南瓜多糖的提取纯化及其复方口服液的降血糖作用研究

目的：提取和纯化南瓜、葛根及黄芪中的降糖有效成份，并考察由南瓜多糖、葛根黄酮及黄芪皂苷组成的复方口服液的降糖作用。方法：采用水提、醇提及柱层析法，分别提取和纯化南瓜、葛根及黄芪中的降糖有效成份，并将其配制成3种不同配比的复方口服液；建立四氧嘧啶高血糖小鼠模型，比较3种复方口服液的降糖作用。结果：提取获得南瓜多糖、葛根黄酮和黄芪皂苷，由其配制的3种复方口服液均能降低四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值，并初筛出最佳的复方口服液。结论：本文中南瓜多糖、葛根黄酮及黄芪皂苷的提取和纯化方法简便，得到的南瓜多糖和葛根总黄酮纯度高，其复方口服液具有明显的降血糖作用。     

家兔胰岛的分离纯化研究

目的探讨家兔胰岛分离、纯化的方法及其计数和活性的测定。方法选用日本大耳自家兔。予V型胶原酶于38℃内水浴外消化。采用Ficoll 400不连续密度梯度离心法对胰岛进行纯化,并对获得的胰岛进行DTZ染色计数。同时计算胰岛当量（IEQ）数。予台盼蓝染色法分析胰岛活性。结果DTZ染色纯化前每只家兔胰腺收获胰岛细胞数为15046±2733。IEQ数为：4635±554;化后胰岛数量为：5300±609,IEQ数为：1213±218;胰岛细胞活率〉90％,胰岛纯度为〉60％。结论家兔胰腺消化分离后得到胰岛的数量和IEQ均较多,且动物来源广泛、实验成本较低,预示其在胰岛移植中可作为胰岛来源。     

植物基除臭剂的配方设计及净化效果的试验研究

目的:通过研究植物基除臭剂的配方,探讨其净化效果。方法:采用市售植物复配精油为基底,三甘醇为溶剂,加入一定比例的乳化剂、助剂和去离子水配制植物基除臭剂。乳化剂选用比较常见的10种表面活性剂进行冷储和热储对比试验,助剂选用β-环糊精,通过三因素三水平正交试验确定配方中植物精油、乳化剂和助剂含量。通过气相色谱质谱分析除臭剂...     

大鼠Myostatin蛋白成熟肽的原核表达及纯化

目的:利用谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白表达系统在大肠杆菌中表达纯化Myostatin成熟肽。方法:应用RT-PCR从大鼠的腓肠肌mRNA中逆转录扩增Myostatin成熟肽编码序列,克隆入原核表达载体pGEX-4T1中,IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,采用Western-blot用抗-GST抗体验证融合蛋白表达。融合蛋白经Glutathione-agarose色谱纯化。结果:PCR扩增的Myostatin基因序列与GenBank数据库中的序列一致;30°C,0.1mmol/LIPTG诱导16小时,GST-Myostatin融合蛋白获得优化表达,表达效率为25%;Western-blot证实融合蛋白的特异性表达。结论:成功构建融合蛋白GST-Myostatin重组基因,并在大肠杆菌中获得有效表达,为Myostatin抗体的制备及进一步研究该蛋白的功能奠定基础。     

单克隆抗体TNT-1的纯化、F(ab)_2片段化及其免疫活性的测定

TNT-1是-种鼠IgG_2a单抗,已用于肿瘤病人的临床试验。本文将介绍从腹水中进一步纯化TNT-1的方法及制备其F(ah′)_2片段的条件。经Protein A亲和柱层析从小鼠腹水中提取出的lgG,再通过阳离子交换树脂柱Mono S,用缓冲液A(20 mmol/L MES,pH6.3)和缓冲液B(lmol/L NaCI),在快速蛋白液相色层(FPLC)系统上进行梯度洗脱分离,可制得纯净的TNT-1抗体,其免疫活性可达80％～85％;经纯化的TNT-1,用胃蛋白酶消化,制备F(ah′)~2片段,其消化条件是:酶的用量为抗体的1/250,pH3.8,温度37℃,时间4～5 /小时。消化后的混合物,用protein A亲和结合法除去完整的IgG,其余的F(ab′)_2和Fab、Fc等片段,在Mono S柱上,按前述的条件分离。产物TNT-1或F(ah′)_2的免疫活性,用标记抗体和过量抗原结合的方法测定;分高纯化过程中的洗脱峰,用间接免疫荧光技术监测其活性。结果戾明,TNR-1的F(ab′)_2片段的制备是成功的,色层分离纯化的方法简便而有效,并已成功地应用于批量生产。     

大孔树脂纯化野葛总黄酮的工艺研究

目的对野葛提取液中总黄酮的纯化分离进行了研究,旨在促进野葛药用价值的进一步发展。方法通过对5种不同型号的大孔树脂：HPD-750、HPD-600、AB-8、NKA-Ⅱ、ADS-17进行静态吸附解吸试验,筛选出AB-8型树脂进行动态试验,确定最佳纯化工艺条件。结果所得最佳条件为：上样液浓度9.82 mg/mL,上样液体积2BV,洗脱剂乙醇体积分数70%,洗脱pH 5～6,在此条件下吸附率可达91.21%,解吸率可达93.61%。结论 AB-8型树脂有较好的综合性能,可用于野葛提取液总黄酮的纯化。     

膜分离技术在药物分离纯化中的应用

膜分离技术较之传统的蒸馏、吸附、萃取、深冷分离等相比,具有低能耗、效率高、操作连续化、品质稳定等优点,目前在医药、化工、环境领域都有广泛应用.本文简要阐述了膜分离技术的特点及其在药物分离纯化中的应用.     

蝇类对环境中动物废弃物的净化作用初探

本文报告了常见蝇类对环境中动物废弃物的分解、净化作用的初步研究结果,从动物废弃物中共采到蝇类幼虫24种,甲虫6种,螨2种,其中主要为丽蝇、绿蝇与麻蝇。这些幼虫在孳生期间可以消耗动物废弃物,减少气味与污染,起到一定的生物净化作用。试验结果表明这些幼虫在高峰季节20天左右就可以消除2.5公斤的动物废弃物,并且表明在动物废弃物分解、净化过程中,蝇类及其它节肢动物之间相互交替,有利于环境中动物废弃物的清理。此外,文中对该问题的利弊还予以分析与讨论。     

巴戟天中大黄素甲醚的提取、分离和纯化方法研究

目的研究获得高纯度大黄素甲醚的可行性方法。方法先用稀硫酸溶液将蒽醌苷水解成苷元,再用热氯仿将苷元提取出来,用2%NaOH反复萃取将大黄素甲醚从氯仿液中提取出来,用薄层色谱法及层析柱法将大黄素甲醚进行分离纯化,经用丙酮反复多次重结晶可得纯度较高的大黄素甲醚。结果本方法提纯得到的大黄素甲醚的纯度较高。结论该方法操作简单、实用性强、成本低,有推广价值。     

Turnover of 125I-labelled tissue kallikrein following intraduodenal or intravenous administration

Tissue kallikrein is released in the body both physiologically and in many inflammatory disorders. Little is, however, known about the turnover of released tissue kallikrein in humans. Approximately 1 mg of tissue kallikrein (mol wt 43 000 Da) was purified from 85 L human urine by: (1) ultracentrifugation, (2) filtration through an aprotinin-coupled Sepharose 4B column, followed by (3) gel filtration over a Sephadex G-75 column. The elimination, after intraduodenal or intravenous administration of purified tissue kallikrein radiolabelled with ¹²⁵I, was followed by collecting serial samples of plasma, urine and faeces from three volunteers. Within 72 h, about 96% of the intraduodenally administered radioactivity had been excreted in urine, and approximately 5.4% in faeces, mainly as ¹²⁵I. No intact ¹²⁵I-tissue kallikrein was found in plasma, urine or faeces after the intraduodenal instillation of the protein. The plasma half-life of ¹²⁵I-tissue kallikrein up to 3 h after intravenous injection was 9 min and, thereafter, 20 h. The ¹²⁵I-tissue kallikrein was quickly bound to a plasma protein with a mol wt of about 67 kDa, but some of the radioiodinated tissue kallikrein was still unbound 15 min after injection, judged by gel filtration on Sephadex G-200 columns. Most of the radioactivity was excreted in the urine as ¹²⁵I, but about 4- 6% was recovered as free ¹²⁵I-tissue kallikrein. Conclusion: The use of tissue kallikrein as an oral drug appears, therefore, to be useless. Tissue kallikrein released into plasma seems to be quickly bound to a protein with a mol wt of 67 kDa, probably kallistatin or Protein C inhibitor, but some tissue kallikrein seems to be unbound and may have some physiological or pathophysiological action. The unbound tissue kallikrein is, at least partly, cleared from the circulation by the kidneys, and tissue kallikrein in the urine may partly be derived from plasma.