RT-PCR技术在中药及其活性成分作用机制研究中的应用

RT-PCR是近10年内在中药及其活性部位、活性成分药用研究中应用的分子生物学技术之一，它对于研究中药及其有效成分的作用机制、阐明中药药性理论及其可能的物质基础、建立分子水平上的中药活性检测系统，或以受体和基因为靶点寻找新药具有重要的意义。对RT-PCR技术在中草药复方、单味药及其活性成分的药理活性和临床药用分子机制研究中的应用作一综述，为传统中药的开发和寻找新药提供理论依据和实验基础。     

特发性脊柱侧凸患者椎旁肌中神经营养素3的表达及意义

目的:研究特发性脊柱侧凸(IS)患者椎旁肌组织中神经营养素3(Neurotrophin-3,NT-3)在核酸水平(mRNA)的表达情况。方法:随机选择19例IS患者,年龄12～19岁,平均14.3岁,Cobb角42°～80°(平均54°)。手术中取顶椎(T7～T10)凸侧、凹侧椎旁肌肉组织,采用半定量RT-PCR法检测NT-3 mRNA表达水平。取4例相同年龄段的椎间盘突出患者手术切口头端非病变部位椎旁肌肉组织作为对照。结果:对照组椎旁肌中NT-3的mRNA表达阳性率50%,相对表达量为0.0237±0.0158,IS组患者椎旁肌中表达阳性率63.16%,相对表达量为0.1213±0.0939,较对照组表达量增加(P=0.051)。9例Cobb角>50°的IS患者表达阳性率为44.44%,相对表达量0.0431±0.0359,和对照组无明显差异;10例Cobb角≤50°的IS患者中表达阳性率为80%,相对表达量为0.1604±0.0895,与对照组和Cobb角>50°的IS患者比较有明显增加(P<0.01)。结论:正常椎旁肌组织中NT-3在核酸水平微量表达,特发性脊柱侧凸患者椎旁肌组织中NT-3 mRNA表达增加,尤其在小角度IS患者中增加明显,提示IS患者中存在神经营养因子表达异常。     

实时定量逆转录PCR测定EB病毒DNA负荷的临床应用

EB病毒(EBV)是1964年由Epstein和Barr在对非洲Burkitt淋巴瘤来源的瘤细胞进行体外培养时发现的。全球估计EBV成人感染率高达90％以上。已有的证据证明EBV感染可引起传染性单核细胞增多症和器官移植及艾滋病感染等免疫功能降低后的淋巴增生性疾病(lymphoproliferative disease，LPD)。此外，还发现EBV与一些疾病，如淋巴瘤、鼻     

常见食源性感染致病菌属、种用PCR-RFLP及PCR-SSCP技术鉴定探讨

[目的]探讨运用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性分析(IZCR-RFLP)和聚合酶链反应一单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行食源性感染常见致病菌属种鉴定的可行性。[方法]选择细菌23S rDNA基因作为鉴别细菌属的靶基因，通过设计合适的通用引物进行PCR扩增，并对13属食源性感染常见致病菌和5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCF，分析。[结果]运用通用引物可以扩增出13属食源性感染常见致病菌的23S rDNA基因Hpa Ⅱ酶切产物的RFLP分析表明，不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱，利于进行细菌属的鉴定。不同种属食源性感染常见致病菌SSCF，图谱变异性更大，不利于进行种属间鉴别。对5种不同血清型大肠杆菌的23S rDNA基因扩增产物的RFLP和SSCP分析表明，不同血清型大肠杆菌表现出相似的RFLP图谱，SSCP图谱的变异性较大，这有利于进行血清型间鉴别甚至株间的鉴别。[结论]PCR-RFLP和PCR-SSCP具有应用于食源性感染常见致病菌种、属鉴别诊断的潜力。     

聚合酶链反应快速检测胃粘膜幽门螺杆菌

本研究的目的是了解简单的PCR方法诊断幽门螺杆菌感染的价值。选用互补于幽门螵杆菌尿素酶A基因片段的一对引物，建立PCR方法扩增幽门螺杆菌DNA．扩增产物经琼脂糖电泳显示一条411bp区带。用PCR扩增41株HP分离菌均阳性，而空肠弯曲菌等8种肠道细菌均阴性．显示100%特异，系列稀释试验显示PCR能检测0．1pg的HP DNA；126例胃粘膜标本用PCR、尿素酶试验、培养和涂片检查，HP检出率分别为70．6%、56．3%、32．5%和56．3%，这些结果提示简单快速的PCR方法是检测FIP的有价值的方法。     

应用原位聚合酶链反应对肝细胞癌组织中HBVDNA进行再评价

为探讨ＨＢＶ感染与肝细胞癌（ＨＣＣ）发生之间关系，作者应用原位聚合酶链反应（ＰＣＲＩＳ）对２６例肝癌、２３例癌旁肝组织的石蜡切片进行了ＨＢＶＤＮＡ的检测，检出率分别为８４．６％和９１．３％，明显高于原位核酸杂交（ＩＳＨ）的５３．８％（１４／２６）和５６．５％（１３／２３）；亦高于从患者血清和ＨＣＣ组织提取ＤＮＡ后行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增的５７．７％（１５／２６）和５５．６％（５／９）。用ＰＣＲＩＳ方法，ＨＣＣ组织细胞中ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒强度、ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞数和组织切片的清晰度均高于ＩＳＨ。ＰＣＲＩＳ既显示了ＰＣＲ技术的高敏性和特异性，又能在细胞内定位。本结果显示我国ＨＣＣ的发生与ＨＢＶ感染密切相关。     

巢式PCR检测先天性心脏病心脏石蜡标本中B19病毒的感染

目的：探讨微小病毒Ｂ１９与先天性心脏病（ＣＨＤ）的相关性及可能致畸机理。方法：采用病例对照研究，病例组为２９例ＣＨＤ尸解心脏组织，对照组为３０例同期非先天性畸形尸解心脏组织，应用巢式ＰＣＲ扩增Ｂ１９－ＤＮＡ，单纯疱疹病毒（ＨＳＶ），兔弓形虫（ＴＯＸ），巨细胞病毒（ＣＭＶ），结果：２９例ＣＨＤＢ１９－ＤＮＡ５例阳性，全瓿对照组为均阴性（Ｐ＝０．０２３７），ＨＳＶ，ＴＯＸ两组中均阴性，ＣＭＶ在两组中均