牛病毒性腹泻病毒RNA的cDNA合成及其分子杂交的研究

BVDV(牛病毒性腹泻病毒)是一类有重要经济价值的病毒,其核酸为单链RNA。该病毒提纯以后.用苯酚-氯仿-异戊醇提取RNA.在提取的BVDy RNA中所含的DNA杂质用DNase I降解除去,然后进一步用oligo dT纤维素拄亲和层析,琼脂糖凝胶电泳等方法纯化。纯化的BVDV RNA在E.coli,poly A聚合酶的催化作用下,在3’羟基末端聚腺化。cDNA在逆向转录酶的作用下,用polyA接尾的BVDV RNA作模板,oligodT_12—18作引物合成。琼脂糖凝胶电泳结果说明它与BVDV RNA相似。该cDNA的探针用斑点杂交方法与BVDV RNA,HCV RNA和酵母tRNA杂交,BVDV RNA和HCVRNA显阳性反应,酵母tRNA显阴性反应,结果说明合成的cDNA为BVDV RNA的cDNA。BVDV和HCV同为披盖科疫病毒属成员,它们具有部分相同的抗原,因此编码病毒蛋白的RNA序列具有同源序列,本研究证实了这种假设。     

喉罩通气下七氟醚全凭吸入麻醉在小儿先天性心脏病介入手术的临床麻醉效果

目的:探讨喉罩通气下七氟醚全凭吸入麻醉在小儿先天性心脏病介入手术的临床麻醉效果。方法:选取2017年4月～2019年5月期间我院收治的行先天性心脏病介入手术患儿98例,根据随机数字表法将其分为对照组(n=49)和研究组(n=49)。对照组给予氯胺酮诱导,全凭丙泊酚维持,面罩吸氧;研究组给予全凭七氟醚诱导、维持,喉罩通气。比较两组患儿麻醉前(T0)、切皮前(T1)、切皮后1 min(T2)、切皮后30 min(T3)、术后(T4)的血流动力学指标[平均动脉压(MAP)、心率(HR)]及应激反应指标[血糖、皮质醇],记录两组患儿手术时间、麻醉诱导时间、术后苏醒时间等围术期指标情况。记录两组围术期不良反应发生情况。结果:研究组手术时间、麻醉诱导时间、术后苏醒时间均短于对照组(P0.05)。两组T0时间点血糖、MAP、皮质醇、HR比较差异无统计学意义(P0.05);对照组T1～T4时间点MAP、血糖、皮质醇、HR均较T0升高(P0.05);研究组T1～T4时间点血糖、MAP、皮质醇、HR与T0时间点比较无差异(P0.05);研究组T1～T4时间点血糖、MAP、皮质醇、HR低于对照组(P0.05)。两组不良反应发生率比较无差异(P0.05)。结论:小儿先天性心脏病介入手术中应用喉罩通气下七氟醚全凭吸入麻醉,诱导迅速且安全、术后苏醒快、手术时间短,可有效维持血流动力学稳定,减少应激反应。     

小儿肺热咳喘口服液联合三联吸入雾化治疗法对哮喘急性发作的影响

目的:探讨小儿肺热咳喘口服液联合三联吸入雾化治疗方案对哮喘患儿的治疗效果以及对肺功能的影响作用。方法:将我院自2017年1月至2018年11月间收治的哮喘患儿210例作为研究对象,按照随机数字表法分为两组各105例,研究组患儿在布地奈德、沙丁胺醇、异丙托溴铵三联吸入雾化治疗的基础上给予小儿肺热咳喘口服液进行治疗,对照组患儿仅给予三联雾化吸入治疗,对比观察两组患儿的疗效和预后。结果:研究组临床治疗后总有效率为95.24%,明显高于对照组77.14%(P0.05);治疗后研究组咳嗽消失时间、呼吸困难消失时间和急性发作随诊时间均明显短于对照组(P0.05),两组肺部喘鸣音消失时间比较差异无统计学意义(P0.05);治疗前患儿第一秒用力呼气量(forced expiratory volume in one second,FEV1)、最大肺活量(forced vital capacity,FVC)及FEV1/FVC值、呼气峰流速值(peak expiratory flowrate,PEF)对比无统计学意义(P0.05),治疗后1 d、3 d、7 d以上指标水平均明显升高,且在治疗后7 d,研究组明显高于对照组(P0.05)。治疗期间研究组有1例出现轻度腹泻,3例食欲减退,并发症的发生率为3.81%(4/105),对照组治疗期间2例出现轻度腹泻,4例食欲减退,并发症的发生率为5.71%(6/105),两组比较无统计学意义(P0.05)。结论:使用小儿肺热咳喘口服液联合三联吸入雾化法治疗儿童哮喘急性发作,可改善患儿临床症状和肺功能,疗效显著,可推广使用。     

猪流行性腹泻病毒S蛋白胞内区线性B细胞表位最小基序鉴定

[背景] S蛋白是猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）的主要结构蛋白和免疫原性蛋白,在前期的研究中,本课题组在S蛋白的胞内区鉴定到2个包含线性B细胞表位的短肽。[目的] 鉴定PEDV S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序。[方法] 原核表达2个短肽的每次后移1个氨基酸的系列8肽,以兔抗S蛋白血清为一抗,通过Western Blot筛选阳性反应8肽,鉴定S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序。[结果] S蛋白胞内区的2个包含线性B细胞表位的短肽共享一个表位,该表位的最小基序为¹³⁷¹QPYE¹³⁷⁴。同源性分析显示该B细胞表位基序为保守性表位。[结论] 确定了S蛋白胞内区线性B细胞表位的最小基序为¹³⁷¹QPYE¹³⁷⁴;S蛋白抗原表位的鉴定有助于提高对其结构和功能的理解。     

支气管镜肺泡灌洗联合抗生素对小儿重症肺炎的疗效及对痰细菌清除率等指标的影响

目的探讨支气管镜肺泡灌洗联合抗生素对小儿重症肺炎的疗效及对痰细菌清除率和其他指标的影响。方法选取我科收治的重症肺炎患儿126例,分为研究组及对照组,各63例。其中研究组在常规治疗基础上联合支气管镜肺泡灌洗及局部应用抗生素治疗,对照组采用常规治疗,比较2组患者的临床治疗效果。结果治疗后,研究组的临床有效率为90.5%,高于对照组的76.2%(χ~2=4.629,P=0.031);治疗后研究组患者的痰液中病菌清除率为77.7%,显著高于对照组的57.2%(χ~2=6.110,P=0.013);治疗后研究组患者的相关炎性指标(高敏C反应蛋白、肿瘤坏死因子α及白介素-6)均较对照组显著降低(t=3.522、4.912、4.183,P=0.033、0.032、0.033);治疗后研究组患者的相关血气指标(动脉血氧分压及氧合指数)均较对照组显著升高,而二氧化碳分压较对照组显著降低(t=3.612、3.312、6.162,P=0.039、0.040、0.028)。结论 BAL联合抗生素对小儿重症肺炎的疗效更为显著,值得临床推广应用。     

补充益生菌对功能性腹泻患者焦虑抑郁状态的影响

目的探讨益生菌对功能性腹泻患者临床症状和心理健康的影响。方法将2019年3月至2019年12月在广东省肇庆市高要区人民医院消化内科门诊收治的伴有焦虑抑郁状态的90例功能性腹泻住院病人随机分为试验组、对照组A、对照组B。三组受试者均口服匹维溴铵,试验组口服双歧杆菌四联活菌,对照组A服用氟西汀,对照组B未给其他药物治疗,疗程均为1个月。治疗前后,比较患者大便次数及性状、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)和汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分。结果治疗前三组患者每周排便不同次数的人数比较,差异无统计学意义(P0.05)。治疗第3周和第4周后,与对照组A相比,对照组B和试验组的排便不同次数的人数差异具有统计学意义(P0.05)。治疗第4周后,试验组与对照组B的排便不同次数的人数比较,差异具有统计学意义(P0.05)。治疗前3组患者Bristol粪便性状评分比较差异无统计学意义(P0.05)。治疗第3和第4周后,与对照组A相比,对照组B和试验组的Bristol粪便性状评分比较,差异有统计学意义(P0.05)。治疗第4周后,试验组与对照组B的Bristol粪便性状评分比较,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后与对照组A比较,对照组B和试验组HAMA评分和HAMD评分显著低于对照组A,且差异具有统计学意义(P0.05)。与对照组B比较,试验组HAMA评分和HAMD评分显著低于对照组B(P0.05)。结论通过补充益生菌可调节功能性腹泻患者腹泻次数,提高功能性腹泻患者生活质量,改善患者焦虑抑郁症状。     

布地奈德混悬液雾化吸入治疗小儿急性喉炎的临床观察

目的：观察布地奈德混悬液雾化吸入治疗小儿急性喉炎的临床疗效。方法：选择2010年6月~2012年12月我院收治的急性喉炎患儿67例为研究对象,并将其随机分为对照组和观察组,两组均给予相同的综合性治疗。在此基础上,对照组仅通过静脉给予地塞米松,观察组在地塞米松静脉给药的同时,加用布地奈德混悬液雾化吸入治疗。治疗后,观察和比较两组患儿的症状、体征缓解时间及住院时间。结果：观察组声音嘶哑、犬吠样咳嗽、喉喘呜、吸气性呼吸困难的缓解时间及住院时间均明显短于对照组,观察组雾化吸入布地奈德4h、24h时的临床疗效明显优于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,两组均无不良反应的发生。结论：布地奈德混悬液雾化吸入治疗小儿急性喉炎起效快,病程短,方法简单,不良反应少。     

猪流行性腹泻病毒经其附属蛋白抑制细胞凋亡

【背景】orf3位于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV) s基因与e基因之间,是目前发现的PEDV唯一一个附属基因,编码附属蛋白(ORF3蛋白)。我们前期研究初步发现ORF3蛋白对PEDV诱导的细胞凋亡有影响。【目的】研究ORF3蛋白在PEDV侵染复制过程中的毒力作用机制。【方法】实验用3种PEDV:rDR13att-?ORF3 (orf3基因全部敲除)、DR13-ORF3att (携带有C端截短orf3)、rDR13att-ORF3wt(携带全长orf3基因)感染Vero细胞,观察病变情况,再用活细胞成像仪、流式细胞仪、 DNA断裂的原位末端标记法[terminaldeoxynucleotidyltransferase(TDT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL]等方法检测不同感染时间点的细胞凋亡情况,然后用蛋白质印迹方法分析PEDV感染宿主细胞中主要凋亡相关蛋白(如Caspase-3)的活化或裂解,最后进行转录组测序研究病毒感染细胞中差异基因的表达情况,再用荧光定量PCR验证转录组结果。【结果】rDR13att-?ORF3引起较多的细胞病变,活细胞成像仪的动态观察结果显示,3种病毒侵染的细胞凋亡水平随着时间的延长均高于正常阴性细胞,但敲除orf3的病毒感染细胞后细胞凋亡率比其他两种病毒更高;敲除orf3病毒感染细胞凋亡率显著高于其他两种病毒;病毒rDR13att-?ORF3感染细胞后TUNEL阳性细胞数比DR13-ORF3att和rDR13att-ORF3wt更多;表达ORF3蛋白的重组PEDV可以抑制Caspase-3的活化;ORF3蛋白对受感染细胞Heat shock 70 kD protein 1B (HSP70)基因转录有促进作用,荧光定量PCR结果表明rDR13att-ORF3wt感染细胞的HSP70表达量高于rDR13att-?ORF3感染细胞。【结论】PEDV通过ORF3蛋白抑制细胞凋亡,而且这种作用可能是通过抑制Caspase-3的活化或增加HSP70的产生来完成的。     

细化健康教育在小儿肠造口术的应用

目的 探讨细化健康教育在小儿肠造口护理中的应用效果.方法 选择2012年1~12月在我科行小儿肠造口术的患儿(实施细化健康教育后)为观察组,选择2011年1～12月小儿肠造口术患儿(未实施细化健康教育)为对照组,比较两组患儿肠造口并发症发生率的差异性.结果 两组患儿肠造口并发症发生率比较,观察组明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在小儿肠造口护理中实施细化的健康教育,可减少护理并发症,促进患儿康复,值得临床推广.     

乳糖酶治疗小儿腹泻病的临床分析

目的 研究小儿腹泻病继发乳糖不耐受的年龄、病因及乳糖酶治疗继发乳糖不耐受的效果.方法 对382例腹泻继发乳糖不耐受患儿进行年龄、病因分析,同时将患儿分成治疗及对照两组,分析乳糖酶的疗效.结果 小儿腹泻继发乳糖不耐受以婴幼儿多见,轮状病毒感染是继发乳糖不耐受的主要病因,乳糖酶治疗继发乳糖不耐受疗效显著.结论 婴幼儿腹泻常规给予乳糖酶可以缩短病程,减少治疗费用,患儿及家长易于接受.