High-level amikacin resistance in Pseudomonas aeruginosa associated with a 3'-phosphotransferase with high affinity for amikacin

This work describes the characterization of the phosphotransferase enzymatic activity responsible for amikacin resistance in two clinical Pseudomona aeruginosa strains, isolated from a hospital that used amikacin as first-line aminoglycoside. Amikacin-resistant P. aeruginosa PA40 and PA43 (MIC: 128 mg/l) were shown to have APH activity with a substrate profile similar to that of APH(3′)-VI. The enzyme from P. aeruginosa PA40 was purified to >70% homogeneity. The K_m of amikacin for this enzyme was 1.4 μM, the V_max/K_m ratio for amikacin was higher than for the other aminoglycosides tested and PCR and DNA sequencing ruled out the presence of aph(3′)-IIps. Amikacin resistance in this strain was, therefore, associated with APH(3′)-VI and the high affinity of this enzyme for amikacin could explain the high-level resistance that we observed.     

贯叶金丝桃活性成分及其分离纯化与检测方法的研究进展

综述近年来对中药贯叶金丝桃的活性成分金丝桃素、贯叶金丝桃素、金丝桃苷等的药理活性以及这些成分的分离纯化技术和检测方法的研究情况，为高纯度贯叶金丝桃活性成分的制备及相关药物的进一步开发提供参考。     

Purification of monoclonal antibody 3H11 against gastric cancer for in vivo use

Monoclonal antibody (McAb) 3H11 against gastric cancer was grown in the mouse ascites system. To acquire a clinical grade product for cancer radioimmuno-imaging was purified by two step high performance liquid chromatography (HPLC) protocol using protein A and high-performance hydroxylapatite (HPHT). An analysis of data reported shows the two step HPLC method to be the best purification procedure. This protocol satisfies purity and immunoreactivity requirement, and provides an sample sterility, free-pyrogens, free-mycoplasma and non-specific IgG contamination. This procedure described was capable of generating large amounts of clinical grade monoclonal antibody.     

连续性血液净化治疗心脏术后继发急性肾功能衰竭的护理

目的总结连续性血液净化治疗心脏术后继发急性肾衰竭的护理技术。方法回顾分析我中心16例体外循环心脏手术后继发急性肾功能衰竭（ARF）应用连续性血液净化（CBP）治疗患者的临床护理资料。结果存活病人中血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）持续性下降、尿量上升。病死率比文献报道下降10．5％。结论护士熟练掌握血滤机的功能，根据实验室各项生化检查、血气分析结果和病人的生命体征，及时调整置换液的配方。加强营养支持，监测机器的各项参数，以避免凝血和防止空气栓塞，是患者取得良好治疗效果的重要护理措施。     

人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1的纯化

目的 :探讨人乳头瘤病毒 16型主要衣壳蛋白 L 1的纯化方法。方法 :分别利用亲和层析和离子交换层析对重组融合蛋白 p ET30 a- 6× His- L 1进行了纯化。结果 :以包涵体形式表达的重组蛋白在变性条件下经 Ni- NTA Agarose、Q- Sepharose FF纯化 ,透析复性后均获得较高纯度 ,回收率分别为 30 %和2 9%。结论 :亲和层析和离子交换层析都是纯化重组 L 1蛋白的适宜方法 ,二者纯化效率相当。     

人C-反应蛋白分离纯化及其测定技术的改进

伴随感染、创伤、烧伤或各种炎症,人血液中C-反应蛋白含量迅速显著地增加。本文为分离纯化C-反应蛋白介绍了一种新的方法,报告了对火箭电泳法所做的一些改进,已用于临床。最小可测出量为8000μg/L。应用此法在室温条件下仅需4h即可完成。     

显微分离培养与免疫磁珠法分离纯化人毛囊干细胞

目的 探讨从人毛囊隆突区细胞(bulge cells,BCs)获取高纯度有活性的人毛囊干细胞(hair folliclestem cells,HFscs)的方法及条件. 方法 取自愿捐献的成人头皮标本,显微分离培养获得BCs,应用免疫磁珠纯化BCs中CD200阳性的HFSCs.苔盼蓝染色比较纯化前后细胞活性;流式细胞仪检测细胞纯化效率;免疫荧光检测纯化前后细胞CD200的表达情况. 结果 显微分离培养获得的人毛囊BCs,培养6 d后细胞生长融合,呈铺路石样.所得细胞角蛋白19组织化学染色阳性.CD200免疫磁珠分选法纯化细胞后,苔盼蓝染色显示纯化前细胞活力为95.0%±0.6%,纯化后为94.2%±1.0%,差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞仪及免疫荧光检测显示纯化前CD200阳性细胞的纯度为8.31%,纯化后CD200阳性细胞纯度为82.31%,纯化后CD200阳性细胞回收率为65.39%. 结论 联用显微分离培养与免疫磁珠法,可获得高纯度HFSCs,且细胞活性不受影响.     

重组人血管生长素的纯化

目的 建立表达重组人血管生长素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ，ｒｈＡＮＧ）的简便纯化工艺，为扩大生产及临床应用打下基础。方法 工程菌经超声破碎，离心洗涤后，变性萃取ｒｈＡＮＧ的包涵体，通过ＳｅｐｈａｃｒｙＳ－２００柱层析分离，再经ＣｕＣｌ２复性，得到ｒｈＡＮＧ纯品。结果 所获取ｒｈＡＮＧ的纯度达９６％以上，蛋白回收率为８０％，活性测定经鸡胚绒毛尿囊膜（ｃｈｏｒｉｏａｌｌ     

决明子中大黄素的提取、分离和纯化方法的研究

目的寻求获得高纯度大黄素的可行性。方法先用稀硫酸溶液将蒽醌苷水解成苷元，再用热氯仿将苷元提取出来，然后用PH8．0缓冲液将大黄酸从氯仿液中除去，再用0．2％NaOH反复萃取将大黄素从氯仿液中提取出来，用层析柱法将大黄素分离纯化，经用丙酮反复多次重结晶可得纯度较高的大黄素。结果本方法提纯得到的大黄素的纯度达到98．1％以上。结论该方法操作简单、实用性强、成本低、可以推广应用。     

人红细胞乳酸脱氢酶的提纯及其性质研究

目的 研制乳酸脱氢酶的标准品，从人红细胞中提取了乳酸脱氢酶（LD）并对其特性进行了研究。方法 用经过改进的方法，包括完全溶解红细胞，羟磷灰石处理，硫酸铵沉淀，CM-Sephadex、C50、SephadexG100和5’-AMP-Sepharose亲和层析。结果 该提制品LD比活性达163.0KU/g蛋白，几乎不含其它杂酶（测不到ALT、AST、CK、GGT、ChE、ALP、Amy活性），聚丙烯酰胺凝胶电泳（自然凝胶系统——酶染色显示LD1、LD2区带，蛋白质染色显示与酶相应的区带。37℃条件下，正向反应中，对底物L-乳酸和NAD的米氏常数（Km)分别为1 。040和0.192mmol/LO；逆向反应中，对底物丙酮酸和NADH的Km分别为0.119和0.039mmol/L。结论 提纯的LD其催化性质和人混合血清KLD非常相似。本研究为今后进一步研制LD测定用参考品建立了基础。