诱导培养条件显著改变甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性

采用化学分析和高效液相色谱（HPLC）相结合的方法评价典型愈伤组织诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响,这些诱导培养条件包括甘草种属（胀果甘草和光果甘草）、外植体（胚轴和子叶）、光照条件（24 h 光照和24 h黑暗）和2种激素组合。以化学成分总黄酮为指标,采用单因素方差分析法（One-way ANOVA）评价不同诱导培养条件下获得的甘草愈伤组织的总黄酮含量,结果显示甘草种属、外植体和光照条件对甘草愈伤组织中总黄酮的含量影响显著（P<0.05）。采用HPLC指纹图谱的差异度评价不同诱导培养条件对甘草愈伤组织次生代谢产物多样性的影响发现：诱导培养条件对愈伤组织的次生代谢产物的多样性有显著影响,激素组合（差异度=0.37）和光照条件（差异度=0.45）对甘草愈伤组织次生代谢产物的多样性影响最大。上述结果对选择合适的愈伤组织和细胞系培养生产甘草药用次生代谢产物或活性组分具有重要的指导意义。     

北柴胡花药愈伤组织高效再生体系的建立

以花粉发育处于单核期的北柴胡花药为外植体诱导出愈伤组织,愈伤组织经多次继代培养后,置于20种含不同植物激素的分化培养基上诱导分化。分别在培养21,49 d后,统计每种培养基中分化出苗数,同时观察再生植株生长状况,从中筛选出分化率高,分化速度快,且植株生长状态良好的分化培养基。结果共在19种培养基均可分化出苗,分化率在3%~60%,大部分低于20%。在MS+KT 0.5 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+植物凝胶5 g·L^-1培养基上分化率最高,为60%,其次为MS+ ZT 1.0 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+植物凝胶5 g·L^-1,为58%。另外,针对在分化培养基中未能生根的再生芽,进行了生根培养基筛选。结果显示再生芽在生根培养基MS+蔗糖30 g·L^-1 +植物凝胶5 g·L^-1和1/2 MS+ NAA 0.5 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1 +植物凝胶5 g·L^-1中均可生根,生根率均为100%。由此建立了北柴胡花药愈伤组织高效稳定的再生体系。     

离体条件下培养物中冬凌草甲素积累与其组织结构关系

目的： 研究冬凌草甲素动态积累变化关键期培养物显微、超微结构的变化,探讨培养物组织结构与冬凌草甲素积累的相关性。 方法： 采用高效液相色谱法研究了离体培养过程中培养物内冬凌草甲素积累的动态变化规律。在此基础之上,采用石蜡切片、透射电镜方法研究了培养物组织结构与冬凌草甲素积累的关系。 结果： 离体培养过程中培养物中冬凌草甲素积累表现出有-无-有的规律性,随着叶片外植体的脱分化,培养物内叶绿体数目逐渐减少,冬凌草甲素的含量也随之逐渐降低,当冬凌草甲素再次积累时,培养物内叶绿体数目再次增多且出现了维管组织的分化。 结论： 冬凌草甲素积累合成与培养物叶绿体数目的多少及内部维管系统的分化有着紧密的联系。     

青叶胆组织培养条件优化及不同交配方式子代植株再生能力比较研究

目的优化青叶胆Swertia mileensis组织培养快速繁殖技术,同时比较不同交配方式后代植株的再生能力,从而探讨青叶胆片断化居群繁殖保障机制。方法以自交、近交、远交和自然结实种子为材料,相同方法消毒后接种于空白MS培养基上,60 d后统计各组萌发率;在此基础上,以各组无菌苗带节茎段为外植体,采用正交试验考察不同来源外植体在添加不同植物激素及质量浓度组合的MS培养基中诱导愈伤组织及丛芽分化能力。结果自交、近交、远交和自然结实种子萌发率之间无显著性差异(P0.05);适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+ZT 0.5 mg/L+2,4-D 0.05 mg/L,在此培养条件下,自交、近交、远交和自然结实种子苗带节茎段愈伤组织诱导率分别达100%、96.67%、96.55%和96.29%,各组间无显著性差异;适宜的丛芽发生培养基为MS+BA 2.0 mg/L+KT 0.1 mg/L+NAA 1.0 mg/L,4种来源不同的愈伤组织丛芽分化率均为100%;生根则在1/2 MS+NAA 1.0 mg/L中进行,4种来源不同的试管苗生根率均为100%,生根苗在生长势上亦无明显差别。结论优化的青叶胆组织培养快速繁殖技术,为保护其野生资源、种苗繁殖提供了有效途径,同时从植物生理学角度初步推测青叶胆近交的获益可以补偿与近交相伴的适合度损失,其后代植株在再生能力方面与异交无显著差异。     

荷花玉兰组织培养的研究

采用正交设计法考察了４种植物激素对诱导荷花玉兰愈伤组织产生的影响,筛选出最佳的植物激素配比为：ＭＳ培养基＋２,４－Ｄ（２,４－二氯苯氧乙酸,４ｍｇ／Ｌ）＋６－ＢＡ（６－苄基氨基嘌呤,１ｍｇ／Ｌ）＋ＮＡＡ（ａ－萘乙酸,４ｍｇ／Ｌ）;找到最适外植体为花托和叶芽,对比了不同外植体形成愈伤组织的时间、形态和质地的差异。     

银杏愈伤组织和悬浮细胞培养及黄酮类化合物的产生

进行了银杏愈伤组织和悬浮细胞培养及其次生代谢产物———黄酮类化合物的研究．考察了不同理化因子对各种银杏外植体黄酮含量的影响．对银杏细胞培养物中的芦丁、槲皮素和山奈酚进行了ＨＰＬＣ的定量测定     

不同因子对长春花愈伤组织中药用成分积累的影响

 目的 研究继代次数、继代龄(继代组织块的年龄)、生长素、金属离子等因子的改变对长春花愈伤组织生长及吲哚生物碱类药用成分积累的影响。方法 测定不同因子的影响下,长春花愈伤组织的鲜重,并对吲哚总碱进行提取、含量测定和比较。结果 随继代次数的增加,长春花愈伤组织中吲哚总碱含量有所下降;20 d继代龄最利于组织生长;2,4-二氯苯氧乙酸的存在对吲哚总碱的积累有一定的抑制作用,但却有利于愈伤组织生长,两种生长素组合比单一的生长素更利于组织生长,也较利于吲哚总碱积累;钙离子浓度为220 mg·L^-1,锌离子浓度为8.6哗·L^-1时,对提高吲哚总碱产量最有效。结论 继代次数、继代龄、生长素、金属离子对长春花愈伤组织生长及吲哚生物碱类药用成分的积累有较大影响。     

Plant Regeneration through Somatic Embryo in Herpetospermum pedunculosum, an Endangered Tibetan Medicinal Herb

Objective An effective reproducible protocol for complete plant regeneration via somatic embryogenesis has been developed for Herpetospermum pedunculosum, an endangered Tibetan medicinal herb. Methods The cotyledon explants used in this study were excised from seedlings germinated in vitro. Callus was induced from cotyledon explants on Murashige and Skoog's medium, supplemented with 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D, 0.1-1.0 mg/L) alone or in combination with 6-benzylaminopurine (BA, 0.5, 1.0, and 2.0 m...     

化瘀补肾方对卵巢切除小鼠骨折愈合的作用

目的观察化瘀补肾方对卵巢切除小鼠骨折愈合的作用。方法 3月龄雌性C57BL/6小鼠48只分为假手术组、模型组和化瘀补肾方组各16只。模型组和化瘀补肾方组小鼠采用双侧卵巢切除术(OVX)建立骨质疏松症模型。术后12周,各组小鼠建立左侧胫骨中段骨折模型。术后给予化瘀补肾方组小鼠化瘀补肾方灌胃,给予假手术组与模型组小鼠等体积生理盐水灌胃,至骨折术后4周取材。检测各组小鼠血清雌二醇水平,采用Micro-CT检测小鼠第4腰椎及左侧胫骨的骨密度,检测左侧胫骨最大应力,对左侧胫骨石蜡切片进行阿尔辛蓝/橙黄G染色,观察骨组织形态学变化。结果 OVX后4周开始,模型组小鼠体重明显升高,并持续高于假手术组(P0.01)。骨折术后4周,模型组小鼠血清雌二醇和第四腰椎骨密度(BMD)明显低于假手术组(P0.01),化瘀补肾方组小鼠血清雌二醇水平和第四腰椎BMD高于模型组(P0.01)。Micro-CT三维重建显示,模型组左侧胫骨仍有明显的骨折线,骨痂生长不明显,化瘀补肾方组骨折线模糊,骨痂形成明显。与假手术组相比,模型组小鼠的BV/TV(P0.01)、Tb.Th(P0.05)和Tb.N(P0.01)均明显降低,Tb.Sp明显升高,化瘀补肾方组小鼠的BV/TV(P0.05)、Tb.Th(P0.05)相较于模型组则显著升高,但Tb.N、Tb.Sp差异无统计学意义。与假手术组比较,模型组小鼠胫骨的最大应力在骨折术后28 d时显著低于假手术组(P0.01),化瘀补肾方组小鼠胫骨的最大应力显著高于模型组(P0.01)。阿尔辛蓝/橙黄G染色显示,假手术组和化瘀补肾方组骨痂组织处于塑形期,可见明显骨小梁结构,而模型组骨痂组织内见大量脂肪组织,骨小梁稀疏。结论化瘀补肾方能有效促进去卵巢小鼠的骨折愈合,改善愈合骨组织的生物力学性能。