO引起的［Ca²⁺］_i升高无影响.提示,GSNO刺激主要引起胞内钙库释放.而且,一氧化氮清除剂血红蛋白（Hb）对这一过程有抑制作用,说明GSNO引起的胞内钙库释放由NO介导.经亚硒酸钠（1 μmol/L）处理的细胞,其NO引起的［Ca²⁺］_i升高幅度明显被抑制,说明NO的这种作用可能与细胞的氧化还原状态有关.