四倍体平贝母的诱导及鉴定

目的运用组织培养技术诱导平贝母四倍体。方法采用不同质量浓度(200、500、1 000、2 000 mg/L)秋水仙素和不同的诱导时间(12～72 h)处理平贝母愈伤组织。结果离体培养条件下,平贝母激素自养型培养材料在秋水仙素诱导下得到四倍体,四倍体染色体4n=44,四倍体植株出现明显的多倍体特征。结论 500 mg/L秋水仙素处理24 h为最佳组合,可以诱导四倍体平贝母以平贝母子球做鉴定材料,获得较好的结果。     

玄参愈伤、不定根和内生菌产哈巴俄苷的比较

目的:诱导玄参愈伤、不定根产生,分离内生菌,并比较其中有效成分哈巴俄苷的含量。方法:玄参嫩叶片消毒切成小块接种于含不同激素水平的MS,N6培养基诱导愈伤;不定根诱导采用液体培养:将愈伤小块先转入不含激素MS液体培养基,100 r.min-1室温震荡培养,待开始出现不定根后转入含0.05 mg.L-1NAA+2 mg.L-16-BA的MS液体培养基继续震荡培养,内生菌分离采用常规方法。哈巴俄苷含量测定采用紫外分光光度法,测定波长255 nm。结果:MS培养基+NAA0.05,0.2,2 mg.L-1+6-BA 2 mg.L-1均能诱导出质地较疏松、生长较快的愈伤组织;接种1.5 g愈伤30 d左右可得到100 mL满瓶不定根;从玄参鲜块根分离出4株可产哈巴俄苷的内生菌。玄参愈伤组织、不定根及四株内生菌发酵液的哈巴俄苷含量依次分别为:0.411,0.099 5,0.451,0.444,0.489,0.440 g.L-1.结论:玄参愈伤组织中哈巴俄苷含量是不定根的4倍,内生菌发酵液哈巴俄苷含量可达到与愈伤相当水平,具有开发应用的潜力。同时为研究玄参与内生菌相互作用打下基础。     

忍冬原生质体分离条件研究

目的:探讨忍冬原生质体分离的最佳条件,为忍冬原生质体培养、细胞融合以及遗传转化提供大量优质的原生质体.方法:分别对忍冬原生质体分离过程中的若干影响因子如:酶液组成、酶解方式、酶解时间、酶解温度、渗透压进行比较分析,以确定最佳的分离条件.结果:确定了最优化的忍冬原生质体分离条件,即以生长旺盛的疏松的忍冬愈伤组织作为分离原生质体所需材料,以1.5％纤维素酶+0.25％果胶酶作为分离原生质体所用酶液,以含有0.7 mol·L-1甘露醇作为渗透保护剂的细胞-原生质体清洗液(CPW)溶液进行酶液的配制,于25℃静置条件下酶解12 h.结论:利用该实验所确定的忍冬原生质体最佳分离条件可获得大量优质的原生质体,为后续忍冬细胞融合以及遗传转化等实验奠定良好的实验基础.     

三角叶黄连愈伤组织诱导和培养条件的优化

目的:对三角叶黄连愈伤组织的培养条件进行优化,建立三角叶黄连组织培养的技术体系.方法:采用响应面方法( RSM)中的Box-Behnken设计方法优化三角叶黄连愈伤组织增殖的最佳激素配比;考察不同培养基、外植体、温度、光照条件对三角叶黄连愈伤组织诱导的影响.结果:以茎尖为外植体愈伤组织诱导率最高,为12.67％,最佳培养条件为(15±2)℃,暗培养.2,4-D,KT是影响三角叶黄连愈伤组织形成的主要因素,其次为NAA.结论:三角叶黄连愈伤组织诱导的最适培养基为6,7-V +2,4-D0.5 mg·L-1+KT 2.0 mg·L-1,增殖的最适培养基为6,7-V +2,4-D 4.6 mg·L-1+KT3.8 mg·L-1+NAA2.4 mg·L-1.     

激素对菘蓝器官分化及愈伤组织诱导的影响

目的研究激素对菘蓝器官分化及愈伤组织形成能力的影响。方法以菘蓝无菌苗的子叶和胚轴为外植体,采用含有不同植物激素配比的培养基培养菘蓝不同外植体,分析在不同激素配比的条件下诱导形成愈伤组织和分化不定根、不定芽的能力。结果在NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.1 mg/L(14d)、NAA 0.5mg/L+6-BA 1.0 mg/L(14d)、NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L(28d)三个条件下子叶的愈伤组织诱导率可达到100%;NAA(0 mg/L～0.1 mg/L)+6-BA1.0 mg/L的激素组合不定芽诱导率可达75%以上;生根培养以1/2MS培养基附加NAA 0.1 mg/L可使不定芽生根率可达100%。结论合适的激素组合,能促进菘蓝愈伤组织的形成和器官的分化。。     

川白芷花药培养技术体系的建立

目的:探讨川白芷花药培养中愈伤组织诱导和植株再生条件.方法:以川白芷花药为外植体,以MS为基本培养基,研究低温(4℃)预处理时间、光暗培养条件以及不同激素配比对川白芷花药培养愈伤组织诱导和植株再生的影响.结果:不经过低温预处理的花药诱导率最高,低温预处理2d的花药诱导率次之;暗培养为最佳培养条件;诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2.0mg·L-12,4-D+1.0mg·L-16-BA,愈伤组织诱导率可达38.89％;MS +0.5 mg·L-1NAA+1.5 mg·L-1KT+10mg· L-1AgNO3适于不定芽的诱导,不定芽转入附加0.5 mg·L-1IBA的1/2 MS的生根培养基上,生根后获得完整的再生植株.结论:初步建立了川白芷花药培养愈伤组织诱导及植株再生体系.     

海南广藿香试管内芽分化与愈伤组织诱导研究

目的选择海南广藿香的最佳芽分化和愈伤组织诱导培养基。方法利用海南广藿香的叶柄、茎尖和带节茎段进行组织培养芽分化试验,并对上述材料进行愈伤组织诱导培养基选择试验。结果在芽分化培养基中,MS＋3-吲哚丁酸（IBA）1．0mg／L＋6-苄基腺嘌呤（6-BA）0．6mg／L培养基能够较好地诱导茎尖和带节茎端长出新芽,诱导率分别为94．3％和94．6％;在愈伤组织诱导培养基中,MS＋萘乙酸（NAA）0．1mg／L＋6-BA2．0mg／L培养基能较好地诱导海南广藿香叶柄和带节茎段产生愈伤组织,诱导率分别为80．0％和100％。结论海南广藿香的最佳芽分化和愈伤组织诱导培养基分别为Ms＋IBA1．0mg／L＋6-BA0．6mg／L和Ms＋NAA0．1mg／L＋6-BA2．0mg／L。     

东北红豆杉愈伤组织中紫杉烷类化合物的分离与鉴定

目的明确东北红豆杉(Taxus cuspidata)愈伤组织中的化学成分,为开发可持续利用的红豆杉资源提供理论依据。方法采用硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱等手段对愈伤组织的正己烷和乙酸乙酯提取物进行分离和纯化;根据化合物的理化性质和波谱数据并结合相关文献对化合物结构进行鉴定。结果从东北红豆杉愈伤组织中分离得到11个紫杉烷类化合物,分别鉴定为tax-uyunnanine C(1)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-propionyloxy-4(20),11-taxadiene(2)、2α,5α,10β-tri-acetoxy-14β-isobutyryloxy-4(20),11-taxadiene(3)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-(2′-methyl)butyrylo-xy-4(20),11-taxadiene(4)、云南红豆杉甲素(yunnanxane,5)、紫杉醇(paclitaxel,6)、taxol C(7)、baccatin VI(8)、1β-deoxybaccatin VI(9)、taxayuntin C(10)、baccatin I(11)。结论化合物9、11为首次从东北红豆杉愈伤组织中分离得到,化合物1-4、8-10尚未在东北红豆杉中发现。     

刺五加愈伤组织的诱导及愈伤组织状态调控

目的获得适宜悬浮培养的刺五加愈伤组织。方法利用植物组织和细胞培养技术,考察3种诱导培养基及9种继代培养基对刺五加愈伤组织的诱导及愈伤组织状态的影响。结果以α-萘乙酸(α-Naphthaleneacetic acid)2.0 mg.L-1+6-苄氨基嘌呤[N-(phenylmethyl)-1H-purin-6-amine,6-BA]2.0 mg.L-1诱导出的愈伤组织适于悬浮培养,叶和叶柄的诱导率分别为93.3%和100%;筛选出最佳固体继代培养的外源激素配比为NAA1.0 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1,在此激素配比下,愈伤组织生长代谢迅速,性状稳定,呈易分散的颗粒状,易于分散,适合下一步的悬浮培养。结论以刺五加嫩叶为外植体,NAA2.0 mg.L-1+6-BA2.0 mg.L-1为诱导培养基,NAA1.0 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1为继代培养基可以获得适宜悬浮培养的愈伤组织。     

贯叶金丝桃愈伤组织的诱导及其有效成分的定性

目的 :诱导出贯叶金丝桃的愈伤组织 ,并确定其中含有金丝桃素。方法 :在不同条件下采用组织培养技术 ,进行贯叶金丝桃的愈伤组织诱导研究 ,用HPLC方法确定其中含有的金丝桃素。结果和结论 :最佳诱导条件是MS基本培养基加入生长调节物质 2 ,4 D(4μg·L- 1 )和 6 BA(0 .2 μg·L- 1 )。叶腋等分生组织较多的部位易于诱导愈伤组织。诱导出的愈伤组织 ,经HPLC方法确定其含金丝桃素