中国对虾两种球状病毒的免疫检测

以江苏、河北某虾场病虾组织中提取的对虾的两种球状病毒作为抗原,制备出特异性强、效价较高的抗血清,用对流免疫电泳,酶联免疫吸附,免疫电镜技术对五个不同地区的病虾材料进行检测,结果表明：江苏、青岛、河北地区的病虾组织中均含有相应的球状病毒病原。     

茶毛虫核型多角体病毒的血清学特性

用免疫双扩散、对流免疫电泳、酶联免疫吸附试验(ELISA),固相免疫电镜(SPIEM)等技术,对茶毛虫核型多角体病毒(EpNPV)的抗原特性及与其它10种核型多角体病毒的血清学关系进行分析。结果表明,EpNPV粒子的抗血清只能与EpNPV粒子起反应,不与EpNPV的多角体蛋白及其它10种昆虫核型多角体病毒(NPV)粒子发生交叉反应;EpNPV多角体蛋白抗血清除了和其同源的多角体蛋白起反应外,还能和其它两种NPV的多角体蛋白起反应。以上结果说明了EpNPV的结构蛋白具有较高的抗原特异性,而多角体蛋白则没有种间特异性。同时将固相免疫电镜技术应用到昆虫病毒的血清学检测中,取得了较为理想的结果。     

对虾白斑综合征病毒的细胞因子受体基因的分析与表达

在对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)的基因组中发现一个具有细胞因子受体特征的开放阅读框,该阅读框全长2022个核苷酸,编码674个氨基酸,蛋白质理论分子量为76kDa。该基因含有真核生物细胞因子gp130受体特征序列。为了研究该基因的功能,采用PCR方法从病毒基因组中扩增出基因片段,克隆到pGEM-T Easy载体中,经BamH I和Sal I双酶切后插入pET28b表达载体中。重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导后,经SDS-PAGE电泳表明在。76kDa处有目的蛋白表达。用冰浴超声波对诱导后的菌液进行处理以获得初步纯化的蛋白,作为抗原人工免疫实验兔子以获得含特异性抗体的抗血清。该基因的表达成功,为其功能的进一步深入研究奠定了基础。     

欧洲分子生物学组织（EMBO）课程通知

欧洲分子生物学(European Molecular Biology Organization, EMBO)于2004年9月13~26日在中国武汉举办关于蛋白质组学和人类疾病的课程。合办单位有中国科学院武汉病毒研究所和华中科技大学同济医学院。课程包括理论部分(第一周)和实验室操作部分(第二周)。理论部分包括:人类重要病毒性疾病,蛋白质网络和蛋白质功能研究。实验部分包括蛋白质组学技术,显微观察与操作以及DNA和蛋白质芯片。学习班理论课程公开,实验操作课程仅限20名学员。详细信息请参阅网站:http://hennig-online.net/ wolfgang/EMBOcourseWuhan.html和http://www-db.e…     

一株中华绒螯蟹呼肠孤病毒RNA1 cDNA文库构建及其RNA聚合酶基因部分序列分析

在中华绒螯蟹体内分离到一株呼肠孤病毒(命名为EsRV905株).采用Trizol试剂提取病毒核酸,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,碎胶法回收基因组各节段.随机引物法合成第一节段的cDNA文库,胶回收试剂盒去除小片段,平端连接于载体,化学转化,利用蓝白斑筛选阳性克隆子,酶切鉴定重组质粒.从基因组第一节段的重组质粒中选择2个插入片段约为1.5kb的质粒测序,结果得到包括RNA聚合酶主要特征性结构的一段序列.结果说明,这株蟹呼肠孤病毒的RNA聚合酶定位于基因组第一节段.     

一种浓缩噬藻体的反冲超滤技术

噬藻体(Cyanophage)是一类感染蓝藻的病毒,形态上同于噬菌体[1],近期的研究表明,噬藻体作为水体环境中活跃的动态因子,在控制水体初级生产力和有害藻类水华(Harmful Algal Bloom,HAB)方面可能发挥着重要的作用[2,3],甚至影响水体生态系统中食物链的结构[4],因此研究水体中噬藻体的生理生态学特性对于了解其生态功能是非常重要的,但是由于自然水体中的噬藻体浓度往往较低,难以直接对其进行定性或定量研究,所以对天然水样中的噬藻体进行高效、快速的浓缩是研究噬藻体生态地位和功能的关键和难点.     

对虾白斑综合征杆状病毒同源性比较的研究

比较我国沿海不同海域对虾白斑综合征杆状病毒三个分离株：即唐海分离株（渤海湾）、宁波分离株（东海）,深圳分离株（南海）的同源性。三个WSSV分离株基因组的限制笥内切酶（Sac Ⅰ,HindⅢ,PstⅠ）酶切多态（RFLP）以及病毒结构蛋白图谱完全一致,证实造成我国从南对北对虾爆发性流行病的对虾白斑杆状病毒为同一种病毒。利用高保真Taq酶,分别以报道的日本对虾杆状病毒（RV－PJ－PRDV）,斑节对虾白斑综合征杆状病毒（WSBV－PmNOBⅢ）基因组核酸片段特异性引物进行PCR扩增,结果均能从中国一杆状病毒（WSSV）基因组中扩增得到相应大小的PCR产物,扩增产物序列分析表明中国对虾白斑杆状病毒（WSSV）与斑节对虾白斑综合征杆状病毒（WSBV－PmNOBⅢ）,日本对虾相状RV-PJ=PRDV)同源率分别为100％与97％,其结果为证实亚洲及太平洋地区对虾白斑综合征杆状病毒为同一种病毒或同一种病毒的不同株系提供了依据。     

用简并寡核苷酸探针筛选对虾白斑综合征病毒DNA多聚酸基因片段

根据一些病毒的ＤＮＡ多聚酶氨基酸序列中特有的保守序列ＶＹＧＤＴＤ设计的简并寡核苷酸,经地高辛标记后与对虾白斑综合征病毒基因库克隆杂交,筛选出一段长度为７０７ｂｐ的ＥｃｏＲＩ基因片段,该片段在一个开放阅读框内。并含ＤＮＡ多聚酶Ｂ家族特有的保守序列ＹＧＤＴＤＳ。经与基因库比较,其氨基酸序列与藻类ＤＮＡ病毒科（Ｐｈｙｃｏｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）的几株藻类病毒的ＤＮＡ多聚酶片段有部分相似,因此推测该核苷酸片     

对虾白斑综合征杆状病毒同源性比较的研究

比较我国沿海不同海域对虾白斑综合征杆状病毒三个分离株即唐海分离株（渤海湾）,宁波分离株（东海）,深圳分离株（南海）的同源性。三个WSSV分离株基因组的限制性内切酶(Sac I,Hind III,Pst I)酶切多态（RFLP）以及病毒结构蛋白图谱完全一致,证实造成我国从南至北对虾爆发性流行病的对虾白斑杆状病毒为同一种病毒。利用高保真Taq酶,分别以报道的日本对虾杆状病毒（RV-PJ＝PRDV）,斑节对虾白斑综合征杆状病毒（WSBV＝PmNOBIII）基因组核酸片段特异性引物进行PCR扩增,结果均能从中国对虾白斑杆状病毒（WSSV）基因组中扩增得到相应大小的PCR产物,扩增产物序列分析表明中国对虾白斑杆状病毒（WSSV）与斑节对虾白斑综合征杆状病毒（WSBV＝PmNOBIII）,日本对虾杆状病毒（RV－PJ＝PRDV）同源率分别为100％与97％,其结果为证实亚洲及太平洋地区对虾白斑综合征杆状病毒为同一种病毒或同一种病毒的不同株系提供了证据。     

中华绒螯蟹二株呼肠孤病毒的初步研究

在研究中华绒螯蟹病害的过程中,分离到两株呼肠孤病毒(分别命名为EsRV816和Es RV905).EsRV816从江苏某养殖场分离,EsRV905从武汉某养殖场分离.EsR V816和EsRV905 的病毒粒子为球状对称结构,大小分别为65nm和55nm.病毒粒子基因组分别为10和12个 节段的双链RNA.根据它们的宿主范围、基因组节段数及电泳型,这两种病毒很可能属于呼肠孤病毒科的两个新属.