Wnt-5a、Wnt-11、CaMKⅡ在良性转归葡萄胎和恶性变葡萄胎中的表达及意义

目的探讨无翅型MMTV整合位点家族成员5a(Wnt-5a)、无翅型MMTV整合位点家族成员(Wnt-11)及Ca~(2+)/钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在良性转归及恶性变葡萄胎组织中的表达其临床意义。方法收集2009年3月至2020年3月本院72例葡萄胎患者首次清宫石蜡标本,其中28例为随访发生恶变的葡萄胎(恶变葡萄胎组),44例为随访未发生恶变的葡萄胎(良性转归葡萄胎组),采用免疫组织化学法(IHC)检测上述组织标本中Wnt-5a、Wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达情况;采用ROC曲线分析Wnt-5a、Wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达对葡萄胎恶变的预测效能。结果恶变葡萄胎组和良性转归葡萄胎组的Wnt-5a(75.00%vs 29.55%)、Wnt-11(82.14%vs 22.13%)及CaMKⅡ(89.29%vs 63.64%)蛋白阳性表达率比较,恶变葡萄胎组均显著高于良性转归葡萄胎组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归结果提示宫腔病变径线≥6 cm(OR=2.328,95%CI:1.518~3.569)、Wnt-5a阳性(OR=3.347,95%CI:1.586~7.062)、Wnt-11阳性(OR=3.873,95%CI:1.664~9.014)及CaMKⅡ阳性(OR=1.355,95%CI:1.057~1.738)是葡萄胎恶变的独立危险因素(P<0.05)。Wnt-11预测葡萄胎恶变的的AUC分别大于宫腔病变径线、CaMKⅡ预测的AUC(P<0.05),与Wnt-5a预测的AUC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论恶变葡萄胎首次清宫组织中Wnt-5a、Wnt-11及CaMKⅡ蛋白表达较良性转归葡萄胎异常升高,三者对葡萄胎恶变具有较好的预测价值。     

豚鼠爆震性聋CaM-PKⅡ活性的变化规律

目的探讨CaM-PKⅡ在爆震性聋病理过程中的可能作用。方法通过放射免疫进行研究。结果爆震后即刻豚鼠耳蜗基底膜CaM-PKⅡ的总活性较爆震前明显降低(P<0.01),Ca2 CaM非依赖活性占总活性的23.26%,较爆震前明显增高。爆震后20天CaM-PKⅡ的总活性稍有恢复,与爆震前相比,仍有显著差异(P<0.01),Ca2 /CaM非依赖活性占总活性百分比无明显差异(P>0.05)。爆震后40天与爆震后20天相比CaM-PKⅡ的总活性和Ca2 /CaM非依赖活性均无明显变化(均P>0.05)。结论CaM-PKⅡ可能参与爆震性聋的病理调节过程。     

食盐及钙对大鼠血压、血浆钙调素和红细胞膜ATP酶活性的影响

观察高、低钠和高、低钙摄入对大鼠血压、血浆钙调素(CaM)和红细胞膜ATP酶活性的影响。结果表明,高钠摄入8周可使大鼠血压显著升高,血清钠和24h尿钠明显高于对照组(P<0.01),血浆CaM水平亦明显升高。高钙摄入能降低血压,24h尿钙和血浆CaM水平明显升高(P<0.05),红细胞膜钙泵活性也提高;而低钙摄入则血压升高,24h尿钙降低(P<0.01)。     

hCaMKⅡNα对结肠肿瘤分泌免疫抑制因子的抑制作用

探讨钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制蛋白α（human calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ inhibitory alpha,hCaMKⅡNα）对结肠肿瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响及其作用机制。方法：将hCaMKⅡNα基因表达载体（pKⅡNα）或siRNA（si-KⅡNα）转染至结肠肿瘤细胞（LoVo细胞、SW620细胞和HT29细胞）,形成过表达或干扰表达细胞。RT-PCR检测结肠癌LoVo细胞过表达hCaMKⅡα后白细胞介素-8（interleukin-8, IL-8）、白细胞介素-10（interleukin-10, IL-10）和血管内皮生长因子（vascular endothelial cell growth factor, VEGF）mRNA表达水平,ELISA法检测转染pKⅡNα或si-KⅡNα对SW620和LoVo细胞中VEGF、PGE2、 IL-8和IL-10分泌的影响。为观测细胞外调节蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases,ERK1/2）在hCaMKⅡNα介导的细胞因子调控中的作用,利用U0126抑制HT-29细胞中ERK1/2活性后,检测hCaMKⅡNα表达下调对VEGF和IL-8分泌的影响。结果： hCaMKⅡ 可显著抑制结肠癌LoVo细胞中VEGF、IL-8和IL-10 mRNA水平的表达;可抑制SW620和LoVo细胞中IL-8和VEGF蛋白的分泌,但对PGE2和IL-10的分泌没有影响。相应地,利用RNA干扰技术下调hCaMKⅡNα表达可显著上调HT29细胞中IL-8和VEGF的分泌;并且发现MEK1/2活性的抑制可完全阻断hCaMKⅡNα对IL-8的影响,但只能部分阻断对VEGF的影响。结论：hCaMKⅡNα通过抑制ERK活性下调结肠肿瘤细胞VEGF和IL-8的分泌,在结肠肿瘤免疫逃逸中起到负相调控作用。     

蛋白磷酸酶1与Ca~(2+)/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在心肌病中研究进展

蛋白质的磷酸化与去磷酸化是细胞信号转导过程中最重要的调控方式,其循环过程就像调控分子的开关一样,参与众多生理活动。负责这一修饰调节的是蛋白激酶与蛋白磷酸酶。报道显示人类染色体编码多达500个蛋白激酶,这些蛋白激酶满足人类高度多样性与差异性调控蛋白磷酸化作用,而有趣的是人类编码的蛋白磷酸酶却仅仅约为150个,其中约有40个是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶。越来越多的证据表明蛋白磷酸酶/蛋白激酶调控异常在心肌病中起关键作用。蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)是一多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,研究显示PP1在心肌肥厚和心衰的发生发展过程中起重要作用。而Ca2+/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它作为Ca2+信号转导的关键因子,调节细胞的多种生物学功能,其功能异常可引起肥厚心肌胞内钙稳态失衡进而引起心律失常等心肌病。该文就PP1与CaMKⅡ的功能和心肌病的关系作一综述。     

PI3K—Akt信号而非CaMKIIγ参与CaMKIIδ敲除后的心肌肥厚反应

在2009年5月1日出版的《临床研究杂志》（J Clin Invest）刊载了一篇关于心力衰竭的研究论文,题为“CaMKII参与压力负荷诱导的小鼠从心肌肥厚到心力衰竭的发展过程”。我们对该论文进行了研读,并就文中解释心肌肥厚发生机制的不合理之处提出了自己的见解。撰写的Letter于2009年5月17日发表在《J Clin Invest》官方网站上。     

西罗莫司在肝移植术后钙调素类抑制剂相关肾损病人中的应用

目的 探讨西罗莫司对肝移植术后钙调素类免疫抑制剂相关肾功能损害病人的肾功能的改善作用及安全性.方法 对11例肝移植术后出现钙调素类免疫抑制剂相关肾损害病人进行西罗莫司转换治疗,同时减少或完全停止钙调素类免疫抑制剂的应用.观察转换治疗后病人的肾功能、肝功能、急性排斥反应的发生及药物副作用等情况.结果 随访至今所有病人均存活,随访时间6～23个月.转化治疗后所有病人的肾功能均有不同程度的改善,6个月后血肌酐从(163.8±47.9)μmol/L降为(108.1±26.6)μtmol/L(P<0.05);除1例病人出现转氨酶升高,加用钙调素类免疫抑制剂后恢复正常外,其余病人肝功能无明显变化;药物副作用有高脂血症、贫血、溃疡型口疮等.结论 西罗莫司可以安全地应用于肝移植术后钙调素类免疫抑制剂相关肾功能损害的病人,改善病人的肾功能,同时对移植肝功能无明显影响.     

杜氏盐藻cDNA文库的构建及KCBP基因的克隆

目的：构建杜氏盐藻cDNA文库并从该文库中筛选类驱动蛋白钙调素结合蛋白（KCBP）基因cDNA序列。方法：取对数生长期的杜氏盐藻细胞,提取总RNA并分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,连接到pAP3neo载体上,采用电转化法将重组质粒转化大肠杆菌DH10B。计算平板上单菌落数,测定文库的滴定度和重组率。运用PCR法筛选含有KCBP基因特异片段的质粒。结果：文库滴定度为5.6×106pfu/mL,重组率在90%左右,插入片段长度在0.4～6.0kb,平均长度为1.9kb。利用PCR法从该文库中筛选到了含有新基因KCBP特异片段的单菌落,经测序与cDNA末端快速扩增（RACE）-PCR获得的杜氏盐藻KCBP基因cDNA序列相符,此序列属于kine-sin-14家族。结论：成功构建杜氏盐藻cDNA文库,并从该文库筛选出一个kinesin样cDNA序列。     

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ及其抑制剂在细胞生长调控中的作用及机制

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca/CaMKⅡ)是钙/钙调节蛋白家族的一个主要成员,广泛分布于组织器官中,可通过调节G1/S期、G2/M期等有丝分裂节点调控细胞生长、增殖及分化的周期进程.近年来发现该分子活化可促进肿瘤发生和恶化,并与细胞耐药密切相关.CaMKⅡ抑制剂可通过抑制CaMKⅡ磷酸化,特异性抑制CaMKⅡ的活性,引起肿瘤细胞生长受抑或凋亡.对CaMK Ⅱ及其抑制剂的深入研究可有助于发现新的肿瘤靶向治疗途径.     

Effect of neuropeptide Y on calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ in rat cardiomyocytes

Objective To explore the effect of neuropeptide Y (NPY) on calcium/calmodulindependent protein kinase Ⅱ (CaMK Ⅱ ) in rat cardiomyocytes.Methods The cardiomyocytes from neonatal Sprague-Dawley (SD) rats were primarily cultured and divided into the control and NPY groups (n=6 each).The NPY group was added with 100 nmol/L NPY (final concentration), while the control group was left untreated.After 15 min, the activity of CaMK Ⅱ was detected by isotope 32P incorporation assay, and the expression of phospho - CaMK Ⅱ (p - CaMK Ⅱ ) protein by Western blotting.After 24 h, intranuclear concentration of Ca2+ in resting cardiomyocytes was recorded under laser scanning confocal microscope (LSCM).In addition, real-time PCR was used to detect the expressions of P-myosin heavy chain (β-MHC)mRNA and atrial natriuretic factor (ANF) mRNA in cardiomyocytes.Results After NPY stimulation for 15 min, the NPY group showed significantly elevated activity of CaMK Ⅱ (336 094.80±0 744.61 vs 273 301.50±±16 737..99, P＜0.05) and increased expression of p-CaMK Ⅱ protein in cardiomyocytes, compared with the control group.After 24 h, the NYP group showed a significant increase in intranuclear Ca2+ concentration compared wiith the control group (226.87±17.37 vs 84.04±6.50,P＜0.01).Moreover, real-time PCR also showed signficant increase in expressions of β- MHC and ANF mRNA.Conclusion The CaMK Ⅱ is activated with the increase of intranuclear Ca2+ concentration by NPY, which may play a major role in NYP-induced cardiomyocyte hypertrophy.