人源性多肽pCM-19抗菌机制的初步研究

目的：初步分析人源性多肽pCM-19的抗菌作用机制。方法：利用荧光素掺入破损细胞膜的原理，采用流式荧光激活细胞分析（FACScan）和扫描电子显微镜分析pCM-19对靶菌膜的作用机制。结果：FACS分析法结果显示pCM-19处理后的大肠杆菌PI着染细菌比例明显高于未处理组，并且随作用时间的延长，PI着染BL-21菌比例增大，20min时达最高水平，20min以后反而降低；扫描电子显微镜观察到pCM-19处理后的大肠杆菌有明显的表面形态学的改变，如细菌体积缩小、细菌表面出现皱缩、凹陷似有孔洞形成。结论：人源性多肽pCM-19可能作用于细菌细胞壁和（或）细胞膜，通过改变其通透性而发挥杀菌作用。     

宝钢医院临床分离大肠杆菌的耐药特点分析

目的 了解宝钢医院临床分离大肠杆菌的耐药特点。方法 收集宝钢医院2002年1月至2002年12月临床分离大肠杆菌，用琼脂扩散法检测各菌株对12种常用抗生素的药敏结果。结果 2002年共检出大肠杆菌118株，其敏感率最高依次为亚胺培南(100％)，头孢他定(66％)，阿米卡星(66％)，头孢噻肟(62％)。结论 宝钢医院细菌耐药性较严重，应加强临床用药监测，合理使用抗生素。     

DETECTION OF HIGH-PATHOGENICITY ISLAND-HARBORING ESCHERICHIA COLI ISOLATED FROM CHILDREN WITH DIARRHEA DISEASE IN CHINA

[Objective] To investigate the etiologicla status of etiologica status of high-pathogenicity island-harboring Escherichia coil(HPIEC) in dianhea disease among children. [Method] Diarrheagenic Esoherichia coli was isolated and identified from the stool specimens of 1032 children with dianhea diseases by culturing, serotyping, Polymerase chain reaction amplification (PCR), the High-pathogenicity island-harboring Esoherichia coli (HPIEC) was identified by PCR and in situ hybridization. [Results] A total of 652 strains of E.coli isolated from 1032 stool specimens and confirmed by serotyping, PCR and colony hybridization out of which 225 were identified as diarrheagenic E.coil,including 20 EPEC,81 ETEC, 47 SLTEC, 74 ESIEC, and 3 EIEC strains. 112(17.2%)irp2 virulent gene positive E.coli (HPIEC) were detected from the 652 strains, out of which 24 were from the 74 ESIEC strains and 17 from the 47 SLTEC strains. The typical clinical symptoms of children with diarrhea disease caused by HPI- harboring E.coli included anorexia(87.5%) ,abdominal pain(58.0%), diarrhea (75.9%,Over six episoders, mostly of mucous stool a day), and fever(50.9%). [Conclusion] High-pathogenicity island-harboring E.coli is one of the important pathogens of diarrhea diseases in children.     

漂粉精杀菌作用的测定

用有效氯为5ppm的漂粉精溶液对大肠杆菌与白色葡萄球菌作用3分钟,杀灭率达99.9％;对枯草杆菌黑色变种芽胞需用有效氯50ppm溶液作用10分钟。有机物对其杀菌效果有明显影响。     

第一讲O157:H7大肠杆菌和志贺样毒素(续)

第一讲Ｏ１５７：Ｈ７大肠杆菌和志贺样毒素（续）徐建国二、ＥＴＥＣ、ＥＰＥＣ、ＥＩＥＣ和ＥＡｇｇＥＣ的毒力因子和鉴定１．ＥＴＥＣ：ＥＴＥＣ的主要特征是能分泌热稳定毒素（ＳＴ）、热不稳定毒素（ＬＴ）；具有与致病性相关的菌毛，如ＣＦＡｓ（Ｃｏｌｏｎｉｚａｔ...     

重组血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌的高效表达

目的:使重组血管内皮细胞生长因子(VEGF)在大肠杆菌中得到高效表达.方法:通过构建表达重组VEGF的质粒PRL621/VEGF,并在大肠杆菌中高效表达.结果:表达量约占菌体总蛋白的40%.对形成包含体的表达产物进行变性,初步复性处理,得到重组人VEGF粗提液,鸡胚绒毛尿囊膜试验表明有促血管生长活性,N-端15个氨基酸序列分析结果,与天然VEGF蛋白质相应序列一致.     

天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因的表达及产物抗菌活性测定

目的 研究天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因[CA（1-8）-MA（1-12）]抗菌肽的抗菌活性。方法 将天蚕素A-蛙皮肽杂合肽基因抗菌肽的人工基因克隆到具有自切割功能的表达载体pTYB12上，并在大肠杆菌（E.coli)BL21(DE3)中进行表达，表达产物用几丁质树脂进行了亲和吸附，自切割后洗脱得到抗菌肽，进行透析以去除盐类物质，最后用大肠杆菌与金黄色葡萄球菌进行活性检测。结果 天蚕素A-蛙皮肽杂合肽[CA（1-8）-MA（1-12）]对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌均有一定的抗菌活性。结论 天蚕素A-蛙皮肽杂合肽具有抗菌活性。其抑瘤活性的研究还有待于进一步研究。     

鸡柔嫩艾美耳球虫疫苗候选基因在大肠杆菌中的表达

目的构建柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原原核表达载体，并且在大肠杆菌中表达。方法将本室构建的pMD-Mz5-7克隆质粒酶切回收目的片段定向亚克隆到pET-28b( )载体上，构建成原核表达载体pET-28b-Mz5-7，酶切鉴定正确后，在Escherichia coli BL21(DE3)中用IPTG诱导表达，并经SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果成功构建了目的抗原基因的原核重组表达质粒pET-28b-Mz5-7，IPTG诱导表达该融合蛋白，SDS-PAGE电泳表明，其能表达一分子质量约为37ku的融合蛋白，与预测分子质量相符，最佳反应条件为1mol／LIPTG诱导4h后表达量最高。薄层扫描显示表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的18％，Western blotting结果显示，表达产物可被抗柔嫩艾美尔球虫的多克隆抗体识别，说明该融合蛋白具有很好的反应原性。结论在原核细胞融合表达Mz5-7成功，为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础。