不同培养时期的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌间发生的跨属自然遗传转化

携带穿梭质粒的大肠杆菌与作为受体的枯草芽孢杆菌分别培养至不同生长阶段混合均匀后静置40min,涂布选择性平板,37℃培养30h后得到一定数目的转化子,DNaseⅠ敏感实验证实质粒是通过自然遗传转化而非其它形式发生转移。实验发现大肠杆菌可以在特定生长时期向胞外分泌DNA,并且在对数期具有最高的提供质粒的能力,而生长后期的细胞因为体系中DNase量的增加转化频率下降。进一步的研究发现枯草芽孢杆菌在营养丰富的LB培养基中也具有与基本培养基中相当的转化能力,并且在对数生长前期具有较高的转化频率。     

使用外国教材进行《微生物学》英语教学的体会

采用Prescott等编撰的第5版(2002出版)为教材进行了两届生物类专业本科生的微生物学全英语教学,深切地体会到该书是一本内容丰富、结构灵活、重视对学生能力培养的优秀教材.教材内容将知识系统性和基础性有机结合,紧跟学科发展前沿,充分体现出先进性.对于教师建立科学的课堂讲授体系、丰富教学内容、保证教学效果发挥重要作用.采用英语原版教材全英文授课,有助于培养学生国际化视野和全球化发展的适应能力.     

沙吸附DNA的分布及转化活性

尽管自然环境中存在着大量的DNase,大分子体外DNA在土等生态环境中存在并保持转化活性。实验表明DNA被沙土吸附之后会被沙土保护而产生对DNase的抗性。然而对沙中DNA的检测多是通过PCR或者探针杂交的方法来进行,采用转化方法进行来检测的却鲜有报道。为了研究DNA释放进沙之后的分布及转化活性,建立了流过式微型离心沙柱。将20μLpUC18置于1.0g直径介于1.2~2.5mm之间的沙中,1.5mL0.1mol/LCaCl2洗脱之后再用200μLTEN缓冲液提取。结果表明吸附于沙中的DNA经提取后仍然具有生物转化活性,并且与洗脱液、提取液具有不同的转化活性和对DNase抗性,说明DNA与沙粒的结合不只是一种简单的附着,而是3种复杂的复合体结构。相对于没有沙保护而只能在室温下保留7d转化活性的DNA,在被沙吸附保护之后的DNA可以保存转化活性达35d以上。研究结果还表明在存在感受态细胞的情况下,生物释放出来的DNA并非直接与沙粒结合,而是优先与感受态细胞结合。推测认为沙吸附DNA的转化活性同DNA的构象及同感受态细胞接触的机会相关,而与DNA的浓度不直接相关。这些结果为研究环境中存在的DNA库及其与混居的微生物间的相互作用,水平基因转移及其生态效应提供了有价值的信息。     

微生物学发展的一些事件的启示

我们在编写面向２１世纪的“微生物学”教材中,对国内外微生物学教材进行了比较［１］,对我们编写的教材如何现代化也提出了一些看法［２］,而在重温微生物学发展史时,其中一些事件对我们科研、教学和开发都有所教益,对面向２１世纪的微生物学的发展,也可借鉴。因而编写出几篇小文,发表我们的感想,请批评指正。１提出问题比解决问题更重要１９２９年英国微生物学家弗莱明（Ｆｌｅｍｉｎｇ）在培养金黄色葡萄球菌时,发现一种青霉菌能抑制金黄色葡萄球菌生长,经仔细观察研究,认为是由于这种霉菌产生的代谢产物作用之故,这种代谢产…     

聚-β-羟基丁酸(PHB)在细菌建立感受态中的作用

介绍了PHB作为细胞膜上的物质运输通道成分在细菌感受态中的结构、分布、分析方法以及其可能的作用 ,阐明了PHB的合成与细菌感受态建立的关系和PHB在感受态细胞摄取外源DNA时的作用方式 ,同时也对控制生物体合成PHB的相关基因和酶作了简要介绍 ,并探讨了研究PHB的实际意义。     

RNAi生物技术作物环境风险评估研究进展

RNA干涉(RNAi)在昆虫遗传和功能基因研究方面广泛应用。近年来,RNAi被认为是具有应用潜力的害虫防治新方法。具有良好抗虫性状的RNAi生物技术作物已研究成功,预示其商业化应用成为可能。因此,有关RNAi作物的生态风险是商业化应用前人们所关心的问题。要建立RNAi生物技术作物环境安全评价准则,监管者、受益各方及风险评估者必须要了解RNAi理论及其在生物技术领域的应用。科学分析并准确提出RNAi作物的生态风险问题,如非期望的基因沉默、靶外结合或脱靶效应、靶标害虫的抗性、小干涉RNA(si RNA)的环境持久性和不确定性等,并通过研究获得科学数据,将为政府依法监管提供依据。RNAi生物技术作物的环境风险评估主要包括功能基因及其表达特征(如ds RNA序列、长度、表达浓度及沉默效果的持续性等)、杀虫谱及对非靶标生物的影响、环境中的残留问题、功能性状的持续稳定性等。现行的生物技术作物环境风险评估方法和内容需要进一步修改完善,以适应今后RNAi生物技术作物的发展和应用。     

枯草芽孢杆菌在琼脂平板上进行的自然遗传转化

本文对发生在琼脂平板上的枯草芽孢杆菌自然遗传转化进行了初步的研究。结果表明,在相同条件下,该菌在琼脂平板上的自然转化率明显高于传统液体转化,并且转化反应对ＤＮａｓｅ 的抗性增强,通常被认为不能建立感受态的ＬＢ 培养物当涂布到平板上后也很快具有了自然转化的能力,说明在固相物表面进行的转化过程与传统的液体法存在一定的差异。在琼脂平板上,也能观察到具不同遗传标记的菌株间进行的细胞间自然转化。     

二种简便迅速分离 RNA 的方法

RNA是基因表达的第一产物,但有些病毒中(如RNA病毒、反转录病毒)的遗传物质就是RNA。近年来的研究表明,某些RNA还有酶的功能,因此RNA在基因表达过程中和在生命起源的研究方面均占有重要地位。随着对RNA研究工作的迅速开展,分离RNA的方法也不断改进和完善。     

盐生盐杆菌DNA 片段RM07的-35、-10区缺失分析

RM07DNA片段分离自嗜盐古菌——盐生盐杆菌R1,该片段不仅在嗜盐古菌内具有启动子功能,而且在大肠杆菌中也具有启动子活性。序列分析表明其上确实含有细菌启动子的-35、-10保守区。进一步通过缺失分析证实该片段就是在大肠杆菌中具启动功能的DNA片段：仅含-10区而缺失-35区的RM07a片段基本上无启动活性;而含-35和-10区的0．1kb片段RM07b具有高于RM07的启动活性。研究结果还表明,RM07片段在大肠杆菌中的启动活性是受环境因素调节的,尤其是对氯化钠浓度的提高具有明显的相关性。因此RM07片段有可能成为构建双功能表达载体的新启动子资源,同时对进一步揭示古菌的融合特征及水平基因转移具有特殊意义。     

假单胞菌荧光与非荧光铁载体对铁离子的应答差异

假单胞菌既能产荧光铁载体也能产非荧光铁载体.通过对假单胞菌在不同铁离子浓度下,在通用CAS(Chrome azroul S)检测平板、改进的蔗糖-天冬氨酸(SA)平板(MSA)上以及通用液体CAS培养基和MSA培养基内的铁载体产生情况的比较,发现在通用CAS的液体培养基上产生的主要为非荧光铁载体(pyochelin),而在改进的MSA培养基上产生的主要为荧光铁载体(pyoverdine);在铁离子的应答方面,pyoverdine较pyochelin灵敏,较低的铁离子浓度即可抑制荧光铁载体的产生,但是不能抑制非荧光铁载体.