HIV P66蛋白的表达、纯化及活性检测

此研究的目的是体外表达HIV-1逆转录酶P66亚单位蛋白,并得到纯度较高且具有活性的重组蛋白。首先通过PCR方法从含HIV-1 HXB2标准株全基因的质粒中扩增出全长p66基因,插入表达载体pTWIN1,构建pTWIN-p66质粒。再将该质粒转化到表达菌BL21,在IPTG诱导下表达P66蛋白。表达产物经几丁质柱一步纯化后得到P66蛋白纯品。纯化的P66蛋白分别催化B95-8细胞总RNA、RT试剂盒中对照RNA进行逆转录;同时以试剂盒中的M-MLV RT为对照进行相同的逆转录,PCR后电泳比较活性。结果显示我们构建的pTWIN-p66质粒在IPTG诱导下在原核细胞中P66亚单位蛋白表达量较高,经一步纯化后蛋白凝胶扫描纯度达88%,并具有较好的逆转录活性。与M-MLV RT体外活性比较,两者活性相当。该研究为进一步开发国产HIV确证诊断试剂及抗AIDS药物的研究打下了初步基础。     

青海地区产后6至8周产妇阴道微生态情况

目的 探究青海地区产后6至8周产妇阴道微生态的变化及其影响因素。 方法 选取2019年1月至6月在本院妇产科足月分娩的产妇665例,在产妇产后6至8周复查时进行阴道微生态检测,测定阴道pH值以及阴道致病菌,同时做盆底功能检测,记录产妇血性恶露干净时间和分娩方式等。 结果 产后6至8周产妇阴道炎感染率为33.98%,其中需氧菌阴道炎患者77例(11.58%),细菌性阴道病患者89例(13.38%),滴虫性阴道炎患者41例(6.17%),外阴阴道假丝酵母菌病患者19例(2.86%),共计226例。 结论 产后6至8周产妇阴道微生态失衡,pH值明显异常,以细菌性感染为主,产后微生态的失衡与盆底功能受损有关。     

HPLC法测定刺囊毛霉微生物转化甘草次酸的主产物含量

采用刺囊毛霉AS3.3450对甘草次酸进行微生物转化,生成的主产物经分析鉴定是7β-羟基甘草次酸.采用高效液相色谱方法,以C18-ODS为色谱柱,甲醇-0.03%三氟乙酸水溶液(梯度洗脱)为流动相,检测波长为:254 nm,测得在160 r/min、27℃的转化条件下,底物加量为130 mg/L,转化时间为9 d时,主产物得率最高为712 mg/g甘草次酸,且在选定色谱条件下7β-羟基甘草次酸的线性范围良好,平均加样回收率为98.1%,平均标准偏差(RSD)为2.37%.     

TGF-β1和Smad4在膀胱癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的：观察转化生长因子β1（TGF-β1）和Smad4在膀胱癌组织内的表达情况,并分析其与膀胱癌淋巴管生成及淋巴结转移之间的关系。方法：选择在本院确诊的膀胱癌患者50例,根据淋巴结转移与否分为淋巴结转移组（30例）和无淋巴结转移组（20例1。应用免疫组化法检测膀胱癌组织内TGF-β1和Smad4的表达。以D2—40作为淋巴管内皮特异性标记物,检测膀胱癌组织内淋巴管生成情况并分析其与TGF-β1和Smad4的表达的关系。结果：TGF．B1主要表达于膀胱癌细胞胞浆内,在淋巴结转移组的表达率明显高于无淋巴结转移组（P=0．017）。Smad4表达于膀胱癌细胞胞浆和胞核内,在无淋巴结转移组的表达率明显高于有淋巴结转移组（P=0．005）。Smad4表达阳性组的淋巴管数密度（LVD）明显低于Smad4表达阴性组（P=0．037）。TGF-p1的表达与Smad4的表达呈显著的负相关性（P=0．001）。结论：TGF-β1的表达与膀胱癌淋巴管生成及淋巴结转移呈显著正相关,Smad4的表达与膀胱癌淋巴管生成及淋巴结转移呈显著负相关,TGF-β1／Smad4信号通路可能在膀胱癌淋巴管生成和淋巴结转移过程中起重要作用。     

Graves病患者血清氧化应激水平的变化

目的:检测Graves病患者血清氧化应激指标的变化,探讨甲亢与氧化应激的关系。方法:选择本院门诊及住院符合甲亢临床及实验检查确诊的患者60例作为Graves病组(观察组,B组)及同期健康对照者30例作为正常对照组(对照组,A组)。其中B组按照甲状腺激素水平各分为两组:B1组:正常值f T310 pg/mL 30例;B2组:f T330 pg/mL 30例。采用酶联免疫吸附法检测和比较各组血清甲状腺激素、硝基酪氨酸、共轭双烯水平。结果:与对照组相比,Graves病甲亢患者体内硝基酪氨酸、共轭双烯水平增高((P0.01);正常对照组与B1组、正常对照组与B2组、B1组与B2组相比较,硝基酪氨酸、共轭双烯水平有差别,即甲状腺激素水平相对较高者氧化应激程度较高(P0.05);硝化酪氨酸与年龄、f T3、f T4呈显著正相关,共轭双烯与年龄、f T3、f T4呈显著正相关。结论:Graves病甲亢患者体内氧化应激水平随甲状腺激素水平不同而变化。     

Ucf-101对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察Ucf—101对大鼠脑缺血再灌注后神经元caspase-3蛋白表达及细胞凋亡的影响,研究其对缺血性脑损伤是否具有保护作用。方法将36只雄性WiStar大鼠随机分为3组：假手术组、缺血组及Ucf—101组,采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）2h再灌注模型,于再灌注后6h和24h断头取脑,采用TTC法测梗死体积,TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化,免疫组化法观察脑皮质神经元caspase-3的表达。结果脑缺血再灌注后不同时间点（6h、24h）,Ucf-101组与缺血组相比梗死体积明显缩小,有显著性差异（P〈0．05）;假手术组未见梗死现象。缺血组TUNEL阳性细胞数较假手术组明显增多（P〈0．05）,脑皮质caspase-3的表达较假手术组亦显著增强（P〈0．05）,给予Ucf-101处理后,TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少（P〈0．05）,caspase-3的表达较缺血组亦明显减弱（P〈0．05）。结论Ucf-101能有效地抑制脑缺血再灌注损伤,下调脑皮质神经元Caspase-3蛋白的表达,抑制神经元的凋亡,发挥神经保护作用。     

日偏食对乌鲁木齐空气微生物群落功能多样性的影响

为了了解日偏食对空气微生物群落碳代谢的影响,利用BIOLOG指纹图谱方法分析日偏食前后乌鲁木齐空气微生物群落碳代谢功能多样性的变化。结果表明,日偏食当天空气微生物的碳源代谢能力高于其他几天。微生物群落多样性指数方差分析显示,当天(2009年7月22日)Shannon-Wiener多样性指数最高;主成分分析表明对碳源利用起分异作用的主要是羧酸类物质。日偏食会影响乌鲁木齐空气微生物群落功能多样性。     

当归对宫内低氧新生大鼠海马神经元与神经胶质细胞的影响及其机制

目的:探讨宫内低氧对新生大鼠海马CA3区神经元与神经胶质细胞的影响及血管内皮生长因子(VEGF)在低氧后的表达与当归的干预作用。方法:将大鼠随机分为对照组、低氧组和当归组分别受孕,取新生鼠脑组织制片后做神经元特异性烯醇化酶(NSE)mRNA、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA原位杂交。结果:当归能显著增大低氧新生鼠海马CA3区NSE mRNA和VEGF mRNA原位杂交阳性细胞IOD值,减小GFAP mRNA原位杂交阳性细胞IOD值。结论:当归注射液可增加低氧所致的新生大鼠海马CA3区神经元的数量,减弱该区神经胶质细胞的增生,其机制可能是进一步上调低氧后VEGFmRNA的表达。     

日偏食对乌鲁木齐空气可培养细菌群落的影响

利用自然沉降法采集2009年7月19日至24日日偏食前后乌鲁木齐空气微生物,以可培养法分析日偏食对其细菌群落组成的影响。结果如下：（1）细菌数量和种类均随日偏食临近而增多,当天达到峰值,随后减少。（2）所获81株细菌经测序及系统发育分析将其归为四个门,分别为放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes),其中放线菌门为优势类群,占细菌总数的54%。（3）不同采样时间细菌群落组成的聚类分析显示,日偏食发生前日（21日）和当日（22日）空气细菌组成较为相似聚为一类,其余日期的聚为一类。（4）典型相关分析(Canonical Correlation Analysis, CCA)发现,放线菌门中菌株与绝大多数大气环境因子呈正相关性;变形菌门和厚壁菌门与大多数大气环境因子呈正相关性;而拟杆菌门中的菌株只与温度、风速和太阳风速度呈正相关。结果表明,日偏食会增加乌鲁木齐空气可培养细菌的数量和种类。     

耐盐促生细菌Rs-198的鉴定及其与Rs-5混合培养研究

目的:对具有耐盐促生作用的细菌Rs-198进行鉴定,并研究耐盐促生细菌Rs-198和Rs -5在混合培养中的相互作用.方法:利用菌株的形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列同 源性对菌株Rs-198进行鉴定;根据菌株Rs-5和Rs-198的拮抗共生性和生长周期特性确定混合 培养温度;通过分析不同接种方式下单独培养和混合培养中葡萄糖的残余量、生物量的生成 及pH的变化,揭示混合培养的相互作用.结果:菌株Rs-198初步鉴定为荧光假单孢菌(Pseudomonas fluorescens);Rs-198和Rs-5混合培养温度为28℃;不论按等体积混合,还是按浓 度比为107∶106,106∶106,105∶106混合,两菌种均具有协同增长作用,当接种浓度相当 时(106∶106),混合培养的活菌数是单独培养活菌数总和的3.1倍,此时协同增长作用最显 著.结论:两菌株存在协同增长作用,为今后的混合培养和复合菌肥的研制提供了理论依据.