马铃薯卷叶病毒PLRV RT-LAMP检测方法优化

马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法。采取单因素变化试验,对RT-LAMP反应体系中多个因素包括引物组合、温度条件及Mg~(2+)、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶、dNTPs、UNG、SYBR GreenⅠ和引物组合的浓度进行一系列试验和优化。采用RT-PCR检测方法进行平行比对试验,对优化后的RT-LAMP反应体系进行了验证。结果表明,最佳引物组合为P3,最适反应温度62℃,25μL反应体系中,Mg~(2+)、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶和UNG的最佳终浓度分别为4 mmol/L、0 mmol/L、0.64 U/μL和0.08 U/μL,dNTPs的最佳用量为1μL(dATP、dGTP、dCTP各0.4 mmol/L,dUTP 1.2 mmol/L),SYBR GreenⅠ(20×)的最佳用量1μL,primer mix的最佳用量2.5μL(PLRV-FIP/BIP、PLRV-F3/B3和PLRV-LF/LB的浓度分别为0.8、0.2μmol/L和0.6μmol/L),RNA模板1μL(2 ng/μL),加DEPC-H_2O至25μL,反应时间50 min。优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR一致,且可视化判读结果。因此,建立的PLRV RT-LAMP检测方法为进一步开发RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用奠定了基础。     

苎麻属植物RAPD反应体系影响因子的研究

以苎麻属植物中的4个种为材料，用SDS和CTAB2种方法提取基因组DNA并比较其RAPD分析的效果；对RAPD反应体系中的一些重要参数进行了优化，建立了适合苎麻属植物RAPD分析的反应体系。即在25μL的反应总体积中Mg^2 浓度为1.5mmol/L，dNTPs浓度为0.20mmol/L，40ng模板DNA，Taq酶1.0单位；反应程序为95℃预变性5min；前5个循环为94℃变性1min，36℃结合1min，72℃延伸2min；后40个循环为94℃30s，℃36℃1min，72℃2min（最后1个循环为10min）；共45个循环。该反应体系具有良好的稳定性和重复性。     

葡萄糖-赖氨酸美拉德产物分级组分对香蕉酶促褐变的抑制

酶促褐变是香蕉加工中拟解决的关键问题,非硫安全高效抑制剂的筛选是目前的研究热点。美拉德产物（Maillard reaction products,简称MRPs）展示了其良好的抑制酶促褐变的能力,然而美拉德产物分级组分的相关研究尚未见报道。通过透析处理得到大于和小于3 500 u的分级组分,比较其抑制香蕉酶促褐变的相关能力,并对抑制机理进行研究。结果显示：3种MRPs中,MW>3 500 u的MRPs具有较好的还原力,MW<3 500 u的MRPs具有较好的DPPH·清除率、螯合铜离子能力以及抑制多酚氧化酶酶活的能力。MW<3 500 u的MRPs对游离酶抑制常数（KI）和对酶-底物络合物的抑制常数（KIS）分别为0.198 mmol/L和1.508 mmol/L,抑制类型属于混合型抑制。     

响应曲面法优化美拉德反应以制备蘑菇酪氨酸酶活性抑制组分

MRPs作为天然抗褐变剂,可抑制引起果蔬酶促褐变的酪氨酸酶的酶活。为进一步优化美拉德反应以制备酪氨酸酶活性抑制组分,本研究采用响应面法对MRPs制备工艺进行研究。在单因素实验基础上,确定美拉德反应初始pH、反应温度、反应时间、底物浓度比(糖∶氨基酸)4个因素,设计4因素5水平的二次回归中心组合试验。经响应面法分析,为方便实际操作,确定最佳工艺条件为:初始pH为2.94,反应时间为1.9 h,反应温度为110.09℃,底物浓度比(糖∶氨基酸)为0.57。经实验验证,得出结果与理论值相对误差较小,故采用二次回归中心组合设计得到的最优MRPs制备条件参数准确可靠。     

基于电磁阀的喷嘴直接注入式农药喷洒系统

设计了一种喷嘴直接注入式农药喷洒系统。通过与传统喷雾机械比较,简述了喷嘴直接注入式喷雾系统的结构和喷雾执行单元。为了实现农药定量注入,设计一种基于电磁原理的快速响应阀,并论述其工作原理和闭环控制方式。通过试验测试了喷雾执行单元的喷雾特性和喷杆组内各喷雾单元的一致性。结果表明在一定喷洒速率范围内,喷雾执行单元的喷水量和水压强存在多项式关系,农药注入量和PWM信号的高电平时间存在指数关系,其决定系数均高于0.9,并且同一喷杆组内6个喷雾单元的喷雾效果大体一致。     

广西根结线虫病害的病原鉴定

从广西不同地区采集的28种植物根结线虫病的病原,按病原线虫的主要形态学特征和寄主反应的鉴定方法,对每种病原进行了分类鉴定。其中穗状鸡冠花、胡椒、蕹菜、胡萝卜,芭蕉芋、鸡蛋果、莞荽(香菜)、苋苯、荷包豆、吉庆果、黄麻、黄穗鸡冠等根结线虫病的病原都是属南方根结线虫1号小种;风仙花、辣椒、蕹菜、番茄、独头鸡冠花、红穗鸡冠、罗汉果、黄麻、芹菜根结线虫有一种是南方根结线虫1号小种,另一种是爪哇根结线虫;甜叶菊、姜根结线虫病的病原有一种是南方根结线虫1号小种,另一种是花生根结线虫1号小种;吉庆果、四季海棠、茄、棕竹、柳树的根结线虫病的病原是爪哇根结线虫;罗汉果、丝瓜、红麻根结线虫病的病原有一种是爪哇根结线虫,另一种是花生根结线虫1号小种;花生根结线虫病的病原是花生根结线虫1号小种。发现二个新种:即水稻根结线虫病的病原是林氏根结线虫;柑桔根结线虫病的病原是孔氏根结线虫。     

玉米组蛋白H_3和H_4基因的克隆

本文以λEMBL3为克隆栽体,构建了玉米(Zea mays)基因组文库,通过人工合成的探针进行原位杂交和斑点杂交,从文库中筛选到4个含有组蛋白H_3基因的阳性克隆。另外,通过多聚酶链式反应(PCR),从玉米核DNA中扩增了组蛋白H_4基因。这些基因可以在转基因植物研究中作为辅助序列提高外源基因的整合频率。     

红壤坡地雨水产流及其土壤流失的垫面反应

通过4年(1998～2001年)径流场定位观测研究,探明了不同植被垫面雨水产流过程中系统水土流失有显著性差异。水流失量为农作区>常绿灌木区、针叶林区>常绿果园区>退化区、恢复区。坡地不同垫面间雨水地表径流的差异存在,为坡地雨水利用和利用坡地集雨支持农田灌溉提供了依据和可调控性。土壤流失量受人为干预、耕作强度的影响很大,坡地从自然保护到作物栽培,系统的土壤流失量提高20倍。茶果林地的土壤流失低于作物耕种的2～3倍,而高于自然利用和自然保护的6～12倍。养分流失在数量和质量上皆取决于垫面构成。提出了利用坡地集雨优势,构建与单元生态系统水循环平衡相适应的坡地农林复合生态系统,并通过水平衡生态建设来维系生态系统的水分平衡。     

IAA和乙烯与NR基因的表达及相关的生长生理反应

试验以番茄为材料,通过IAA和乙烯对番茄黄化幼苗“三重反应”、植物细胞膜透性、呼吸作用、气孔导度、蒸腾作用和细胞间CO2浓度和NR基因表达的影响,探讨了激素对乙烯信号转导的影响。结果表明：当没有外源乙烯处理时,IAA抑制了乙烯的产生,使NR等受体蛋白基因处于不活跃状态;因而表现出叶片维持稳定的细胞膜透性;植株叶片蒸腾作用、呼吸作用和气孔导度都降低(IAA处理2h后)。在有外源乙烯处理时,乙烯与IAA诱导植株产生的内源乙烯足以诱导乙烯受体蛋白基因NR基因的大量表达,并反过来抑制了乙烯的合成;因而植株代谢表现出与乙烯相拮抗的作用,如高浓度的IAA处理(≥4mg／L)、使番茄黄化幼苗下胚轴迅速伸长,抵消乙烯对幼苗下胚轴生长的抑制作用;IAA押制乙烯引起的植株叶片蒸腾作用、呼吸作用和气孔导度的增高和促进叶片细胞膜透性的增加。因此,NR基因是负调节子。     

杨树树皮挥发物的超临界萃取及对青杨脊虎天牛行为的影响

通过正交试验研究以收率为指标的CO2超临界萃取小叶杨树皮挥发物的最佳萃取工艺条件.结果表明:萃取压力25 MPa、温度50℃、时间60 min为小叶杨树皮挥发物的最佳萃取条件,收率为3.56%;依此条件分别萃取白城二号杨、小黑杨、俄罗斯杨、中东杨、小青杨、小青×黑杨、大青杨、斯大林杨、银中杨和小叶杨的树皮挥发物.采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对挥发物的化学组成及相对含量进行测定.结果表明:挥发性物质主要包括醛类、酯类、酸类、烃类等化合物,其中以酸类物质含量最高,其他物质含量均较低;萘、醌、奠、酮等大分子物质含量较少;中东杨和斯大林杨树皮中特异化合物种类较多.同时利用"Y"形嗅觉仪测定青杨脊虎天牛对10种杨树树皮100 μL挥发物的行为反应.结果表明,雄成虫对小青杨的选择率54.17%,为最高;雌成虫对小青x黑杨的最大选择率为58.33%,其次是对小青杨和中东杨的选择率54.17%.雄成虫对10种杨树树皮CO_2超临界萃取液的选择率差异不显著(P＞0.05),而雌成虫呈显著差异(P＜0.05).