mRNA差异显示PCR技术在妇科肿瘤研究中应用

mRNA差异显示技术(differential display-PCR,DD-PCR)是在转录水平上研究基因表达差异的有效方法,可以比较多种样本间不同表达的基因.因该方法简便、敏感、可重复性强等特点,已成为研究肿瘤分子生物学基础的良好工具.综述DD-PCR技术在妇科肿瘤发生发展、耐药及转移机制研究中的应用.     

PCBP1:一种在多水平上参与基因表达调控的蛋白因子

多聚胞嘧啶结合蛋白1 (poly C binding protein-1,PCBP1),属于RNA结合蛋白亚家族,因其具有同RNA的多聚胞嘧啶(poly C)区域特异的结合活性而得名.目前该亚家族共有5个成员:hnRNP K(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K)、PCBP1、PCBP2、PCBP3和PCBP4.PCBP1蛋白在多个水平参与基因的表达调控,如转录、mRNA加工、mRNA的转运、mRNA稳定以及翻译水平调控等.本文对PCBP1基因的结构和生物学功能进行了综述.     

新兴细胞生物学技术-组织微阵列研究进展

肿瘤相关基因的研究在肿瘤病理学中占有重要的地位，新兴的细胞生物技术-组织微阵列，具有批量性、快速性、准确性等特点，为肿瘤相关基因的研究提供了一种全新的方法。从组织微阵列技术的原理、主要优势、应用、研究进展、存在的问题和展望等方面作一综述。     

转化生长因子β对人颈椎关节突关节软骨细胞基质金属蛋白酶13基因表达的调节作用及意义

目的 探讨转化生长因子β（TGF-β）对人的颈椎关节突关节透明软骨细胞基质金属蛋白酶13（MMP-13）基因表达的作用，旨在阐明颈椎退行性变的相关发生机理。方法 应用逆转录方法PCR及实时荧光定量方法，检测不同浓度TGF-β作用传代培养人的透明软骨细胞MMP-13mRNA的含量。另外3种不同浓度分别与10ng／ml IL-1β组成联合作用组，共计6个实验组及1个正常对照组。结果 正常对照组中透明软骨细胞仅见MMP-13mRNA扩增产物，实验组TGF-β1、10和100ng／ml作用12h后，MMP-13mRNA表达逐渐增强；而联合作用组中，随着TGF-β1浓度的升高，MMP-13mRNA表达逐渐降低，并且各组之间存在明显的差异（P〈0．05）。结论 TGF-β可按剂量依赖方式调节颈椎关节突关节软骨细胞MMP-13mRNA的表达。     

基因芯片技术与卵巢肿瘤

由人类基因组计划实施带动分子生物学进步而发展起来的基因芯片技术是一种具有划时代意义的新的基因分析方法。肿瘤是一种进行性的多基因紊乱疾病，基因芯片技术在肿瘤细胞基因表达模式及肿瘤相关基因的发掘中具有极其重要的作用，该技术可为卵巢肿瘤的研究提供强大的技术支持。     

短发卡RNA对人胃癌细胞STAT3基因的沉默作用

目的:探讨STAT3基因小发夹RNA（shRNA）表达质粒对胃癌MKN-45细胞STAT3基因的干扰作用。方法:根据STAT3 mRNA 编码序列，设计RNA干扰靶点，构建STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒（psiRNA-H1/STAT3），使用脂质体转染人胃癌细胞系（MKN-45细胞）。实验分为对照（A）组，psiRNA-H1转染（B）组和psiRNA-H1/STAT3转染（C）组。通过RT-PCR和Western Blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响。结果:psiRNA-H1/STAT3经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确，并经测序证实。将其成功转染MKN-45细胞后，该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。 结论:将成功构建的针对STAT3基因的shRNA表达载体转染MKN-45细胞，能有效抑制该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达，为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据。     

胞嘧啶脱氨酶基因修饰神经干细胞及其表达的离体实验研究

目的 探讨胞嘧啶脱氨酶(cytimidine deaminase，CD)基因修饰神经干细胞及其基因表达。方法 通过构建真核表达质粒pCMVCD，限制性内切酶消化鉴定后，采用Lipofectamine 2000脂质体介导法转染新生大鼠室管膜下区神经干细胞(Neural stem cells，NSCs)，G418筛选阳性克隆，加入不同浓度的5-氟胞嘧啶(5-Flourocytosine，5-FC)，MTT比色法测定NSCs的生存率。结果 本实验成功地培养并鉴定了神经干细胞，并将CD基因成功地转染了神经干细胞，G418阳性NSCs对低浓度5-FC高度敏感。结论 CD基因修饰神经干细胞的离体实验研究为干细胞治疗研究提供依据。     

sFGFR1基因的克隆与在RTS系统中的高效表达

目的：克隆sFGFRl(soluble fibroblast growth factors receptor-1)基因，并在RTS(rapid translation system)系统中高效表达相应蛋白．方法：培养Swiss rat 3T3 fibroblast细胞株，提取总RNA，用RT—PCR方法获取鼠sFGFR1 cDNA片段，酶切后克隆到pIVEX2．3d载体并进行序列分析；采用Roche RTS ProteinMaster500系统，高效表达sFGFR1蛋白并用Western Blot鉴定表达的蛋白．结果：克隆了sFGFR1基因，测序证实序列正确；Western Blot证实sFGFR1蛋白在RTS系统中高效表达．结论：克隆了sFGFR1基因并在RTS系统获得高效表达．     

肿瘤坏死因子凋亡相关配体基因的克隆和表达

目的：克隆、表达和鉴定肿瘤坏死因子凋亡相关配体(TRAIL)．方法：从培养的人外周血淋巴细胞中提取总RNA，经RT-PCR获得TRAIL基因．将该基因克隆到pGEM-Teasy载体中，测序鉴定．将TRAIL基因插入pBV220表达载体中，42℃诱导表达4～5h，进行SDS-PAGE分析．免疫印迹法鉴定TRAIL蛋白的表达．结果：DNA测序证明，获得了TRAIL基因，其序列与GenBank中报道序列完全一致．SDSPAGE分析表明，TRAIL蛋白获得高效表达，分子质量为17ku，表达量约占菌体总蛋白的300k，．免疫印迹法鉴定显示，该蛋白可与鼠抗人TRAIL mAb产生阳性反应．结论：成功克隆和表达了TRAIL基因．     

肿瘤-睾丸抗原基因在肾透明细胞癌中的表达

目的 研究6种肿瘤.睾丸抗原(CT)基因在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测42例肾透明细胞癌患者癌组织(新鲜标本,T1期16例,12期12例,T3期10例,T4期4例;G1 10例,G2 18例,G3 14例)及其中14例患者癌旁组织的cTAGE-1、cTAGE-2、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A12及NY-ESO-1基因mRNA的表达.结果 42例肾透明细胞癌组织中100%(42/42)至少表达6种CT基因中一种,14例癌旁组织表达均阴性.肾透明细胞癌组织中MAGE-A12表达最高,其次为MAGE-A3,MAGE-A1,cTAGE-1,cTAGE-2及NY-ESO-1,分别为71%(30/42),69%(29/42),67%(28/42),64%(27/42),60%(25/42)及48%(20/42).肿瘤不同分期、不同分级之间6种CT基因表达的差异均无统计学意义(Pearson x2检验法,P＞0.05).结论 CT基因在肾透明细胞癌中有较高表达,可望成为肾透明细胞癌特异性免疫治疗的靶基因.