巴尔喀什蘑菇子实体漆酶纯化与理化特性及对酚类化合物的降解能力

【目的】研究巴尔喀什蘑菇子实体的生物学特性、漆酶理化性质及对酚类化合物的降解能力,为野生巴尔喀什蘑菇的栽培驯化以及栽培料高效利用提供理论依据。【方法】利用纤维素CM-cellulose阳离子交换和Q-Sepharose阴离子交换以及Superdex 75凝胶层析过滤纯化技术,纯化分析该漆酶的降解代谢底物与抗金属离子抑制能力,确定该漆酶活性最适温度与pH值。【结果】获得本漆酶为65 kDa的单亚基蛋白,总纯化倍数为354.58,比活力17.02 U/mg,该酶N端10个氨基酸的序列为SGGPEQNTTA,经过NBCI-BLAST后发现该漆酶与糙皮侧耳、杂色云芝等的漆酶具有同源性。本漆酶底物差异性较大,从强到弱主要为ABTS>二甲氧基酚>甲苯胺。最适pH值为2.2,属中低温活性;最适反应温度为40℃,为中低温活性漆酶。Cu²⁺对该漆酶催化ABTS有轻微促进作用,Hg²⁺对其催化ABTS有很强的抑制作用。【结论】巴尔喀什蘑菇子实体漆酶为65 kDa的单亚基蛋白,是一种中低温活性耐酸性漆酶,底物特异性为ABTS>二甲氧基酚>甲...     

漆酶活化木材产生活性氧类自由基的处理条件研究

自由基对漆酶活化木材产生胶合力起着关键性的作用。通过试验分析反应体系pH值、处理温度、酶用量、处理时间及树种等因子，对漆酶处理木粉产生的活性氧类自由基的相对浓度的影响。研究结果表明：5个因子均对活性氧类自由基相对浓度有极显著影响。当采用思茅松心材木粉、处理4h、反应体系pH值为4、酶用量为1．5u／g木粉、处理温度为60℃时，漆酶活化木材产生的活性氧类自由基的相对浓度最高。     

真菌漆酶酶促合成茶黄素工艺的研究

采用漆酶体外酶促氧化茶多酚合成茶黄素。研究结果表明,在实验反应体系中,酶促氧化的最佳条件为:反应温度50℃,最佳pH值2.3,漆酶质量浓度1.8g/L,反应时间1.5h。其中pH值和温度是反应体系中2个极其重要的影响因素。与传统合成方法相比,该方法可以缩短反应时间,提高茶黄素产量。     

优化培养条件对提高香菇漆酶产量的研究

对香菇发酵产漆酶条件进行了优化并研究了部分漆酶性质。结果发现静置培养优于振荡培养;pH值≥5.6时香菇菌体基本无法生长,香菇最适生长及产酶pH值为3.5;20℃低温有利于香菇漆酶生长,但最适产酶温度是25℃;Cu2 浓度为0.2~1.0 mmol/L时有利于香菇漆酶的合成,其中0.4 mmol/L是香菇产漆酶的最佳铜离子浓度,当铜离子终浓度超过5 mmol/L时,严重抑制香菇菌丝的生长;除了2,5-二甲基苯胺之外,阿魏酸、愈创木酚、没食子酸、黎芦醇等诱导剂促进香菇合成漆酶的作用不明显,反而会抑制菌丝生长;Tween-80的加入不利于漆酶合成。香菇漆酶在60℃条件下保温1 h后仍残余了2%的活力;以2,2′-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)为底物的最佳反应温度是65℃,最适反应pH值为2.2(柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液体系)。     

漆酶活化产生的活性氧类自由基与竹粉板性能的关系

为研究漆酶处理毛竹材制板过程中产生的活性氧类（ROS）自由基相对浓度对竹粉板性能的影响规律,该文以酶用量、反应体系pH值、处理时间、处理温度及Cu2+浓度作为酶处理因子,在不同的酶处理条件下对竹粉进行漆酶活化处理,并于每种处理条件下分别进行自由基相对浓度的检测和竹粉板制板试验。结果表明:①板材的内结合强度（IB）、静曲强度（MOR）、吸水厚度膨胀率（TS）等物理力学性能都与漆酶处理毛竹材产生的ROS自由基相对浓度关系密切。②ROS自由基相对浓度与板材的IB、MOR均呈对数函数关系,而与TS呈双曲线函数关系,其相关系数均在0.93以上。      

具有漆酶活性细菌的鉴定及芽孢漆酶对染料脱色的研究

[目的]为了研究具有漆酶活性的新菌株的生长特性及其芽孢漆酶对各种染料的脱色效果。[方法]利用经典的形态学、生理生化反应特性和现代分子生物学的方法,对具有漆酶活性的菌株进行鉴定,研究温度、p H、Na Cl和Cu2+对菌株生长的影响,并且研究菌株的芽孢漆酶对常用染料的脱色效果。[结果]该菌株为芽孢杆菌属的细菌,被命名为Bacillus sp.10`ZS。菌株10`ZS的最适生长p H为6.0,最适生长温度为35℃,能耐受浓度6%Na Cl和0.6 mmol/L Cu2+。菌株10`ZS的芽孢漆酶对结晶紫和活性亮蓝的脱色率分别为87.9%和78.5%。[结论]菌株10`ZS具有耐盐和耐铜的特性,能在碱性条件下生长,其芽孢漆酶对三苯甲烷类和蒽醌类染料的脱色率较高。     

漆酶的生产和应用研究进展

综述了漆酶的性质、发酵法生产、分离纯化及其在工业和生物技术领域的应用。指出了漆酶在理论研究、工业化生产和应用领域存在的问题及其发展前景。     

不同白腐真菌复配对底物碳和氮的利用规律的研究

通过单一白腐真菌和不同白腐真菌复配对底物碳、氮消耗的比较,得出随着碳、氮的消耗,无论是单一菌还是复合菌,酶活峰值均发生在对数消耗阶段;并且缓慢消耗阶段越长,产酶量越低;在产酶最高的青顶拟多孔菌的参与下,对底物碳氮的利用显著,同时提高产酶量,缩短达到酶活峰值所用时间;在不产酶菌株的参与下,延长对底物碳氮的吸收时间和达到酶活峰值所用时间,对产酶量的影响较小。     

碱液浸泡-蒸汽闪爆-漆酶介体处理制备棉秆皮纤维

为了实现棉秆的高效资源化利用,该文提出一种碱液浸泡-蒸汽闪爆-漆酶/介体联合处理棉秆皮制备纺织纤维的新方法。研究了浸泡NaOH用量对棉秆皮分离效果的影响以及漆酶/介体处理介体种类及用量、漆酶用量对木质素去除的影响。采用扫描电子显微镜、X射线衍射、热稳定性分析等方法,对比研究了蒸汽闪爆、漆酶/介体处理后棉秆皮纤维的化学成分、结构与性能。研究结果表明,碱液浸泡-蒸汽闪爆-漆酶/介体处理（NaOH用量10 g/L,介体ABTS用量为棉秆皮纤维干质量的1%,漆酶用量为600 U/g）能制得表面洁净、热稳定性好的棉秆皮纤维,其长度为55.7 mm,细度为28 dtex,长径比为1 139,断裂强度为2.97 cN/dtex,纤维素质量分数为78%,结晶指数为67.5,得率为40%,可用于纺织,研究结果为木质纤维素纤维的制备提供参考。     

白腐菌(Trametes pubescens MB89)漆酶的培养与纯化

【目的】通过培养白腐菌Trametes pubescens提取胞外漆酶。【方法】以白腐菌T.pubescensMB89为漆酶培养菌,在25℃120 r/min条件下用基础GP液体培养基(300 mL培养基中含40 g/L丙三醇、15 g/L蛋白胨和1 g/LMgSO4.7 H2O)进行胞外漆酶的震荡培养,培养10 d后,添加CuSO4.5 H2O使培养基中Cu2+的最终浓度达1 mmol/L。定时测定漆酶活力,于漆酶活力开始下降时终止培养。将菌体破碎、离心后,用DEAE-Ssepharose对获得的漆酶进行分离和纯化。【结果】在以葡萄糖为碳源的培养基中添加一定浓度的Cu2+,可促进菌体的生长和漆酶活力的增加。培养前10 d,漆酶活力增加缓慢,培养10 d后添加CuSO4.5 H2O,漆酶活力快速增加,并于培养的第19天达到最大,为51.70 U/mL。用超滤方法分离纯化漆酶,可使漆酶纯度达53%。【结论】T.pubescensMB89可作为生产漆酶的菌种,在漆酶培养过程中,Cu2+对漆酶活力的增加有促进作用。