丹参酮Ⅱ-A在RAW264.7细胞系中的抗炎症作用机制

目的:丹参酮Ⅱ-A是丹参的一种重要成分。研究丹参酮Ⅱ-A的抗炎症机制。方法:以小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7作为药物刺激靶细胞,使用不同浓度的分析纯丹参酮Ⅱ-A对RAW264.7细胞系进行刺激,在细胞被刺激24、48h后,使用MTT比色法和半定量RT-PCR法对刺激后的细胞进行检测。结果:通过MTT比色法检测,发现丹参酮Ⅱ-A抑制炎症细胞的增殖,初步计算出丹参酮Ⅱ-A的半抑制浓度(IC50)为43.2μmol/L;在半定量RT-PCR实验中发现,在发生炎症后,丹参酮Ⅱ-A通过抑制磷脂酶A2来减轻炎症。结论:在炎症发生后,丹参酮Ⅱ-A通过抑制磷脂酶A2来达到其抗炎症的作用。     

两种树脂基托细菌粘附情况的比较

目的比较BPS注塑树脂和热凝基托树脂表面细菌粘附能力的大小。方法将BPS注塑树脂和热凝基托树脂试件进行细菌体外粘附实验,采用菌落形成单位计数法测定血型链球菌、粘性放线菌和白色念珠菌粘附量的大小。结果培养24h、48h、168h后,各BPS注塑树脂试件组的细菌粘附量均少于热凝基托树脂试件组。结论BPS注塑树脂较热凝基托树脂更能减少血型链球菌、粘性放线菌和白色念珠菌在其表面的粘附。     

SV40 TAg转基因小鼠模型的建立及其表达

为了建立中枢神经系统肿瘤小鼠模型,构建了大鼠神经元特异性烯醇化酶(ratneu-ron-specificenolase,NSE)基因启动子调控下的猿猴病毒40大T抗原基因(simianvirus40largeTantigengene,SV40TAg)转基因载体,通过受精卵雄原核显微注射的方法制备转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型;RT-PCR和Northern印迹检测转基因阳性鼠中SV40TAgRNA水平的表达及其组织特异性;免疫组化检测其蛋白质水平的表达。经显微注射共获得9只首代转基因阳性鼠(首建者,Founder小鼠),其中2例出生时即发生神经干细胞来源的肿瘤,其他Founder小鼠经繁育后共建立了5个SV40TAg转基因小鼠系,其中有4个系检测到SV40TAgRNA水平的表达且特异性地表达于脑组织,但未检测到蛋白质水平的表达。研究表明NSE启动子活性具有较强的组织特异性,并起始于小鼠胚胎发育期;SV40TAg具有明显的致癌作用,且SV40TAg诱发的神经系统肿瘤易造成转基因小鼠早期死亡。     

肝细胞癌根治性切除术后预后因素分析

目的:探讨影响肝细胞癌患者根治性术后预后相关因素。方法:回顾性分析2004年1月1日至2009年12月31日245例我院行根治性切除术的肝细胞癌患者,采用Kaplan-Meier法和Cox比例风险模型分析临床资料、手术过程、病理特征与预后的关系。结果:多因素分析结果显示术前AFP水平、术中出血量、TNM分期是影响无进展生存时间和总生存时间的独立风险因素。术前AFP水平越高、术中出血量越大、TNM分期越晚则患者无进展生存时间及总生存时间明显缩短。此外,患者出现肿瘤组织局部坏死、门静脉癌栓,则总生存时间明显缩短。结论:术前AFP水平、术中出血量、TNM分期是外科根治性切除术后肝细胞癌患者复发及死亡的相关因素,对于临床医师判断预后及延长术后生存时间具有重要的临床意义。     

Pd-1基因敲除小鼠构建及初步表型验证

目的:细胞程序性死亡蛋白(programmed death ligand-1,PD-1)是机体T细胞的免疫检查点,也是肿瘤治疗的重要靶点。采用CRISPR/Cas9技术,利用非同源重组修复引入突变的方式,使基因蛋白读码框移码造成PD-1功能缺失,建立Pd-1基因敲除小鼠模型,为深入探究Pd-1基因功能及作用机制提供基础。方法:针对Pd-1基因2-4号外显子设计并合成2对sgRNA片段,与编码Cas9片段共同体外转录,通过受精卵显微注射方法将两者mRNA混合注射到C57BL/6小鼠受精卵中,经PCR产物测序鉴定获得F0代小鼠,之后与野生型C57BL/6小鼠交配获得F1代杂合子小鼠,F1代小鼠自交即获得F2代纯合子小鼠品系(Pd-1^-/-)。刀豆蛋白(concanavalin A,ConA)刺激Pd-1^-/-小鼠后,通过实时荧光定量PCR和流式细胞技术在mRNA和蛋白水平上分别检测Pd-1^-/-小鼠中Pd-1基因在转录和翻译过程中的表达情况,并通过ELISA方法检测Pd-1^-/-小鼠血清中IL-6、IFN-γ、IL12/IL23及TNF-α等因子的表达水平,初步分析Pd-1通路在T细胞反应调控中的作用机制及对免疫刺激的响应情况。结果:PCR及测序结果表明在小鼠基因组中Pd-1基因2-4号外显子被成功敲除;Real-Time PCR实验和流式检测结果显示:与野生型小鼠相比,Pd-1^-/-小鼠脾、肠系膜淋巴结、胸腺和血液各组织中Pd-1表达水平均显著降低;双抗夹心ELISA测定结果显示:Pd-1敲除后经ConA刺激,血清中IL-6和IFN-γ表达上调。结论:成功构建Pd-1基因敲除小鼠模型。Pd-1缺失能够上调IL-6和IFN-γ对ConA刺激的响应,增加ConA引起的炎症反应,为Pd-1的体内基因功能研究提供了新的小鼠模型和研究思路。     

Xive种植体周龈下可疑致病菌变化的1年观察

目的研究一年内Xive种植体周常见致病菌的变化情况,为种植体的定期维护提供理论基础。方法临床选取32名种植患者的44枚种植体,记录了修复后1个月,修复后3个月,修复后6个月,修复后12个月四个时段,入选种植牙的菌斑指数（PLI）,牙龈指数（G1）,牙龈出血指数（GBI）,探诊深度（PD）;采用产黑菌、放线菌、具核梭杆菌及厌氧菌的选择性培养基对龈下菌斑标本进行了分离培养。结果随时间延长,种植体周几种龈下菌的检出量除牯放菌外不断增加,1个月到3个月时增加的趋势最为明显,到6个月左右趋于稳定。厌氧菌总数、产黑菌、核梭菌、粘放菌的统计值在1个月和3个月、3个月和6个月比较差异有显著性,但在6个月和12个月比较差异无显著性。各临床指标和X-线指标随时问的变化差异无显著性。结论在临床工作中,应注意加强修复后3个月时种植患者的口腔维护,防止种植体周围炎的发生,提高种植成功率。     

肿瘤宿主的免疫状态 Ⅲ.带Ehrlich实体瘤小鼠脾脏细胞在体外对肿瘤细胞的细胞静止效应的动态观察

应用5-~(125)碘-2’-脱氧尿嘧啶核苷(~(125)IUdR)参入抑制试验,证明带Ehrlich实体瘤的C57BL 小鼠脾脏细胞可在体外对同一移植肿瘤细胞的DNA 合成产生显著的抑制。随着肿瘤的增长,带瘤小鼠的脾脏进行性增大,脾细胞对肿瘤细胞的抑制效应也随之增强。这种对肿瘤细胞DNA合成的抑制作用是非特异的。肿瘤切除后,抑制效应也随之下降,到术后21天,细胞静止效应已不能测得。本文还应用~(125)IUdR技术同时测定了带瘤小鼠脾脏的T 杀伤细胞,脾脏淋巴细胞对致分裂原Con A 与PWM 的转化反应的动态变化,实验表明带瘤小鼠脾脏T、B 淋巴细胞的功能是受抑制的。组织病理学观察提示,带瘤动物脾脏的网织细胞和巨噬细胞的增多可能与细胞静止效应的增强有关。     

PTEN蛋白表达与前列腺癌病理分期的关系

目的:探讨PTEN蛋白在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学S-P方法,检测前列腺癌及良性前列腺增生组织中PTEN蛋白的表达。结果:PTEN蛋白表达阳性随肿瘤细胞病理分级、临床分期的增高,PTEN蛋白阳性表达率降低。结论:PTEN蛋白异常表达在前列腺癌的进展中有重要作用,检测PTEN蛋白的表达有助于判断病情及预后。     

白藜芦醇通过上调SIRT1/RUNX2表达促进多发性骨髓瘤病人骨髓间充质干细胞成骨分化

骨髓瘤骨病(myeloma bone disease,MBD)是多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)最主要的并发症之一.骨髓瘤骨病骨损伤发生的病因是肿瘤细胞浸润以及骨髓微环境改变等因素导致的破骨细胞活化和成骨细胞抑制.骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell...     

甲基沿阶草酮甲对干眼症小鼠的治疗作用及机制

摘要 目的：探讨甲基沿阶草酮甲（Methyl ophiopogonanone A,MOA）对干眼症（Dry eye disease,DED）小鼠的治疗作用及机制。方法：将雄性BALB/c小鼠（7~8周龄,体重18-22 g）随机分为5组（n=12）：对照组、DED组、DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组。对照组为正常小鼠,其他组小鼠双眼滴入质量浓度为0.2%的苯扎氯铵溶液诱导DED模型小鼠,每日1次,连续6周。建模后,对照组和DED组小鼠腹腔注射0.5 mL的1%二甲基亚砜溶液,DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组小鼠依次腹腔注射0.5 mL剂量为10、20和40 mg/kg的MOA,每天1次,共给药28天。治疗结束后,检测各组小鼠的泪液分泌量和角膜荧光素钠染色分级,并进行角膜苏木素伊红（Hematoxylin and eosin,HE）染色、结膜过碘酸-雪夫（Periodic acid-Schiff,PAS）染色和角膜TUNEL染色。通过Western blot检测角膜K10蛋白表达水平。检测角膜氧化应激指标丙二醛（Malondialdehyde,MDA）和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）水平。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测角膜中肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bcl2-associated X,Bax）和B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）的mRNA水平。结果：与对照组比较,DED组小鼠的泪液分泌量降低（P<0.05）,角膜荧光素钠染色分级升高（P<0.05）,角膜出现明显病变,结膜杯状细胞数量降低（P<0.05）。角膜Bcl-2 mRNA相对表达量、SOD水平降低（P<0.05）,角膜TUNEL阳性率、Bax mRNA相对表达量、K10蛋白相对表达量、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05）。与DED组比较,DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组的泪液分泌量升高（P<0.05）,角膜荧光素钠染色分级降低（P<0.05）,角膜病变减轻,结膜杯状细胞数量升高（P<0.05）。角膜TUNEL阳性率、Bax mRNA、K10蛋白相对表达量、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（P<0.05）,Bcl-2 mRNA相对表达量、SOD水平升高（P<0.05）。结论：甲基沿阶草酮甲有效减轻干眼症小鼠的症状及眼表病变,其机制可能与抑制杯状细胞凋亡和氧化应激及炎症反应有关。