长链非编码 RNA母系表达基因 3、微小 RNA-21表达与冠状动脉钙化的相关性分析

目的探究长链非编码 RNA母系表达基因 3(LncRNA MEG3)、微小 RNA-21(miR-21)与冠状动脉钙化的相关性。方法选取 2018年 6月至 2019年 6月在邯郸市中心医院行冠状动脉造影及 CT检查确诊为冠状动脉钙化病人 189例作为钙化组,另选取同期在该院行冠状动脉造影及 CT检查显示无冠状动脉钙化者 183例作为未钙化组。采用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测血清 LncRNA MEG3、miR-21表达水平,采用 Pearson法分析病人血清 LncRNA MEG3、miR-21水平及与糖化血红蛋白(HbA1c)、高敏 C反应蛋白( hs-CRP)、肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)、白细胞介素 -1β(IL-1β)水平相关性,采用 logistic回归模型分析冠状动脉钙化发生的影响因素,采用 ROC曲线评估血清 LncRNA MEG3、miR-21表达水平对冠状动脉钙化的预测价值。结     

老年重症肺炎病人血清微小 RNA-146a、微小 RNA-223、微小 RNA-21、微小 RNA-124水平及其与预后的关系

目的探究老年重症肺炎病人血清微小 RNA(miR)-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及其与预后的关系。方法选取 2018年 2月至 2020年 3月郑州大学第二附属医院诊治的 128例老年重症肺炎病人、 130例普通肺炎病人分别为重症肺炎组、普通肺炎组,并纳入同期 128例体检健康者为健康组。比较三组血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平;分析老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平与 TNF-α的相关性;比较不同预后老年重症肺炎病人临床资料和血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124水平;分析老年重症肺炎病人死亡的影响因素;分析血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α对老年重症肺炎病人预后的预测价值。结果普通肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 1.67±0.56、1.64±0.55、1.71±0.57、(12.78±4.30)ng/L,重症肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 2.32±0.78、2.27±0.76、2.39±0.80、(23.64±7.92)ng/L,高于健康组的 1.03±0.35、1.01±0.34、0.99±0.33、(5.43±1.84)ng/L、(P<0.05)普通肺炎组、重症肺炎组血清 miR-124表达水平分别为 0.71±0.24、0.37±0.13,低于健康组的 1.07±0.37(P<0.05);重症肺炎人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水组病,平高于普通肺炎组( P<0.05)血清 miR-124表达水平低于普通肺炎组( P<0.05);老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、 miR-21表达水平与 TNF-α呈正,相关( P<0.05)血清 miR-124表达水平与 TNF-α呈负相关( P<0.05);死亡组老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α水平及有,呼吸系统疾病史、吸烟史、机械通气占比高于生存组( P<0.05),血清 miR-124表达水平、氧分压水平低于生存组( P<0.05); miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α、机械通气是老年重症肺炎病人死亡的危险因素( P<0.05);血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α预测老年重症肺炎病人预后的曲线下面积( AUC)分别为 0.84、0.88、0.82、0.66、0.68,其灵敏度分别为 72.5%、80.4%、82.4%、60.8%、60.8%,特异度分别为 85.7%、81.8%、79.2%、67.5%、72.4%。结论老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平较高,与 TNF-α水平呈正相关; miR-124表达水平较低,与 TNF-α水平呈负相关。且测定血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平有助于临床预测老年重症肺炎病人的预后情况。     

微小 RNA-454、微小 RNA-132、液泡膜 -ATP酶表达与结肠癌临床病理特征关联性分析

目的探讨组织微小 RNA(miR)-454、miR-132、液泡膜 -ATP酶( V-ATPase)表达与结肠癌病人临床病理特征关联性。方法选取 2011年 9月至 2014年 11月新乡医学院第一附属医院行手术切除的 96例结肠癌组织标本、 96例癌旁正常结肠组织标本、 82例良性结肠病变标本为研究对象。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)测定标本中 miR-454、miR-132、 V-ATPase mRNA表达,分析 miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达与结肠癌病人一般资料、临床病理参数的关系,随访 5年,统计 miR-454、miR-132、V-ATPase高表达、低表达病人 3年、 5年生存率。结果结肠癌组织标本中 miR-454表达 69.86±7.29与 V-ATPase mRNA表达 5.42±0.41高于良性结肠病变组织 10.74±2.03、2.79±0.38、癌旁正常结肠组织标本 1.28±0.74、1.96±0.32, miR-132水平表达 1.46±0.25低于良性结肠病变组织 3.68±0.73、癌旁正常结肠组织标本 4.59±1.24(P<0.05);中低分化、 Ducks分期 C~D期、有淋巴结转移结肠癌病人 miR-454与 V-ATPase mRNA表达高于高分化、 Ducks分期为 A~B期、无淋巴结转移病人, miR-132表达低于高分化、 Ducks分期为 A~B期、无淋巴结转移病人( P<0.05); miR-454、V-ATPase mRNA表达与组织分化程度呈显著负相关,与 Ducks分期、淋巴结转移呈显著正相关, miR-132表达与组织分化程度呈显著正相关,与 Ducks分期、淋巴结转移呈显著负相关( P<0.05); miR-454、V-ATPase mRNA高表达病人 3年( 9.23%、33.85%)、 5年生存率( 44.00%、28.00%)低于低表达( 70.97%、61.29%)、(69.57%、55.10%)病人, miR-132高表达病人 3年、 5年生存率( 70.59%、58.82%)高于低表达病人(48.39%、33.87%)(P<0.05)。结论 miR-454、V-ATPase mRNA表达与组织分化程度呈显著负相关,与 Ducks分期、淋巴结转移呈显著正相关, miR-132表达与组织分化程度呈显著正相关,与 Ducks分期、淋巴结转移呈显著负相关,可为结肠癌恶性化生物学行为特征、病理级别、预后判断提供客观依据。     

MicroRNA-590在急性心肌梗死诊断及预后评估中的价值

目的 研究microRNA-590(miR-590)在急性心肌梗死(AMI)诊断及预后评估中的价值.方法 选择2018年5月至2019年10月安徽省第二人民医院心内科收治的患者162例,根据临床诊断及冠状动脉造影结果,分为对照组(HC组,n=40)、稳定型心绞痛(SAP)组(n=50)和AMI组(n=72),收集临床资...     

Effect of YM218, a nonpeptide vasopressin V(1A) receptor-selective antagonist, on rat mesangial cell hyperplasia and hypertrophy

Mesangial cell growth constitutes a key feature of progressive glomerular injury. Vasopressin (AVP), a potent peptide vasoconstrictor, acts on mesangial cells through the V(1A) receptors, inducing contraction and cell proliferation. This study examined the effects of YM218, a nonpeptide AVP V(1A) receptor-selective antagonist, on the mitogenic and hypertrophic effects of AVP in rat mesangial cells. When added to mesangial cells whose growth was arrested, AVP concentration-dependently induced hyperplasia and hypertrophy. YM218 potently prevented AVP-induced hyperplasia and hypertrophy of these cells. Furthermore, AVP stimulated endothelin (ET)-1 secretion from mesangial cells in a concentration-dependent manner and this effect was potently inhibited by YM218. ET-1 also induced hyperplasia and hypertrophy in mesangial cells and this effect was completely abolished by ET(A) receptor-selective antagonist YM598. In addition, AVP-induced hyperplasia and hypertrophy were partly inhibited by YM598. These results suggest that AVP may modulate mesangial cell growth not only by its direct action but also through the stimulation of ET-1 secretion. YM218 displays high potency in inhibiting the AVP-induced physiologic responses of mesangial cells via the V(1A) receptors and is a potent pharmacologic probe for investigating the physiologic and pathophysiologic roles of AVP in several renal diseases.     

miR-25对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡的作用

目的:探讨微小RNA-25(miR-25)在缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡过程中的作用及机制。方法:构建miR-25高表达H9c2细胞系,行缺氧/复氧损伤处理,real-time PCR检测miR-25及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA的表达,Western blot检测HMGB1及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化,明确miR-25的高表达对缺氧/复氧所诱导的H9c2细胞凋亡及HMGB1表达的影响。然后通过双萤光素酶报告基因验证miR-25与HMGB1的靶向关系,并构建转染HMGB1 shRNA的H9c2稳定细胞系,行缺氧/复氧损伤处理,验证HMGB1是否参与缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡的调控。结果:与对照组相比,高表达miR-25组的H9c2细胞在缺氧/复氧诱导后HMGB1表达下调,Bcl-2表达上调,cleaved caspase-3蛋白水平下调,流式细胞术提示处于S期的细胞增多,G1期减少(P0.01)。双萤光素报告基因显示,转染miR-25 mimic+野生型HMGB1-3’UTR报告基因载体组萤光素酶活性明显下降;转染miR-25 inhibitor+野生型HMGB1-3’UTR和转染miR-25 mimic+突变型HMGB1-3’UTR报告基因载体组萤光素酶活性没有变化。转染HMGB1-shRNA的H9c2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,凋亡蛋白cleaved caspase-3蛋白水平下调,流式细胞术分析提示细胞凋亡减少,处于S期的细胞增多,G1期减少(P0.05)。结论:miR-25减少缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡,期作用机制可能与靶向调控HMGB1表达有关。     

MicroRNA-141靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响

目的:探讨微小RNA-141(miRNA-141)靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响。方法:乳腺癌T47D细胞分别转染miRNA-141模拟物(mimic)和阴性对照序列(NC),作为miRNA-141组和NC组,并设立未转染空白对照组,采用real-time PCR法检测细胞中miRNA-141的含量;MTT法与荧光探针2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法分别检测细胞活力和活性氧簇(ROS)水平;Western blot法检测胞质接头蛋白Keap1、核因子E2相关因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化酶1(GPx1)的表达;双萤光素酶实验检测miRNA-141与Keap1的关系。结果:转染miRNA-141 mimic后,miRNA-141组的miRNA-141表达量明显增高,细胞活力、ROS水平和Keap1蛋白表达均下降,而细胞核Nrf2蛋白SOD2和GPx1表达升高(P0.05);双萤光素酶实验结果显示Keap1为miRNA-141的靶基因。结论:miRNA-141可能通过靶向负调控Keap1激活Nrf2/ARE信号通路,诱导抗氧化酶的表达,以降低细胞氧化应激水平,从而抑制乳腺癌细胞的活力。     

miR-24对肺癌A549细胞化疗敏感性的影响

目的:探究微小RNA(miR)-24对肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及可能的作用机制。方法:Real-time PCR实验检测肺腺癌细胞系A549及肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达情况。转染miR-24抑制序列(miR-24 inhibitor)下调A549/DDP细胞中的miR-24后,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、细胞色素C(Cyt C)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和P53的蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-24可能的靶基因。结果:耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达水平明显高于A549细胞(P0.05)。miR-24 inhibitor可诱导肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的凋亡,增加细胞对顺铂的敏感性;此外还可下调Bcl-2/Bax比值,同时上调P53、p-ERK、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及Cyt C的蛋白水平。而应用ERK特异性抑制剂U0126可部分恢复miR-24 inhibitor转染的细胞活力。生物信息学分析显示p53是miR-24的可能作用靶点基因,在A549/DDP细胞中共转染miR-24 inhibitor和P53 siRNA可部分逆转miR-24 inhibitor对细胞活力的影响。结论:下调肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达可增加细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与靶向p53基因同时激活ERK/P53信号通路后促进细胞经线粒体途径的凋亡有关。     

miR-7敲减CD4~+ T细胞过继转输对小鼠急性肝损伤模型的影响

目的:观察过继转输微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(knockdown,KD)CD4~+ T细胞对小鼠急性肝损伤模型的影响,并探讨其意义。方法:利用磁珠分选技术分别获得正常野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠脾脏中CD4~+ CD62L~+ T细胞;CFSE染色标记后,按每只小鼠2×10~6个细胞,经尾部静脉注射给同系WT小鼠,并利用伴刀豆球蛋白A建立急性肝损伤模型;观察过继转输后2组小鼠肝脏的形态、重量及其重量指数的变化;HE染色观察小鼠肝脏组织的病理学变化;real-time PCR检测小鼠肝脏组织中凋亡相关分子Bax和P53的表达;流式细胞术检测小鼠肝脏组织中CFSE标记的CD4~+ T细胞活化相关膜分子CD62L表达水平以及细胞因子白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的表达变化。结果:与对照组相比,过继转输miR-7KD小鼠CD4~+ CD62L~+ T细胞组(miR-7KD转输组)小鼠的肝脏重量明显减轻(P0.01),但重量指数显著增加(P0.05);HE染色显示miR-7KD转输组的肝脏细胞损伤增加;real-time PCR结果显示miR-7KD转输组肝脏组织中凋亡相关细胞分子Bax和P53的相对表达水平均明显升高(P0.05);流式细胞术检测结果进一步显示肝脏组织中的CFSE~+细胞活化相关分子CD62L的表达水平明显降低(P0.01),细胞因子IFN-γ的表达水平明显增加(P0.05),而IL-4的表达水平显著降低(P0.01)。结论:过继转输miR-7敲减CD4~+ T细胞可显著加重急性肝损伤模型小鼠的肝组织损伤。这为后续深入探讨急性肝损伤的发生机制提供了重要的实验基础。     

长链非编码RNA PVT1调控miR-551通过Wnt信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及机制。方法:q PCR检测卵巢癌和正常卵巢组织及不同卵巢癌细胞中PVT1的表达情况;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的变化;双萤光素酶报告基因检测PVT1与微小RNA(miR)-551的相互作用;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后miR-551-inhibitor对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测沉默PVT1后Wnt信号通路相关蛋白的表达情况。裸鼠皮下成瘤实验检测沉默PVT1对卵巢癌成瘤重量及体积的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢瘤组织中PVT1表达明显增高(P0.05);卵巢癌细胞株ES-2中PVT1表达水平最高(P0.05);沉默PVT1可以抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;PVT1能与miR-551的位点特异性结合;沉默PVT1后,miR-551-inhibitor可以促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;沉默PVT1后Wnt信号通路蛋白的表达相应下调;与阴性对照组相比,PVT1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小(P0.05)。结论:PVT1在卵巢癌发生发展过程中起重要作用,它可以靶向调节miR-551,通过Wnt信号通路调控卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。