赖氨大黄酸通过激活JNK诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的研究赖氨大黄酸(RHL)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法用MTT法检测细胞增殖;用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western blot检测凋亡相关蛋白及JNK蛋白与蛋白磷酸化水平。结果 RHL能有效抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,并能诱导其凋亡,随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐升高;RHL能够激活caspase-3、caspase-7和PARP,并激活磷酸化的JNK表达,磷酸化的JNK表达增加在RHL的诱导凋亡中起主要作用。结论 RHL通过激活JNK-caspase-PARP信号通路抑制HeLa细胞增殖,并诱导其凋亡,赖氨大黄酸解决了大黄酸不溶于水的问题,有望成为临床肿瘤辅助化疗药物。     

RP-HPLC法测定三黄散瘀巴布剂中5种蒽醌类成分的含量

目的:建立三黄散瘀巴布剂中芦荟大黄素,大黄酸,大黄素,大黄酚,大黄素甲醚的RP-HPLC含量测定方法。方法:反相高效液相色谱法。色谱柱:Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);柱温25℃;流动相:甲醇-0.1%磷酸;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:254 nm;进样量:10μL。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分别在21.45²14.5 ng、15.68214.5 ng、15.68¹56.8 ng、18.77156.8 ng、18.77¹87.7 ng、37.40187.7 ng、37.40³74.0ng、11.05374.0ng、11.05⁸8.42 ng范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.82%(RSD 2.6%)、100.5%(RSD1.1%)、101.3%(RSD 1.5%)、101.5%(RSD 2.4%)、97.07%(RSD 0.80%)结论:本法稳定、可靠、操作简便、快速、重现性好,可用于三黄散瘀巴布剂的质量控制。     

HPLC法同时测定利胆排毒口服液中大黄酸、大黄素、大黄酚的含量

目的:建立HPLC法同时测定利胆排毒口服液中大黄酸、大黄素、大黄酚含量的方法.方法:采用Atlantis T3柱(150 mm×4.6 mm,3 μm),甲醇-0.05%磷酸溶液(85:15)为流动相,流速:0.8 ml·min-1,检测波长:254 nm,柱温:30℃.结果:大黄酸、大黄素、大黄酚分离度好,可排除其他物质的干扰.大黄酸在16.71～334.20 μg·ml-1的范围内有良好的线性关系,平均回收率为98.85%,RSD为0.47%;大黄素在2.06～41.28 μg·ml-1范围内有良好线性关系,平均回收率为96.95%,RSD为1.03%;大黄酚在4.46～111.60 μg·ml-1范围内有良好线性关系,平均回收率为97.97%,RSD为0.67%.结论:本方法可同时测定大黄酸、大黄素、大黄酚的含量,准确度高,重复性好,可为利胆排毒口服液质量控制提供依据.     

Antioxidant and Scavenging Activity of Emodin,Aloe-Emodin,and Rhein on Free-Radical and Reactive Oxygen Species

The objective of this study was to investigate the ability of emodin (1), aloe-emodin (2), and rhein (3) to inhibit free-radical or reactive oxygen species (.OH, ¹O₂, H₂O₂) generated in cell-free systems using isoluminol and luminol-enhanced chemiluminescence and electronic absorption spectra. In the presence of 1, 2, and 3, a dose-dependent inhibition period was observed in this system as assayed by isoluminol-enhanced chemiluminescence (ILCL) with horseradish peroxidase (HRP), as well as by luminol-enhanced chemiluminescence (LCL) with H₂O₂ or ferrous iron. On the other hand, these hydroxyanthraquinones showed an efficient scavenging activity of galvanoxyl radical in ethanolic solutions. In a separate experiment, we observed the trapping of singlet oxygen (¹O₂) generated by rose bengal in the presence of 1, 2, or 3. These results suggest that emodin, aloe-emodin, and rhein scavenge reactive oxygen and free-radical species in the following decreasing order: emodin > rhein > aloe-emodin.     

不同炮制方法对大黄中5种蒽醌类化合物含量的影响

目的：观察不同炮制方法对大黄中5种蒽醌类成分的影响,建立大黄炮制品的质量控制方法.方法：采用色谱柱为Shimadzu C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱进行测定.结果：大黄酸,大黄素、大黄粉,芦荟大黄素,大黄素甲醚加样回收率分别为98.9%（RSD=1.61%）,97.5%（RSD=1.12%）,100.6%（RSD=1.08%）,102.3%（RSD=1.78%）,101.2%（RSD=2.11%）.结论：本方法操作简单、准确,重现性好,适用于大黄饮片内在质量的评价和控制.     

HPLC法测定八正合剂中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚

目的:建立高效液相色谱法同时测定八正合剂中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的含量。方法:采用Lu-na-C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸(80:20);流速:0.8 ml/min;检测波长:254 nm;柱温:35℃。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和大黄酚的线性范围分别为0.032μg~0.324μg、0.039μg~0.387μg、0.0104μg~0.104μg和0.0103μg~0.103μg,相关系数均为0.9999;平均加样回收率分别为98.3%、98.7%、97.7%和97.2%;RSD分别为0.9%、0.8%、1.0%和1.1%(n=6)。结论:本法专属性好,准确度、重现性好,可作为制剂的定量分析方法。     

赖氨大黄酸对HeLa细胞周期的影响及其机制

目的探讨赖氨大黄酸对HeLa细胞周期的影响及其机制。方法 MTT法检测赖氨大黄酸对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞技术检测活性氧水平和细胞周期变化;显微镜下观察HeLa细胞形态变化;Western blot法检测p53和p21蛋白表达。结果赖氨大黄酸剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,IC50约为83μmol·L-1。随着赖氨大黄酸剂量的增加,HeLa细胞中活性氧水平增加,并出现S期和G2期阻滞,以及细胞空泡样变性。通过Western blot研究发现赖氨大黄酸处理后的p53蛋白磷酸化水平呈剂量依赖性地增加,同时下游周期相关蛋白p21表达水平也随之增加,而p53蛋白表达水平未出现显著地剂量依赖性变化。结论赖氨大黄酸通过增加HeLa细胞中活性氧水平,引起细胞周期相关蛋白p53的磷酸化水平和p21蛋白表达水平增加,引起HeLa细胞出现空泡样变性,并诱导S期和G2期阻滞。     

HPLC法测定牛黄解毒片中5种成分的含量

目的:建立一种同时测定牛黄解毒片中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量测定方法.方法:以XltimateTM XB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,柱温35℃,流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速:1.0 ml·min-1;检测渡长:430 nm;进样量10μl.结果:芦...     

大承气汤水煎剂HPLC指纹图谱研究

利用中药指纹图谱研究大承气汤水煎剂,为该方的物质基础和质量控制提供了科学依据。采用Kromasil-C ₁₈色谱柱,乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.6 mL/min,检测波长261 nm,柱温30 ℃,以大黄酸为参照物,采用相关系数法对10批大承气汤水煎剂进行分析。建立了大承气汤水煎剂的HPLC指纹图谱,标定了19个共有峰,鉴定了其中7个峰,10批样品的相似度在0.977~0.997之间。研究表明：建立的方法准确、可靠,可用于大承气汤物质基础的研究和其中成药开发时的质量控制。     

赖氨大黄酸对D-半乳糖致衰老模型小鼠的肾脏保护作用及其作用机制

目的: 研究赖氨大黄酸(RHL)对D-半乳糖衰老模型小鼠的抗衰老和肾脏保护作用,阐明其作用机制,为RHL预防衰老的研究提供依据。方法: 通过腹腔注射D-半乳糖建立小鼠衰老模型,将小鼠随机分为对照组、衰老模型组和低、高剂量RHL组。除对照组外,其余各组小鼠每天腹部皮下注射D-半乳糖100 mg·kg^-1,持续8周,对照组小鼠每天皮下注射等量生理盐水,低和高剂量RHL组小鼠分别每天1次灌胃25和50 mg·kg^-1的RHL。观察各组小鼠一般状况,计算肾脏指数;检测血清和肾脏组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性;HE染色行肾脏组织病理学检查;Western blotting法检测肾脏衰老相关蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏指数降低 (P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05),MDA含量升高 (P<0.05);与模型组比较,RHL组小鼠肾脏指数升高 (P<0.05),血清和肾脏组织中SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05)。肾脏病理组织学检查,与衰老模型组小鼠比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中肾小管上皮细胞水肿减轻,且存在剂量依赖性。Western blotting法检测,与对照组比较,衰老模型组小鼠肾脏组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达水平降低(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平升高(P<0.05);与衰老模型组比较,低和高剂量RHL组小鼠肾脏组织中SIRT1蛋白表达水平升高(P<0.05),P16和P21蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论: RHL通过抑制氧化应激、肾小管上皮细胞水肿和调控衰老相关基因的表达来发挥对衰老小鼠肾脏的保护作用。