含有纯化标签的重组人表皮生长因子的构建及表达

目的:高效表达和制备有活性的人表皮生长因子(hum an ep iderm al growth factor,hEGF)。方法:用DNA重组技术构建EGF基因并插入表达载体pQE-40,与载体上的6×H is标签融合,获得的表达质粒pQE-EGF转化E.coliM15[pREP4],得工程菌M15[pQE-EGF]。MTT法测定活性,培养工程菌M15[pQE-EGF]并诱导目的蛋白表达,镍离子螯合亲和层析纯化重组EGF。结果:所构建的EGF序列正确,重组EGF在大肠杆菌中以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的21.2%,经镍离子亲和层析一步纯化后的重组EGF纯度达90%,得率为94%。复性后的重组EGF具有促Hela细胞生长活性。结论:以E.coliM15[pREP4]/pQE-40系统表达EGF具有技术路线简单、目的蛋白得率高、成本低等优点,是一种制备活性hEGF的有效手段。     

IL-18在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化

目的：研究人IL-18成熟蛋白（mhIL-18）在大肠杆菌中的高效的非包涵体表达以及纯化方案。方法：利用PCR方法扩增出mhIL-18基因，构建融合型表达载体pPTYB1-IL18，转化入大肠杆菌ER2566中，IPTG诱导表达，优化表达条件，超声裂解细胞，采用SDS-PMGE和Weslern blot分析重组蛋白的表达，亲和层析后用MTT法检测表达mhIL-18的活性。结果：成功构建载体并转化入ER2566后，经IPTG诱导，表达量可占菌体总蛋白的26％以上，其中80％以上的mhIL-18融合蛋白以可溶、有活性的形式存在。亲和层析后的mhIL-18纯度可达95％，具有显著的IL-18的生物学活性。结论：成功的在大肠杆菌中的高效以非包涵体表达mhIL-18，并具有显著的IL-18的生物学活性。     

半边旗中抗肿瘤成分6F的分离纯化

目的:分离纯化半边旗中抗肿瘤活性成分6F(即7β,9-二羟基-15-氧-对映-贝壳杉烷-16-烯-19,6β-内酯)。方法:采用二氧化碳超临界萃取、结晶与重结晶、硅胶柱层析方法进行分离、纯化6F;采用HPLC-MS、HPLC和TLC检测6F的纯度。结果:经HPLC和TLC检测,可以得到6F的纯化合物。结论:采用结晶与重结晶、硅胶柱层析方法,可有效纯化半边旗中抗肿瘤成分6F。     

三七花总皂苷清除活性氧自由基及抗脂质过氧化作用研究谢云峰谢集照龙盛京邱莉李映新张莹

目的：探讨三七花总皂苷清除活性氧自由基及对抗脂质过氧化作用的影响。方法从三七花盘中提取三七花总皂苷,D-101大孔吸附树脂分离纯化皂苷;采用分光光度法测定其对羟基自由基、DPPH 自由基的作用。用硫代巴比妥分光光度法观察三七花总皂苷对 Fe2＋半胱氨酸诱发肝脂质过氧化作用的影响。结果三七花总皂苷对羟自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的半数清除率（IC50值）分别为0.035 mg/ml、0.094 mg/ml;对Fe2＋半胱氨酸诱发肝脂质过氧化的最大抑制率为89.31%,具有较强的抑制作用。结论三七花总皂苷具有清除活性氧自由基及抗脂质过氧化作用。     

星点设计-效应面法优化刺五加总黄酮大孔树脂纯化工艺

目的:应用星点设计-效应面法优化刺五加总黄酮大孔树脂纯化工艺。方法:以上样质量浓度、乙醇浓度、乙醇洗脱用量为自变量,总黄酮洗脱率为因变量,对自变量中各水平多元线性回归及二项式拟合,用星点设计-效应面法优化出最佳纯化工艺。结果:单因素试验基础上,选择AB-8型大孔树脂,结合实际确定最佳纯化工艺为上样质量浓度为0.2g/m L,乙醇浓度为80%,乙醇洗脱用量为6.0BV,在此最佳条件下,总黄酮洗脱率的最大值达92.5%,与预测值(91%)相符。结论:采用星点设计-效应面法优化的大孔树脂纯化工艺方法简便,稳定可行,预测性好。     

大孔吸附树脂技术在中药化学研究中的应用

对近年来大孔吸附树脂技术在中药有效成分黄酮类化合物、生物碱类化合物、皂苷类化合物、酸类成分、多糖类成分及在中药复方纯化过程中的应用进展状况进行综述,并分析总结大孔树脂在应用过程中存在的树脂型号与质量、树脂安全性、树脂吸附及洗脱工艺、树脂的稳定性与再生等问题,为进一步的研究提供参考依据。     

天然药物——多糖的主要生物活性及分离纯化方法

多糖具有复杂的多方面的生物活性和功能。本文综述了多糖的抗肿瘤、抗病毒、抗炎等方面的主要生物活性。多糖是大分子物质,且不同于蛋白质等大分子,它的分离纯化方法与手段有其特殊性,而通过分离纯化获得的均一的多糖组分又是进行结构分析、药理和构效关系等研究的首要条件。本文根据文献报道并结合本实验室的工作经验对多糖的各种分离纯化方法进行了介绍。     

聚乙二醇化蛋白质阳离子树脂色谱行为的研究

以溶菌酶(LYS)作为模式蛋白,对聚乙二醇化蛋白质在不同阳离子交换填料中色谱行为进行了比较研究。考察了不同分子质量的聚乙二醇化溶菌酶(PEG-LYS)在4种阳离子树脂中的动态载样量的差异,同时比较了不同上样量对纯度和洗脱盐浓度的影响。研究结果显示PEG修饰能降低蛋白质和离子交换树脂的结合力,且随着PEG的分子质量的增加,PEG-LYS动态载样量降低。对相同分子质量的PEG-LYS,产物纯度以及PEG-LYS的洗脱盐浓度随着上样量的增加而降低,研究结果显示,PEG分子质量和上样量对纯化工艺的研究有重要意义。     

当归多糖的分离纯化及其部分理化性质的研究

目的　对甘肃岷县产当归中获得的当归多糖 (ASP)进行分离纯化 ,并测定其部分理化参数。方法　采用水煮 -醇沉法从新鲜当归中提取当归粗多糖 ,Sevag法除蛋白 ,冷冻干燥。苯酚 -硫酸法测定总糖含量 ;UV法及IR法检测多糖性质 ;自动旋光仪测定旋光度 ;采用凝胶渗透色谱 -激光光散射联用技术 (SEC -LLS)分析多糖的分子量范围及其分布 ;HPLC鉴定多糖的单糖组分及其相对百分比含量。结果　所得当归多糖为浅米灰色 ,无甜味 ,易溶于水 ,总糖含量为 96 .8% ;192nm处有明显吸收峰 ,2 6 0、2 80nm处均无吸收峰 ,证明被测物为多糖 ,且不含核酸及蛋白质 ;红外吸收光谱分析 ,在 335 2、2 94 0、174 7、16 2 6、14 14、12 37、10 2 1、5 36cm-1处表现为典型的多糖吸收峰 ;旋光度为 +94 .6° ,糖残基间的苷键可能为α -糖苷键 ;分子量在 1× 10 4～1 1× 10 5之间 ,80 %的组分集中在 4 3× 10 4左右 ;当归多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖和木糖组成 ,其摩尔比值为 17.8∶5 .8∶12∶1∶2 .2。结论　所用方法提纯的当归多糖糖含量较高。     

人精子甘露糖受体的部分特性研究

目的分离纯化人精子甘露糖受体并测定其分子量和等电点。方法用亲和层析法分离纯化人精子甘露糖受体,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定其分子量,等电聚焦电泳法测定其等电点。结果人精子甘露糖受体的分子量为66.3 ku,等电点为pH=5.1。结论用亲和层析法分离得到人精子甘露糖受体,并测得其分子量和等电点,可为后续开展人精子甘露糖受体有关理化特性和医用价值的研究积累有价值的资料。