培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导及牛膝多糖含量的影响

目的:研究培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导形成及牛膝多糖含量的影响。方法:以怀牛膝无菌苗的叶片、茎段为材料,采用正交设计研究基本培养基,碳源,2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)、N-苯基-N′-噻二唑-5-脲(TDZ)、水解酪蛋白(CH)对愈伤组织诱导和多糖含量的影响。结果:诱导叶片愈伤组织形成的适宜培养基为B₅+2mg·L^-12,4-D+0.5mg·L^-16-BA+30g·L^-1葡萄糖+1g·L^-1CH,诱导茎段愈伤组织形成的适宜培养基为B₅+2mg·L^-12,4-D+1mg·L^-16-BA+30g·L^-1葡萄糖+0.5g·L^-1CH;有利于叶片愈伤组织中多糖含量提高的培养基是LS+1mg·L^-16-BA+1mg·L^-1TDZ+30g·L^-1蔗糖,有利于茎段愈伤组织中多糖含量提高的培养基是LS+1mg.L^-12,4-D+0.5mg·L^-16-BA+1mg·L^-1TDZ+30g·L^-1葡萄糖。结论:初步建立了怀牛膝叶片、茎段诱导愈伤组织的适宜培养条件,为通过植物组织细胞培养途径生产牛膝多糖提供了依据。     

皖贝母试管鳞茎诱导技术的研究

目的：研究离体条件下皖贝母试管鳞茎诱导的最佳培养条件。方法：以单块愈伤组织分化形成的鳞茎个数和鲜重为指标，考察蔗糖浓度、水杨酸、活性炭和5 ℃低温预培养对皖贝母试管鳞茎的形成和生长的影响。结果：50 g·L-1的蔗糖处理形成的鳞茎个数和鲜重都极显著高于其他处理，水杨酸对试管鳞茎的形成具有抑制作用，以 5 g·L-1的活性炭处理形成鳞茎个数和鲜重优于其他处理，5 ℃低温预培养30～40 d对试管鳞茎的形成和膨大效果最好。结论：低温预培养30～40 d的皖贝母愈伤组织，接种于MS+KT 2 mg·L-1+NAA 2 mg·L-1+50 g·L-1蔗糖+5 g·L-1活性炭的培养基中，鳞茎形成和生长发育效果最佳。     

两种培养基对贯叶连翘愈伤组织形成影响的研究

目的观察贯叶连翘叶片外植体在两种培养基中发生的结构变化。方法利用形态学手段,研究不同培养基对愈伤组织诱导过程中细胞结构变化的不同。结果不同点主要集中于叶绿体及淀粉粒的变化。发现两种培养基在诱导愈伤组织过程中在淀粉粒出现膨大的时间、淀粉粒变化趋势、叶绿体外形变化以及出愈伤时间上有不同之处。结论两种培养基下脱分化之所以会有不同是不同激素产生不同作用的结果。     

黄芩愈伤组织培养及黄芩苷合成调控的研究

目的研究黄芩愈伤组织培养和黄芩苷合成调控的规律。方法采用植物细胞培养技术诱导愈伤组织;HPLC法测定黄芩苷的量。结果黄芩愈伤组织生长和黄芩苷积累的优势培养条件为在基本培养基MS中氮源浓度为60mmol/L(NH4 ∶NO3-为1∶1),KH2PO4浓度0.5~1.5mmol/L,附加80g/L蔗糖,0.3mg/LIAA,2mg/L6-BA和200mg/L蛋白胨,温度(25±1)℃,暗培养。培养40d后收获愈伤组织,生物量达28.7g/L,黄芩苷为167.4mg/g,明显高于野生黄芩的最高量。结论黄芩愈伤组织的生长和黄芩苷的积累并不同步,而是先生长后合成。蔗糖对黄芩苷的合成具有明显的调节作用,在蔗糖质量浓度小于3%时,能有效促进愈伤组织的生长,但对黄芩苷的合成没有刺激作用;当蔗糖质量浓度在3%~8%时,愈伤组织表现出明显的生长和次生代谢功能,黄芩愈伤组织的生长及黄芩苷合成明显增加;当蔗糖质量浓度在8%时,两者均达到最大值。     

檀香体胚发生及影响因素的研究

目的　探讨檀香胚性细胞发生体胚的技术。方法　以檀香实生苗的下胚轴为材料 ,MT为基本培养基 ,附加不同种类的植物激素。结果　基本培养基以 MT或 MS为好 ;IAA与 BA结合有利于胚性愈伤组织的形成 ,诱导率可达 36 .7% ;体胚发生 ,以 MT+IAA(NAA) 0 .2 mg/ L+BA1mg/ L 培养基较好 ,能诱导体胚发育 ,长出正常茎叶 ;BA浓度为 0 .5～ 1.0 mg/ L 时 ,既有利于体胚发生 ,又能保证一定的增殖速度。结论　成功地诱导出檀香胚性愈伤组织 ,通过体细胞胚胎发生长出正常茎叶 ,为利用生物技术的手段进行檀香人工种子的研究奠定基础     

凹叶厚朴愈伤组织中厚朴酚及和厚朴酚的提取方法和工艺的优选研究

目的研究凹叶厚朴愈伤组织中厚朴酚及和厚朴酚提取方法和工艺的优选。方法采用超声波法、浸渍法及浸渍-超声波法提取厚朴酚及和厚朴酚,采用高效液相色谱法测定凹叶厚朴愈伤组织中酚的含量;采用正交试验设计,以超声波法为提取工艺,进一步考察溶剂、温度、提取时间对含量检出值的影响。结果厚朴酚与和厚朴酚的含量浸渍法为0.135%与0.017%,超声波法为0.144%与0.018%,浸渍-超声波法为0.146%与0.018%;最佳工艺为A3B2C3,即用丙酮30℃超声提取60 min。结论本试验的结果可以为凹叶厚朴的生物技术利用提供科学的实验及理论依据。     

青羊参遗传转化中组织培养系统的研究

目的建立用于遗传转化的青羊参组织培养系统。方法以不同外植体部位、不同消毒剂、不同消毒时间建立无菌苗;以不同外植体部位、不同激素种类及配比、不同质量浓度的2,4-D与KT诱导青羊参愈伤组织形成、继代、分化;测定青羊参对标记基因分解物庆大霉素(Gent.)的敏感性。结果以青羊参的种子及茎段做外植体,以10%次氯酸钠消毒种子20～30min,或以0.2%HgCl2消毒茎段3min建立无菌苗具有最好效果;青羊参的种子、根、茎、叶易于形成愈伤组织;2,4-D对青羊参愈伤组织的形成是必要的;青羊参对KT较为敏感,不论用KT诱导青羊参愈伤组织的形成,还是诱导胚芽或腋芽形成,均有较好效果;以MS为基本培养基,以2,4-D1.0mg/L KT1.0mg/L为激素配比诱导青羊参愈伤组织的形成具有较好效果;以MS 2,4-D0.5mg/L KT0.5mg/L继代愈伤组织具有较好效果;以MS KT0.5mg/L NAA0.1mg/L诱导种子的胚芽或茎段的腋芽萌发具有较好效果;青羊参的愈伤组织不论来源于种子,还是来源于根、茎、叶,不论使用激素6-BA,还是使用KT、ZT、2ip均未观察到愈伤组织分化形成不定芽;100μg/mL的庆大霉素是青羊参转基因植株筛选的最佳压力。结论通过基因枪介导转基因时,选择种子或茎段在MS 2,4-D1.0mg/L KT1.0mg/L培养基上萌动14d,形成愈伤但未形成芽的材料作为基因枪轰击材料较好。     

老瓜头愈伤组织诱导培养技术的研究

目的为老瓜头Cynanchum komarovii资源利用提供前期的生物技术实验参考。方法以老瓜头的根段、茎段和叶片为外植体,采用正交试验方法,筛选诱导愈伤组织产生的最适培养基;进行愈伤组织增殖培养过程中,测定了不同时间愈伤组织的鲜、干质量,绘制愈伤生长曲线;同时进行了愈伤组织分化培养基的实验筛选。结果不同外植体诱导愈伤产生,其根诱导效果最好,各处理诱导率达90%~100%,茎段和叶片愈伤组织诱导最佳配方分别为MS 2,4-D1.0mg/L 6-BA2.0mg/L NAA0.5mg/L和MS 2,4-D0.5mg/L 6-BA0.5mg/L NAA0.5mg/L,茎段比叶片较容易诱导,各处理诱导出的愈伤组织质地松散,颜色鲜黄,几乎无褐化现象。愈伤组织继代生长在第10天进入对数生长期,愈伤鲜生长量最大达4.961g,干质量0.496g。愈伤组织的分化率很低,很难生芽,易分化出钉状根。结论对于诱导愈伤形成,根段是最佳的外植体,筛选出了茎段和叶片诱导愈伤的最适配方,愈伤组织生长量较大,但分化困难。     

柴胡愈伤组织生长和不定根诱导的研究

目的探讨柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的适宜培养条件。方法以无菌苗为外植体诱导获得愈伤组织后,对不同种类和不同质量浓度的生长素进行实验,并对光和温度对柴胡愈伤组织生长和其不定根诱导的影响进行了研究。结果柴胡的愈伤组织适宜于在MS NAA4mg/L KT0.2mg/L培养基或MS NAA2mg/L KT0.2mg/L培养基上继代培养。诱导其不定根时宜采用的培养基为MS IBA2mg/L KT0.2mg/L。25℃条件下,黑暗培养既有利于柴胡愈伤组织的生长又有利于其不定根的诱导。结论比较适宜于柴胡愈伤组织生长的生长素为NAA,而有利于不定根诱导的生长素为IBA。温度对愈伤组织的生长影响非常明显,光照是其发根的限制因素。