尿路致病性大肠杆菌溶血素A基因的序列分析

目的分离尿路致病性大肠杆菌(UPEC)临床流行株,并进行序列分析。了解其基因变异情况。方法自临床尿路感染标本中分离溶血性大肠杆菌10株。按GenBank中的溶血素A(hlya)基因保守序列设计合成引物。以获得的UPEC基因组DNA为模板,用PCR方法扩增其hlya基因片段。对扩增的片段测序并进行同源性分析。结果扩增的hlya目的基因大小744bp。经PCR鉴定表明获得正确的片段。测序结果显示,10个分离株DNA序列同源性高于99.7%,其与GenBank中的hlya基因序列的同源性为99%以上。10个序列中共发生13处碱基的替代,但均属于同义突变,没有碱基的插入与缺失。结论UPEChlya基因高度保守。本研究在国内首次成功地扩增了UP-EC基因。为进一步研究hlya的结构、阐明UPEC的致病机制、探讨hlya作为特异性诊断靶点及保护性疫苗的研究奠定了基础。     

重组人骨形成蛋白—2成熟肽在大肠杆菌中的高效表达

利用大肠杆菌系统高效表达人骨形成蛋白－２成熟肽。方法；将编码人骨形成蛋白２成熟肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体ｐＤＨ上，使其受控于ＰＲＰＬ启动子，构建成表达质粒ｐＤＨＢ２ｍ，以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主菌。对工程菌进行温度诱导表达，表达产物初步纯化后进行复性处理，用小鼠肌袋模型检测产物诱骨活性。     

901电话机消毒除臭剂杀菌效果观察

实验表明，９０１电话机消毒除臭剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作用１分钟，杀灭率可达９９．９９％以上。有机物、ｐＨ与温度对杀菌效果有一定影响。现场使用取得较好的消毒效果。     

纳米抗菌剂抑菌杀菌性能研究

目的：检测纳米抗菌剂对标准菌株的杀菌、抑菌性能和高温对其抑菌效果的影响。方法：目标菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌，通过悬液定量杀灭试验和抑菌环试验检测纳米抗菌剂的杀菌、抑菌能力。结果：水溶性纳米抗菌膜溶于5ml灭菌水中作用l0min可杀灭95．39％的金黄色葡萄球菌和93．28％的白色念珠菌，复合了纳米银的抗菌医用棉条、烧烫伤贴、创伤贴对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌环直径大于l0mm，对白色念珠菌的抑菌环直径大于7mm。结论：纳米抗菌剂对细菌繁殖体和白色念珠菌具有良好的抑菌、杀菌作用，高压灭菌处理对纳米银抗菌剂抑菌效果影响不大，但织物构造对其抑菌效果有影响。     

利用T7和PR双启动子的新型表达载体的构建及其应用

构建具有λＰＲ与Ｔ７双启动动子的新型原核表达载体ｐＤＯＧ，以便使用同一载体研究不同诱导条件下，重组蛋白在大肠杆菌中表达，降解以及折叠的情况，从而选择最佳的诱导条件。方法采用ｐＢＶ２２０与ＰＥＴ－３表达载体作为原始材料，将ＰＥＴ－３上包括Ｔ７启动子与Ｔ７ｇ－１０释译起始序列的一段序列克隆到     

表达屋尘螨Ⅰ类变应原Der p 1的基因工程菌的发酵条件探讨

目的 探讨发酵条件对大肠杆菌工程菌表达重组屋尘螨Ⅰ类变应原(Der p 1)的影响.方法 应用摇瓶发酵试验观察不同诱导时间和不同诱导时机对Der p 1表达量的影响.结果 (1)Der p 1基因在E.coli BL21(pBVDP8)菌密度A600 nm0.6左右时,42℃最佳诱导时间为4 h.(2)工程菌E.coli BL21(pBVDP8)在30℃培养至A600 nm为0.5～0.7时,42℃诱导4 h Der p 1表达量最高.结论 确定了最适诱导时间和诱导时机,初步形成了一套高表达Der p 1的发酵技术.     

PCR检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,并比较单一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响.方法选择O157∶H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的4对引物,分别或共同进行PCR扩增,检测40株O157∶H7和非O157∶H7菌株,将细菌按10+1～10+6稀释后比较PCR的检测灵敏度.结果所有O157∶H7菌株均在497 bp和625 bp处出现O157抗原基因和H7抗原基因产物,其产毒株在484 bp和(或)210 bp处出现SLT2和(或)SLT1基因产物,非O157∶H7菌株PCR结果均为阴性;单一PCR检测灵敏度为150 CFU/PCR反应,多重PCR为＞1 500 CFU/PCR反应.结论在经过增菌后,多重PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便,为产毒和非产毒O157∶H7的诊断提供了新的手段.