不同麻醉和镇痛方法对食管癌开胸手术患者外周血Th细胞分化的影响

目的:观察不同麻醉和镇痛方法对食管癌开胸手术患者外周静脉血辅助性T细胞分化的影响.方法:60例ASA Ⅰ～Ⅱ级择期食管癌开胸手术患者随机均分为3组:Ⅰ组采用全凭静脉麻醉,术后行患者自控静脉镇痛(PCIA);Ⅱ组采用胸段硬膜外阻滞复合静脉全麻,术后行PCIA;Ⅲ组麻醉方法同Ⅱ组,术后行患者自控硬膜外镇痛(PCEA).3组分别于麻醉前(T0),切皮后2h(T1),术后4h(T2),术后24h(T3),术后48h(T4)抽取肘静脉血,用流式细胞检测技术测定Th1、Th2细胞胞内因子γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4的水平,用CD3 CD8-IFN-γ 标识Th1细胞,用CD3 CD8-IL-4 标识Th2细胞,通过计算IFN-γ %/IL-4 %来测Th1/Th2值.结果:与T0时比较,Ⅰ组Th1/Th2值在T2时明显降低(P<0.05),Ⅱ、Ⅲ组在T3时Th1/Th2值均明显降低(P<0.05).组间比较,Ⅱ、Ⅲ组Th1/Th2值在T2时高于Ⅰ组,Ⅲ组Th1/Th2值在T3和T4时均高于Ⅱ组.结论:食管癌开胸手术患者术后皆出现Th1/Th2值的降低;硬膜外阻滞复合静脉全麻辅以术后硬膜外镇痛能够抑制Th0细胞向Th2细胞的过度分化.     

体外诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化及凋亡的研究

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞体外向神经细胞诱导分化的潜能,及分化后的凋亡情况?方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基对第三代MSCs进行诱导分化,诱导分化的细胞按分化时间3?7?14 d分成A?B?C三组?三组诱导分化细胞分别进行NSE免疫组织化学,MAP2免疫荧光化学以及TUNEL凋亡细胞检测?结果:A?B?C三组细胞在细胞形态上与神经细胞相似,并且表达神经细胞特异性标记抗原NSE?MAP2,但是C组细胞表达强度弱于B组,并且阳性细胞比例少于B组(P < 0.05)?A?B?C三组TUNEL凋亡阳性细胞比例呈逐渐增多趋势(P < 0.05)?结论:含有表皮生长因子(EGF),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的诱导培养基可以诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,随着诱导时间的推移,分化细胞状态下降,凋亡比例增多?     

甲氨蝶呤对映体诱导肺癌细胞耐药后引起血管内皮细胞分化差异的研究

目的 研究甲氨蝶呤(MTX)对映体大剂量冲击作用肺癌A549细胞后,MTX对映体耐药细胞血管分化是否具有手性选择性.方法 用大剂量冲击法诱导获得A549对映体耐药肺癌细胞,流式细胞双色分析细胞CD44/CD31以及P-170表达;皮下接种裸鼠,成瘤后取瘤体切片,进行CD34组化染色,计数新生微血管密度(MVD).以A549亲本细胞(未获得耐药)作为对照组.结果 分别建立耐药浓度为15 μmol/L的L-MTX和D-MTX的A549耐药细胞株;它们与各自对映体的耐药指数分别为12.4±1.2和20.1±2.3;A549亲本细胞、L-MTX耐药细胞和D-MTX耐药细胞中:CD31+阳性率分别为55.5%±9.7%、32.9%±8.0%和91.9%±3.2%,差异有统计学意义(F=511.92,P=0.000);P-170阳性率分别为85.5%±4.6%、71.5%±8.2%和87.0%±8.9%,L-MTX耐药细胞P-170的阳性率低于D-MTX耐药细胞(t=6.13,P=0.002);3种细胞植入裸鼠成瘤后切片免疫标记CD34统计新生MVD,A549亲本细胞为3.6±1.2,L-MTX耐药细胞为7.2±1.7,D-MTX耐药细胞为55.9±11.9,D-MTX耐药细胞显著高于L-MTX耐药细胞(t=13.37,P=0.000).结论 MTX对映体诱导肺癌A549耐药细胞向血管内皮细胞分化能力不同,D-MTX耐药细胞经血管转移高于L-MTX耐药细胞,这提示MTX制剂中D型组分不能简单当成污染物而忽视,应尽量选用单一对映体的L-MTX药物制剂,减少D-MTX带来的副作用.     

淫羊藿苷调节酸性微环境减轻绝经后老年骨质疏松性疼痛

背景：前期研究已证明,淫羊藿苷在促进骨形成和抑制骨吸收方面具有重要作用,但其对骨质疏松介导的骨痛产生的影响尚未见报道。目的：探讨淫羊藿苷减轻绝经后老年性骨质疏松性骨痛的可能机制。方法：(1)动物实验：将200只C57BL/6小鼠随机分为4组：假手术组、模型组、模型+淫羊藿苷组,模型+碳酸酐酶Ⅱ抑制剂组。除假手术组外,其余各组摘除小鼠卵巢建立绝经后骨质疏松模型。模型+淫羊藿苷组在造模后第2天灌胃淫羊藿苷,每2周进行1次疼痛行为学实验并取材,持续20周。microCT检测股骨骨量、苏木精-伊红染色及TRAP染色检测破骨细胞活性、免疫荧光染色检测神经元形态及相关离子通道表达。(2)细胞实验：提取小鼠骨髓来源的破骨细胞前体细胞,在体外使用RANKL/M-CSF体系诱导分化为破骨细胞并添加不同浓度淫羊藿苷(1,10μmol/L)干预。采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞分化,采用鬼笔环肽染色检测破骨细胞肌动蛋白环,采用骨板吸收实验检测破骨细胞噬骨功能,采用pH计检测体系pH值,采用Western Blot检测破骨细胞分化相关蛋白表达。此外,提取小鼠背根神经节来源神经细胞并用淫羊藿苷处理,采用C...     

肌卫星细胞Niche生物学功能的研究进展

肌卫星细胞Niche是由特殊的微环境组成的特定区域,在维持卫星细胞静止及增殖分化等生理进程中起重要作用.卫星细胞Niche包括直接Niche和间接Niche.直接Niche由调控卫星细胞的信号通路、肌纤维Niche和细胞外基质组成,成肌调节因子MyoD通过Wnt信号通路使卫星细胞退出细胞周期,并诱导卫星细胞进行成肌分化...     

胎胰蛋白促进人脂肪来源的间充质干细胞向胰岛素及C-肽阳性细胞的分化及细胞鉴定

目的：利用大鼠胚胎胰腺组织蛋白提取物诱导人脂肪来源的间充质干细胞(hASCs)向胰岛素分泌细胞分化,为临床胰岛移植寻找新的细胞来源。方法：将新生SD大鼠的胚胎胰腺匀浆后提取胎胰蛋白,重建胰腺微环境,诱导hASCs向胰腺方向分化。诱导组为胎胰蛋白培养组,对照组不添加胎胰蛋白,其余培养条件相同,诱导20 d后,荧光定量PCR技术检测2组胰腺发育相关基因的表达水平,ELISA法检测细胞悬液胰岛素水平,荧光免疫组织化学检测细胞C-肽蛋白表达。结果：在胎胰蛋白诱导过程中,hASCs重要标志基因Oct3/4及Nanog的表达持续降低,说明hASCs逐渐失去全能干细胞的特性;在诱导的第6天开始检测到PDX-1和CK-19的表达上调,诱导细胞出现了胰腺方向的分化,12 d开始检测到胰岛素的阳性表达。所获分化细胞基础相分泌胰岛素量为（287.17± 15.67） mIU•L^-1,高糖刺激下为（401.09±28.94 ）mIU•L^-1,二者比较差异有统计学意义（P<0.01）,且均明显高于对照组的（4.85±1.04） mIU•L-1 (P<0.01);免疫荧光检测,诱导组可见C肽阳性细胞,对照组未见C-肽阳性细胞。结论：模拟的微环境可诱导hASCs分化为有功能的胰岛素产生细胞,具有替代胰岛细胞治疗糖尿病的潜在可能性。     

微小核糖核酸-204和211在人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞分化过程的变化

目的 观察人胚胎干细胞（hESC）向视网膜色素上皮（RPE）细胞诱导分化过程中微小核糖核酸（miRNA）-204和211的变化特征。方法 采用自然分化法诱导hESC向RPE细胞分化,细胞鉴定。按细胞诱导分化时间秩序,分为hESC组、含色素细胞组、hESC源性RPE细胞组和原代培养的人胎RPE（hfRPE）细胞组。行miRNA基因表达谱芯片分析、miRNA-204和211实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测。 结果 miRNA芯片分析结果显示,随细胞诱导分化过程, miRNA-204持续上调。其中,含色素细胞组是hESC组的5.026倍,hESC 源性RPE细胞组是含色素细胞组的3.337倍;hfRPE细胞组是hESC源性RPE细胞的13.574倍。miRNA-211在细胞诱导分化过程中上调不明显,但从hESC源性RPE细胞到hfRPE细胞,上调倍数为44.333倍,是miRNA表达谱中差异最大的miRNA。RT-PCR检测结果显示,hESC组、含色素细胞组、hESC源性RPE细胞组、hfRPE细胞组miR-204相对表达量分别为91.81±4.43、2 263.09±206.39、5 996.80±235.42、171 676.45±999.82,差异有统计学意义（t=18.22、20.66、279.38,P＜0.001）;miRNA-211相对表达量分别为2.23±0.31、129.33±3.75、125.76±4.78、16 682.00±352.97。含色素细胞组和hESC细胞组、hfRPE细胞组和hESC源性RPE细胞组miR-211相对表达量比较,差异均有统计学意义（t=58.58、81.24,P＜0.001）。结论 miRNA-204和211在hESC向RPE细胞诱导分化过程中持续单一变化。     

“心肌样”微环境中骨髓基质细胞分化为心肌样细胞

[目的]探讨“心肌样”微环境中，骨髓基质细胞（marrow stromal cells，MSCs）是否可以分化为心肌样细胞。[方法]将SD成年大鼠的MSCs分离、培养后用5-BrdU标记，再将标记的MSCs与SD大鼠乳鼠心肌细胞（cardiomyocytes，CM）共培养，在倒置显微镜下观察MSCs形态学变化；用免疫细胞化学法检测MSCs中心肌特异性肌钙蛋白T。[结果]MSCs 3 d后贴壁生长，呈梭形或多角形，细胞核大，细胞增殖迅速，当细胞80％～90％融合时加入CM，共培养3d，MSCs变成长杆状，即呈现较为一致的极性排列。取共培养3周的细胞进行免疫细胞化学染色，见到经5-BrdU标记的部分MSCs在荧光显微镜下细胞核显现红色荧光的同时光镜下胞浆中心肌特异性肌钙蛋白T呈阳性。[结论]在“心肌样”微环境中，确实有部分MSCs转化为心肌样细胞。     

ＤＮＡ结合抑制因子１在非小细胞肺癌组织中的表达

目的　探讨ＤＮＡ结合抑制因子１（Ｉｄ１）在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）发生、发展中的作用及与ＮＳＣＬＣ临床病理特征之间的联系。方法　选取３０例ＮＳＣＬＣ癌组织、癌旁组织和正常肺组织以及１０例肺良性病变组织和正常肺组织,采用ＲＴ-ＰＣＲ和免疫组化ＳＰ法测定其Ｉｄ１ｍＲＮＡ和Ｉｄ１蛋白的表达情况。结果　（１）Ｉｄ１ｍＲＮＡ、Ｉｄ１蛋白在ＮＳＣＬＣ癌组织中的阳性表达率为９６.６７％（２９／３０）、９３.３３％（２８／３０）,在癌旁组织中的阳性表达率为１３.３３％（４／３０）、１０％（３／３０）,在ＮＳＣＬＣ正常肺组织、肺良性病变组织及其正常肺组织中均未见表达。（２）ＮＳＣＬＣ癌组织Ｉｄ１ｍＲＮＡ和Ｉｄ１蛋白的表达强度随癌细胞分化程度的降低而增强。（３）ＮＳＣＬＣ患者Ｉｄ１ｍＲＮＡ和Ｉｄ１蛋白的表达与病理类型、瘤体大小、淋巴结转移及预后无明显相关性。结论　Ｉｄ１因子可能是鉴别ＮＳＣＬＣ与肺良性病变的重要分子标记物之一,且其表达水平与ＮＳＣＬＣ癌细胞分化程度呈负相关。     

Raldh2沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响

 目的 深入心脏发育相关基因表达层面，研究视黄酸代谢中的关键基因视黄醛脱氢酶2（retinaldehyde dehydrogenase 2，Raldh2）在P19细胞中的表达并探讨对其心肌样分化的影响机制。方法 构建miRNA干扰质粒转染P19细胞以使Raldh2表达降低，qPCR检测miRNA对Raldh2在P19细胞中的敲低效率，利用杀稻瘟菌素筛选出稳定低表达Raldh2的细胞株，加入二甲基亚砜以诱导P19细胞分化为心肌样细胞，qPCR检测心肌发育相关基因在心肌样分化各时期的表达水平。结果 成功构建Raldh2低表达的稳定P19细胞株MiRaldh2，敲低效率达91%（t=25.52，P<0.000 1，95% CI：0.81~1.01）；在整个分化过程中，MiRaldh2组部分心脏相关转录因子的mRNA水平普遍低于P19组，尤其在第7天，MiRaldh2组Gata 4、Tef-1、N-myc、α-mhc和Ctnt的相对表达率分别为P19组的0.16±0.01（t=17.29，P<0.000 1）、0.51±0.02（t=3.564，P=0.023 5）、0.23±0.01（t=13.17，P=0.000 2）、0.20±0.02（t=17.76，P<0.000 1）和0.59±0.06（t=3.642，P=0.021 9），然而对于Nkx2.5和Hand2的mRNA水平，MiRaldh2组在第2~7天显著升高，第7天的表达率分别为P19组的2.25±0.35（t=3.526，P=0.024 3）和3.58±0.20（t=9.214，P=0.011 6）。结论 敲低Raldh2基因可抑制P19细胞向心肌样细胞的分化，Raldh2可能对心脏早期发育具有重要作用，其低表达可能是维甲酸缺乏引起心脏畸形的原因之一。