利用慢病毒载体建立fractalkine基因敲低的HK-2稳定细胞株

目的利用慢病毒载体建立fractalkine(FKN)基因敲低的HK-2稳定细胞株,为探讨FKN基因在肾脏组织肾小管上皮细胞转分化(EMT)重构中的作用奠定实验基础。方法通过双酶切将FKN目的基因连接到GV248载体(hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin),经扩增、转化、验证、测序、质粒抽提,将携带目的基因的工具GV248载体质粒及病毒包装辅助质粒Helper1.0、Helper2.0转染293T细胞,完成慢病毒包装及质量检测后获取慢病毒工具载体LV-FKN-RNAi,病毒感染HK-2细胞72h后筛选稳定表达的细胞株HK-2/LV-FKN-RNAi,采用Western blot测定FKN的表达水平,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果经对比,构建LV-FKN-RNAi阳性克隆序列与目的基因FKN相符;HK-2细胞达到80%感染效率的最佳感染条件为:在Enhanced Infection Solution(ENi.S)培养基中进行感染,设定感染复数(MOI)为10,感染时间为72h。Western Blot结果显示,经筛选的HK-2/LV-FKN-RNAi细胞中FKN基因表达水平降低;细胞形态成梭形,多有伪足出现。CCK-8检测显示,FKN基因敲低组细胞活力降低;流式细胞术检测显示,FKN基因敲低组细胞凋亡率增加。结论本研究成功构建一种低表达FKN基因的慢病毒载体;LV-FKN-RNAi感染HK-2细胞后可实现目的基因的低表达,并且FKN基因敲低后HK-2细胞活力下降,凋亡率增加。经筛选的HK-2/LV-FKN-RNAi细胞株可用于后续实验研究。     

GC7在炎症及缺氧缺血性相关疾病中的作用

临床上,炎症和缺氧缺血与大多数疾病的病情严重程度及预后等密切相关。真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A, EIF5A)在线粒体代谢功能的调节及促炎因子的释放中发挥重要作用,影响炎症及缺氧缺血的发生发展。N1-甲眯基-1,7-二氨基庚烷GC7(N1-guany1-1,7-diaminohep-tane)是EIF5A活化中的关键酶[脱氧羧腐胺赖氨酸合酶DHS(deoxyhypusinesynthase)]的抑制剂,可以通过抑制EIF5A的活性,进一步稳定线粒体功能,预防有毒活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成,减少炎症因子的释放,从而改善脑卒中、肾移植、肾缺血等缺氧缺血相关疾病和炎症相关疾病的症状。所以,GC7有望成为临床上治疗炎症和缺氧缺血相关疾病的不错选择。本文对GC7在炎症和缺氧缺血相关疾病中的作用及机制进行综述。     

响应面法优化中性氧化铝对积雪草提取物的脱色工艺研究

目的：利用响应面法优化中性氧化铝对积雪草提取物的脱色条件。方法：以积雪草提取物脱色率为主要评价指标,设计单因素和响应面试验,并结合积雪草总苷含量及其回收率综合考察中性氧化铝的用量、脱色时间、脱色温度、酸碱度（pH）对积雪草提取物的脱色效果的影响。结果：以积雪草总苷含量65.4%的棕黄色积雪草提取物为原料,得到最优的脱色条件为：中性氧化铝用量为积雪草提取物原料用量的8倍、脱色时间为25.7 min、脱色温度为50.7℃、pH为6。原料脱色后产品呈白色,脱色率为81.1%,且积雪草总苷含量为74.9%,总苷回收率为76.4%。结论：经响应面法优化脱色条件后,积雪草提取物的脱色效果显著,可为积雪草提取物的品质提升和开发利用提供一定的参考依据。     

非生物胁迫和植物激素对与水稻OsRac5结合的含CC域蛋白编码基因OsMY1和OsMY2表达的影响

ROP(Rho of plant)作为植物中唯一具有信号传递功能的小GTP结合蛋白,在极性生长、发育和环境应答等过程中具有重要作用.本文采用酵母双杂交技术,从水稻 幼穗筛选出2种与水稻ROP家族成员OsRac5互作蛋白的基因OsMY1和OsMY2.序列分析显示,OsMY1与OsMY2的核苷酸、氨基酸序列的相似性分别为14%和49%,均含有卷曲螺旋结构域;GST pull down分析显示,OsMY1可以和激活型OsRac5在体外结合;实时定量PCR分析显示,OsMY1和OsMY2在水稻生长发育时期的根、茎、叶中广泛表达,尤其在幼穗中的表达量显著高于其它组织.干旱、低温、高盐等非生物胁迫和植物激素吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、赤霉素（GA）处理能不同程度地上调OsMY1和OsMY2 基因在水稻幼苗中的表达,但油菜素内酯（BR）、水杨酸（SA）、6-苄氨基嘌呤 （6-BA）对2种基因的表达没有显著的影响.本文为进一步研究OsMY1和OsMY2基因在水稻生长发育、植物激素和胁迫应答中的功能提供了重要依据,为研究OsMY1、 OsMY2和OsRac5蛋白质相互作用的功能联系和作用机制奠定了基础.     

GUS报告系统在植物基因功能研究中的应用和优化

β-葡糖醛酸酶(GUS)报告系统是现代分子生物学研究领域中被广泛使用的一种重要工具,在解析基因时空表达调控的研究中发挥着重要作用.本文概述了报告基因GUS的生化特性及检测手段,从启动子元件鉴定、基因诱捕、无标记转基因技术等方面论述GUS的应用现状和优势,并针对内源GUS、GUS抑制因子等问题和改进优化手段进行了分析,为该技术在植物功能基因研究中进一步拓展提供新线索和思路.     

灵芝悬浮培养中添加微颗粒Talc对灵芝酸产生的影响

灵芝酸是灵芝中重要的药理活性物质,其低产量限制了它的广泛应用和深入研究,高效提高液体发酵中灵芝酸的含量十分必要。以CGMCC 5.65为材料,在悬浮培养条件下,研究添加微颗粒Talc对灵芝酸产生的影响。结果表明,微颗粒Talc添加显著减小了灵芝细胞粒径,对照组为(3.33±0.16)mm,15g/L微颗粒Talc添加组为(2.04±0.12)mm。灵芝细胞中单体灵芝酸和总灵芝酸的含量在微颗粒Talc添加条件下也显著提高。15g/L微颗粒Talc添加组的总灵芝酸含量达到(1.51±0.02)mg/100mg细胞干重,GA-Mk、GA-T和GA-Me的含量最高为(6.02±0.29)、(5.08±0.14)和(1.71±0.09)μg/100mg细胞干重,分别是对照的1.6、4、1.9和1.4倍。另外,15g/L微颗粒Talc添加条件下鲨烯和羊毛甾醇的最大积累量分别为(3.69±0.23)和(34.86±6.41)μg/100mg细胞干重,是对照的2.6和4.2倍;灵芝酸生物合成途径关键基因fps和cyp-5150l8的表达量最高为对照的2.35和1.53倍。     

脑脊液乳酸和血清降钙素原及C反应蛋白对小儿细菌性脑膜炎的诊断价值

目的 探讨脑脊液乳酸、血清降钙素原及C反应蛋白对小儿细菌性脑膜炎的诊断价值。方法 选取我院2016年4月至2017年6月收治的50例细菌性脑膜炎患儿以及50例病毒性脑膜炎患儿进行作为研究对象,比较2类患儿脑脊液乳酸（LA）、血清降钙素原（PCT）及C反应蛋白（CRP）的水平,并分析其诊断价值。结果 细菌性脑膜炎组患儿脑脊液LA、血清PCT及CRP水平显著高于病毒性脑膜炎患儿（均P<0.05）。血清PCT诊断的灵敏度和特异度最高（96.4%、90.9%,P<0.05）。3项指标联合检测的灵敏度（100.0%）和特异度（95.5%）明显高于任一单项指标（均P<0.05）。经过Pearson相关性分析,脑脊液LA、血清PCT及CRP与小儿细菌性脑膜炎均呈显著正相关关系（均P<0.05）。结论 脑脊液乳酸、血清PCT及CRP对小儿细菌性脑膜炎的诊断和治疗效果监测有重要应用价值。     

CDH13在恶性肿瘤中的研究进展

T-钙黏蛋白(T-Cadherin/H-Cadherin,CDH13)是非典型的钙黏素家族中的一员。研究发现,CDH13广泛分布于正常细胞表面,而在肺癌、乳腺癌、宫颈癌等多种恶性肿瘤中表达下调,并证实与肿瘤的不良预后有关。在肿瘤中CDH13的再表达可抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭。这些特性表明,CDH13可能成为恶性肿瘤风险评估和监测预后的新的分子生物学标志。现就近年来CDH13在恶性肿瘤中的研究进展进行综述。     

麦蓝菜的花粉母细胞减数分裂及核型分析

采用压片法,对麦蓝菜的花粉母细胞减数分裂及体细胞核型进行了研究。结果表明,麦蓝菜的绝大多数花粉母细胞减数分裂中染色体的行为正常,在终变期同源染色体配对后可形成15个二价体;在少数花粉母细胞减数分裂中观察到落后染色体、染色体桥等异常行为;其减数分裂为同时型,其花粉粒育性为88.04%。麦蓝菜的染色体数目为2n=2X=30,核型公式为K(2n)=2X=30=22m(2SAT)+8 sm,染色体相对长度组成为2n=16M2+14M1,其核型为"1A"型。     

基于几何形态学方法的秦巴山区中华蜜蜂翅形态变异研究

【目的】本研究拟揭示陕西省秦巴山区的中华蜜蜂Apis cerana cerana翅形态变异规律,为研究中华蜜蜂种下形态分化提供依据。【方法】基于几何形态测量学方法对陕西省秦巴山区17个样地的中华蜜蜂前翅进行量化分析,并结合主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)、典型变量分析(Canonical variate analysis,CVA)、薄板样条分析(Thin-plate spline,TPS)等方法探讨该地区中华蜜蜂形态分化规律及影响因素。【结果】不同采样地的中华蜜蜂种群在翅大小上存在显著性差异,同时翅大小与所处地理位置存在显著的相关性。前翅形态变异主成分分析结果显示来自秦岭北坡的5个种群与秦岭南坡以及巴山地区的种群在PC1方向上存在一定的分化。TPS分析结果显示北坡5个采样地种群具有较宽的翅。马氏距离和普氏距离结果均显示秦岭北坡种群与秦岭南坡种群以及巴山种群之间均存在显著性差异,且秦岭南坡种群与巴山种群之间的差异较小。普氏距离随着地理距离的增大而变大,但南北坡之间存在一定的差异。【结论】翅大小与其所处地理位置存在明显的相关性,海拔和纬度上的差异是造成翅大小变化的主要因素。处于秦岭北坡的种群与秦岭南坡以及巴山地区中华蜜蜂种群出现一定程度的翅脉形态分化。